紫外可见分光光度法 (6)课件

1、关于紫外可见分光光度法 (6)第一张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月紫外-可见吸收光谱的产生紫外-可见吸收光谱与分子结构的关系测量条件的选择及显色反应基本原理第二张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月依据：被测物分子对紫外-可见光的选择吸收特性应用：确定物质的组成、含量、推测物质结构入射光I0透射光ItLambert-Beer定律基本原理第三张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月本质：分子价电子能级跃迁同时伴随振动、转动能级的跃迁紫外-可见吸收光谱的产生基本原理带状光谱、电子光谱波长范围：100-800 nm-远紫外光区: 100-200nm -近紫外光区: 200

2、-400nm-可见光区:400-800nm第四张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月电子跃迁与分子吸收光谱物质分子内部三种运动形式电子相对于原子核运动电子能级原子在其平衡位置附近相对振动振动能级分子本身绕其重心转动转动能级分子的内能：EEe+Ev+Erevr电子能量Ee 振动能量Ev转动能量Er基本原理第五张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月能级跃迁电子光谱中总包含振动和转动能级跃迁产生的若干谱线而呈现宽谱带紫外-可见电子光谱Ee =1-20 eV红外振动光谱 0.05-1 eV远红外转动光谱0.005-0.05 eV电子能级跃迁振动能级跃迁转动能级跃迁基本原理第六张，PPT

3、共一百四十三页，创作于2022年6月物质对光的选择性吸收及吸收曲线M+热M+荧光或磷光M + h M*基态 激发态 E1 （E） E2E =E2-E1 =h（量子化 、选择性吸收）基本原理第七张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月吸收曲线的讨论不同浓度的同一物质，吸收曲线形状相似、max不变吸收曲线提供结构信息，并作为定性分析依据之一同一物质对不同波长的光吸光度不同-选择性吸收基本原理不同波长单色光照射，测吸光度吸收曲线最大吸收波长 max吸光度最大处对应波长第八张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月max处吸光度随浓度变化幅度最大-最灵敏不同浓度的同一物质max处吸光度差异最

4、大-定量分析依据吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据基本原理第九张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月紫外-可见吸收光谱与分子结构的关系 有机化合物UV-Vis光谱是三种价电子跃迁的结果成键轨道反键轨道主要有四种跃迁所需能量大小顺序为：n n COHnpsHsp*s*RKE,BnpE分子轨道理论外层电子处于分子轨道的基态，即成键轨道或非键轨道吸收紫外或可见辐射后从基态向激发态(反键轨道)跃迁基本原理第十张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月分子轨道两个原子靠近结合成分子时：两个原子轨道线性组合成两个分子轨道11基本原理第十一张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月

5、反键轨道能级高于原来原子状态的能级成键轨道能级低于原来原子状态的能级n电子的能级基本上保持原来原子状态的能级12分子轨道成键轨道：低能量、反键轨道：高能量*、*非键轨道：n基本原理第十二张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月1. 跃迁所需能量最大 电子吸收远紫外能量吸收波长200nm的光与生色团相连时发生n-共轭作用增强生色团生色能力使吸收波长向长波方向移动，且吸收强度增加生色团与助色团和吸收带基本原理第二十张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月3.吸收带（absorption band）：吸收峰在紫外-可见光谱中的波带位置根据产生跃迁的价电子和轨道的不同，分为四种类型：共轭体

6、系中*跃迁所产生的吸收带吸收峰位于217280nm 跃迁所需能量大吸收强度较大通常104 Lmol-1cm-1波长随共轭体系加长向长波移动，吸收强度随之加强应用最多的吸收带用于判断化合物的共轭结构由n *跃迁所产生的吸收带吸收峰位于200400nm强度较弱一般104 Lmol-1cm-1 E2带-204nm，较强吸收， 103 Lmol-1cm-1芳香族化合物的*跃迁产生的精细结构吸收带吸收峰位于230270nm102 Lmol-1cm-1（3）B吸收带（源自德文Benzenoid “苯”）判断芳香族化合物苯环上有取代基且与苯环共轭或在极性溶剂中测定时，精细结构简单化/消失（4）E吸收带基本原

7、理第二十二张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月苯：E1带180184nm; =47000E2带200204 nm; =7000max(nm)max苯254200甲苯261300间二甲苯2633001，3，5-三甲苯266305六甲苯272300苯环共扼双键*跃迁*与苯环振动引起含取代基时B带简化并红移B带230-270 nm , =200基本原理第二十三张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月羰基双键与苯环共扼：K带强苯的E2带与K带合并且红移取代基使B带简化氧的孤对电子R带跃迁受阻，强度弱CCH3Onp*R带pp*K带E带常与K带合并且向长波方向移动B带精细结构简单化，吸收强

8、度增加且向长波方向移动苯环上有发色团且与苯环共轭时基本原理第二十四张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月25吸收带跃迁类型吸收峰区域强度产生基团特点Rn* 250500nm弱COCNNO2 1.强吸收峰在附近时，R带红移或被掩盖2.溶剂极性，R带蓝移K* 210250nm强CC 大共轭1.共轭双键数目，K红移，2.K带不被其它带掩蔽，只会掩蔽其它带B苯环骨架振动 * 230270n重心在256nm弱1.芳环特征吸收带2.五指峰，有K带时迭合成肩峰E1E2*苯环中三个CHCH组成的环状共轭系统180nm200nm强中强1.E1带紫外中看不见，不考虑2.当苯环上有共轭发色团取代时，E2带与

9、K带合并、长移，B带同时长移3.苯环上有助色团取代，E2带红移，但仍210nm基本原理第二十五张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月红移与蓝移（紫移）减小-减色效应max向长波方向移动-红移向短波方向移动-蓝移/紫移 吸收强度即摩尔吸光系数增大-增色效应基本原理第二十六张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月体系pH值溶剂效应位阻效应跨环效应影响吸收带的因素影响紫外-可见吸收光谱的因素基本原理主要取决于分子中价电子的能级跃迁分子的内部结构和外部环境也会产生影响第二十七张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月位阻效应异构现象溶剂异构顺反异构共轭异构空间位阻基本原理第二十八张，

10、PPT共一百四十三页，创作于2022年6月（1）共轭效应-发色团之间大键形成能级间能量差减小跃迁所需能量降低吸收峰向长波方向移动（红移）吸收强度增大（摩尔吸收系数变大）在单键、双键相互交替的共轭体系（以及其他类型的共轭体系）中，由于分子中原子间特殊的相互影响，使分子更稳定，内能更小，键长趋于平均化的效应。例如，普通CC双键键长为1.34埃，CC单键为1.54埃，苯分子中由于相邻的键电子轨道的交迭而成共轭，使其6个C-C键的键长都是1.39埃 基本原理空间位阻第二十九张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月助色团与发色团相连时：助色团的n电子与发色团的电子共轭吸收峰红移，吸收强度增加如乙烯

11、：max=162nm（2）助色效应基本原理第三十张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月存在于烷基连接在不饱和键上的化合物中烷基的电子与共轭体系中的电子共轭吸收峰向长波移动，吸收强度增加（3）超共轭效应超共轭效应大小由烷基中 -H 原子数目决定甲基最强超共轭效应比正常共轭效应弱影响远远小于共轭效应基本原理第三十一张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月若2个发色团由于立体位阻，妨碍它们处于同一平面，共轭效应减弱。顺式 max=280nm; max=10500反式 max=295 nm; max=29000 酮式 max=204 nm 烯醇式 max=243 nm 顺式结构有立体位阻

12、基本原理发色团发色团共轭：第三十二张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月33max (nm) 247 253 17000 19000 max (nm) 237 231 227（肩峰） 10250 5600 邻位取代基，连接两个苯环的单键扭转，两个苯环不在同一平面不能有效共轭吸收峰蓝移第三十三张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月34异构现象使紫外吸收带产生明显差异-不同异构体使紫外吸收光谱及max、均不同-原因：1.异构延长了共轭体系2.异构产生了位阻3.异构体存在形式与溶剂有关第三十四张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月35顺反异构顺式结构有立体位阻二苯乙烯顺反式异

13、构体的紫外吸收光谱第三十五张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月共轭异构鸯尾酮共轭体系大酮式 max=204 nm烯醇式 max=243 nm 鸯尾酮共轭体系小 第三十六张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月37乙酰乙酸乙酯的互变异构体与H2O形成分子间氢键结构较稳定 自身形成分子内氢键结构更稳定基态能量E酮式（极性溶剂中）烯醇式（非极性溶剂中）max(nm) 272（ n*）243 （*） 弱 强溶剂异构第三十七张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月跨环效应指非共轭基团之间的相互作用发色团处于一定的空间位置（环状体系）分子轨道间相互作用产生光谱既非两个发色团加合，也非

14、二者共轭第三十八张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月39 二环庚烯（孤立双键） max197 7600 二环庚二烯（两个非共轭双键）在200-230nm有弱、具精细结构的吸收带205，214，220，230（肩峰）2100，214，870，200 分子中两个双键相互平行 空间位置有利于相互作用 第三十九张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月40羰基与乙烯基的相互作用的跨环效应某些、不饱和酮中，适当的立体排列使羰基氧的孤电子对和双键的电子发生作用：n*引起的R吸收带长移、 (a) (b) (c)max (nm) 296 233，296，307 225，275 32 2290，3

15、07，267 1200，33 第四十张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月41第四十一张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月溶剂的极性强弱吸收峰的波长、吸收强度以及形状测定光谱一般应注明所用溶剂溶剂极性对n*和*跃迁产生吸收峰的位置有不同影响：max(正己烷)max(氯仿)max(甲醇)max(水)*230238237243n*329315309305异亚丙基丙酮的溶剂效应溶剂极性 n *跃迁：蓝移、 、 *跃迁：红移、 、基本原理可用以区别两种跃迁引起的吸收谱带溶剂效应第四十二张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月第四十三张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月

16、1：乙醚2：水12250300苯酰丙酮 非极性 极性n *跃迁：蓝移、 、 *跃迁：红移、 、极性溶剂使精细结构消失基本原理第四十四张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月基本原理第四十五张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月46溶剂极性对异丙叉丙酮的两种跃迁吸收峰的影响跃迁类型正己烷氯仿甲醇水迁移*230nm238nm237nm243nm长移n*329nm315nm309nm305nm短移在溶解度允许范围内尽可能选用非极性溶剂或极性小的溶剂原则第四十六张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月47对酸性、碱性的样品有明显影响引起吸收峰位置、吸收强度和光谱形状改变体系pH值的

17、影响max 211，270 235，287 6200，1450 9400，2600酚羟基存在吸收峰在碱性介质中红移、吸收强度增加 滴加HCl溶液，吸收峰位置和强度复原据此推断芳香族化合物是否有羟基直接连苯环第四十七张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月48max 230，280 203，254 8600，1470 7500，160苯： max(nm) 200, 255 8000, 215N上未成对电子与H离子形成配位键后吸收光谱与苯类似用该法鉴别苯胺及其衍生物 第四十八张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月491. 方法灵敏度较高 一般可测到104105g/ml 部分可达107

18、g/ml 2. 测定准确度较高 一般为 0.50.23. 不能表现整个分子的特征主要反映分子中发色团、助色团及其共轭的情况单独用紫外光谱不能确定化合物的分子结构必须与红外、核磁共振和质谱等配合紫外-可见分光光度法特点基本原理小结第四十九张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月50常用术语吸收曲线（吸收光谱）吸收峰、吸收谷最大/小吸收波长（max /min）吸收曲线上的吸收峰/谷对应波长肩峰（sh）吸收曲线上一个吸收峰旁边产生的一个曲折末端吸收 吸收曲线上短波端只呈现强吸收而不成峰形的部分强带 紫外可见光谱中摩尔吸光系数104的吸收峰弱带 紫外可见光谱中摩尔吸光系数103的吸收峰生色团 含

19、有*或n*跃迁的基团，在紫外可见光范围产生吸收助色团 含杂原子的饱和基团，可使吸收峰红移、吸收强度增加蓝移（紫移、短移） 、红移（长移） 浓/淡色效应 吸收强度增加/减弱的效应基本原理第五十张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月51基本原理第五十一张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月基本组成仪器类型紫外-可见分光光度计仪器校正第五十二张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月紫外-可见分光光度计第五十三张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月光源单色器吸收池检测器显示基本组成紫外-可见分光光度计第五十四张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月在整个紫外光区或可

20、见光谱区可以发射连续光谱有足够的辐射强度、较好稳定性、较长使用寿命1.光源-钨灯作为光源-辐射波长范围在3202500 nm可见光区：-氢、氘灯作为光源-辐射波长范围在185400 nm紫外区：紫外-可见分光光度计第五十五张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月 2.单色器将光源发射的复合光分解成单色光并中选出一任波长单色光光学系统 紫外-可见分光光度计第五十六张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月 入射狭缝：光源的光由此进入单色器准光装置：透镜或反射镜使入射光成为平行光束 色散元件：将复合光分解成单色光-棱镜或光栅聚焦装置：透镜或凹面反射镜将单色光聚焦至出射狭缝出射狭缝入射狭缝

21、准直透镜棱镜聚焦透镜出射狭缝白光红紫12800 600 500400紫外-可见分光光度计第五十七张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月3.样品室放置各种类型吸收池（比色皿）和相应池架附件石英池玻璃池紫外区可见区吸收池厚度（L）规格：0.5、1、2、3cm注意：保持透光面光洁紫外-可见分光光度计第五十八张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月定量分析前吸收池需作配对：紫外-可见分光光度计第五十九张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月4.检测器用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测电信号类型：光电池/管、光电倍增管、光二极管阵列紫外-可见分光光度计第六十张，PPT共一百四十三

22、页，创作于2022年6月61紫外-可见分光光度计第六十一张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理5. 结果显示记录系统将检测器输出的微弱电信号加以放大显示显示方式：透光率、吸光度、浓度、吸光系数、吸收曲线(光谱)紫外-可见分光光度计第六十二张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月分光光度计的类型结构简单，价格便宜在给定波长处测A或T，不能作全波段光谱扫描适用于定量分析，不适用于定性分析结果受光源的波动影响较大 要求光源和检测器具有很高的稳定性1.单光束紫外-可见分光光度计第六十三张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月仪器复杂，

23、价格较高快速全波段扫描、自动记录适用于定量分析、定性分析和结构分析可消除光源不稳定、检测器灵敏度变化等因素影响自动比较透过参比溶液和样品溶液的光强度2.双光束紫外-可见分光光度计第六十四张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月紫外-可见分光光度计第六十五张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月将不同波长的两束单色光（1、2） 快速交替通过同一吸收池而后到达检测器-无需参比池= 12nm两波长同时扫描即可获得导数光谱3.双波长紫外-可见分光光度计第六十六张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月三种不同类型分光光度计比较紫外-可见分光光度计第六十七张，PPT共一百四十三页，创作于

24、2022年6月68波长范围 195820nm波长准确度 显示波长与实际波长的误差0.5nm 波长重现性 重复同一波长的变动值0.5nm 透光率测量范围 0150%(T)吸光度测量范围 0.17302.00（A）光度准确度 透光率满量程误差为 0.5 光度重复性 重复测量透光率的变动性 0.5分辨率 单色器分辨相近谱线的能力 0.3nm（260nm）杂散光 1%NaI(220nm) 0.5% 仪器光学性能紫外-可见分光光度计第六十八张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月仪器校正-溶剂、参比或样品溶液123波长校正 吸光度校正吸收池校正-氢灯、氘灯发射谱线-镨钕玻璃、钬玻璃-苯蒸气-硫酸铜

25、标准溶液-硫酸钴铵标准溶液-铬酸钾标准溶液分光光度计的校正紫外-可见分光光度计第六十九张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月双波长分光光度法21XAYY 的存在不干扰 X 的测定第七十张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月光度法的误差显色反应与显色条件光度法的干扰测量条件的选择测量条件的选择第七十一张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月显色反应类型显色反应条件的选择显色反应与显色条件测量条件的选择显色反应的基本要求第七十二张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月1234很多物质本身无吸收或只有弱吸收紫外-可见光区：需在一定条件下加入显色剂经显色反应将被测组分转变为

26、有色化合物测定该化合物测量条件的选择第七十三张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月74显色反应选用适当的试剂与不吸收紫外-可见光的被测物定量反应生成对紫外-可见光有较大吸收的物质的反应 显色剂与不吸收紫外-可见光的被测物定量反应生成对紫外-可见光有较大吸收的物质的试剂测量条件的选择第七十四张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月有机显色剂：与金属生成稳定螯合物含有生色团和助色团：对光的最大吸收向长波方向移动偶氮类（- N=N-）显色剂：应用最广泛本身是有色物质生成配合物后颜色发生明显变化显色反应灵敏度高选择性好性质稳定对比度大无机显色剂：硫氰酸盐、钼酸铵、过氧化氢等测量条件的选择

27、第七十五张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月铬天青S邻二氮菲二苯硫腙丁二酮肟 磺基水杨酸 测量条件的选择第七十六张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月反应定量：被测组分和生成物质之间的关系确定选择性高生成物稳定灵敏度高：生成物的需达到103105无干扰：显色剂在测定波长处无明显吸收对比度：生成物与显色剂的max之差 60nm显色反应的要求测量条件的选择第七十七张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月可利用的显色反应种类：配合、氧化还原、络合1）络合反应：2）氧化还原： 测Mn或Cr时，可用氧化剂将其氧化为 比色显色反应类型测量条件的选择第七十八张，PPT共一百四十三页，

28、创作于2022年6月显色反应条件的选择-通过实验确定1）显色剂用量 吸光度A与显色剂用量CR的关系：选择曲线变化平坦处对应浓度恒定吸光度值时测量条件的选择第七十九张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月2）反应体系的酸度相同实验条件下，分别测定不同pH值条件下显色溶液的吸光度A 很多显色剂是有机弱酸或弱碱溶液酸度影响显色剂存在形式有色化合物浓度变化，溶液颜色改变对氧化还原反应、缩合反应等溶液的酸碱性也有重要影响用缓冲溶液保持溶液在一定pH值下进行显色反应选择曲线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的pH范围测量条件的选择第八十张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月813）显色时间显色

29、反应的反应速度时间一定条件下通过实验作吸收度时间关系曲线显色产物颜色保持长时间不变逐渐减退或加深一定时间才显色确定适宜显色时间测量条件的选择第八十一张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月82显色反应是化学反应温度原花青素与盐酸亚铁铵在硫酸/丙酮溶剂中的显色反应室温：显色产物吸收度极低煮沸：显色产物吸收度明显增大4）显色温度 5）溶剂-溶剂性质直接影响被测组分对光的吸收 苦味酸的水溶液呈黄色，氯仿液呈无色-显色反应产物的稳定性与溶剂有关 红色的硫氰酸铁配合物在丁醇中比在水溶液中稳定-一般尽量采用水相测定 测量条件的选择第八十二张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月83干扰现象干扰

30、物质对显色反应和测定的影响1.干扰物质本身有色/无色但与显色剂形成有色化合物光度法的干扰2.干扰物质水解析出沉淀使溶液混浊3.干扰物质水解与被测组分或显色剂形成更稳定的配合物在测定条件下有吸收显色反应不能进行完全测量条件的选择第八十三张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月消除干扰的方法主要为共存离子控制酸度选择适当的掩蔽剂生成惰性配合物选择适当的测定波长选择适宜的空白溶液预分离测量条件的选择第八十四张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月 加入掩蔽剂：选择掩蔽剂的原则-掩蔽剂不与待测组分反应；掩蔽剂本身及掩蔽剂与干扰组分的反应产物不干扰测定测定Ti4，可加入H3PO4掩蔽剂使Fe

31、3+(黄色)成为Fe(PO4)23-(无色)，消除Fe3+的干扰铬天菁S光度法测定Al3+时，加入抗坏血酸作掩蔽剂将Fe3+还原为Fe2+，消除Fe3+的干扰测量条件的选择第八十五张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月提高测定灵敏度和选择性的途径1）合成新的高灵敏度有机显色剂2）分离富集和测定相结合3）采用三元(多元)配合物显色体系 多元配合物显色反应具有很高的灵敏度：1.多元配合物比其相应的二元配合物分子截面积更大2.第二/三配位体的引入，可能产生配位体之间、配位体与中心金属离子间的协同作用使共轭电子的流动性和电子跃迁几率增大由一个中心金属离子与两种(或两种以上)不同配位体形成的配合

32、物测量条件的选择第八十六张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月23331测定波长的选择吸光度范围的控制空白溶液的选择测量条件的选择测量条件的选择第八十七张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月选择适当的入射波长一般选择max为入射波长：A ，灵敏度 ，准确度若max处有共存组分干扰，放弃灵敏度、避免干扰选择原则-吸收最大、干扰最小选择不易出现干扰吸收、吸光度较大且峰顶较平坦的波长测量条件的选择第八十八张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月控制适宜的吸光度（读数范围）浓度测量的相对误差与透光率T 的关系1.测量最适宜范围 透光率：6520 吸光度：0.20.72.浓度相对误

33、差最小 透光率： 36.8% 吸光度：0.434T =1%时通过调节溶液的浓度和吸收池的厚度来解决测量条件的选择第八十九张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月 选择合适的空白（参比）溶液空白（参比）溶液作用校正仪器的透光率100或吸光度A为零消除来自于溶剂、试剂、器皿及试样的干扰吸收测得的吸光度真正反映待测溶液吸光强度测量条件的选择第九十张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月91常见的空白（参比）溶液 溶剂空白试剂空白试样空白不显色空白平行操作空白测量条件的选择第九十一张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月溶剂末端吸收以截止波长描述小于截止波长的辐射通过溶剂溶剂对辐射有

34、吸收溶剂对测量无干扰大于截止波长的辐射通过溶剂选用溶剂应在样品的吸收光谱区内无明显吸收？能够使用的最小波长基本原理第九十二张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月 溶剂装入1cm比色皿空气为参比溶剂的吸光度A=1逐渐降低入射波长此时的波长称为溶剂的截止波长中国药典对UV法溶剂的要求：以空气为空白，溶剂和吸收池的吸收度在200240nm范围内不得超过0.40；241250nm范围内不得超过0.20251300nm范围内不得超过0.10；300nm以上不得超过0.05如何确定截止波长？基本原理第九十三张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月作参比仅待测组分在测定波长处有吸收纯溶剂试剂空

35、白其它试剂在测定波长处略有吸收，试液本身无吸收试样空白待测试液在测定波长处有吸收，而其它试剂无吸收试液+掩蔽剂+显色剂显色剂、试液中其它组分在测量波长处有吸收空白（参比）溶液的选择原则测量条件的选择第九十四张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月95测定波长选择在被测组分最大吸收波长处测量值吸光度A在0.20.7范围内合理选择空白溶液小结测量条件的选择第九十五张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月定性分析定量分析结构分析分析方法第九十六张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月1.主要依据 吸收光谱形状吸收峰数目各吸收峰的波长位置 吸收强度定性分析分析方法第九十七张，PPT共

36、一百四十三页，创作于2022年6月对比法对比吸收光谱特征数据max对比吸光度（吸光系数）比值A1/A2对比吸收光谱的一致性2.定性鉴别的方法分析方法第九十八张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月99安宫黄体酮（M386.53） 炔诺酮（M298.43） max2401nm max2401nm 408 571分析方法第九十九张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月100 分析方法第一百张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月101结构完全相同的化合物应有完全相同吸收光谱吸收光谱相同的化合物不一定是同一个化合物吸收光谱明显差别的化合物肯定不是同一物质结论紫外吸收光谱数据或曲线进

37、行定性鉴别有一定的局限性光谱只有一个或几个宽吸收带，相同或相似的光谱较多单独用紫外不能确定物质结构，需与IR/MS/NMR结合分析方法第一百零一张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月102定量分析定量分析依据定量分析方法光吸收定律（L-B定律）A=KLc1)单组分样品的定量方法 2)多组分样品的定量方法计算分光光度法分析方法第一百零二张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月1031)单组分样品的定量方法基本要求1. 符合L-B定律 -物质在一定波长处的吸收度与浓度之间呈线性关系2.被测组分最大吸收波长作测定波长3. 溶剂在测定波长处无吸收分析方法第一百零三张，PPT共一百四十三页

38、，创作于2022年6月104溶剂的极限波长选择溶剂时，被测组分的测定波长必须大于溶剂的截止波长溶剂极限波长溶剂极限波长溶剂极限波长乙醚21896%硫酸210氯仿245环己烷200乙醇210四氯化碳260正丁醇2102,2,4三甲戊烷220蚁酸甲酯260水200对二氧六环220苯260异丙醇210正己烷190甲苯285甲基环己烷210甘油230吡啶305二硫化碳3851,2二氧己烷233丙酮330甲醇205二氯甲烷235乙酸乙酯260分析方法第一百零四张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月105单组分样品的定量方法1. 标准曲线法2. 标准对照法3. 吸光系数法 4. 示差光度法分析方法

39、第一百零五张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月106（1）标准曲线法 配制一系列浓度不同的标准溶液.分别测其吸收度以浓度为横坐标，相应的吸收度为纵坐标，绘制AC曲线或计算回归方程在相同条件下测定样品溶液的吸光度，从标线上或用回归方程求得样品浓度分析方法第一百零六张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月107注意事项标准溶液至少要5点A样必须包括在标线范围内样品和对照品须使用相同溶剂和显色系统、相同条件测定固定仪器和方法后，标线可多次使用，但要定期校正影响标准曲线不通过原点的原因 空白溶液的选择不当显色反应的灵敏度不够吸收池的光学性能不一致 分析方法第一百零七张，PPT共一百四十

40、三页，创作于2022年6月108（2）对照法 相同条件分别测量吸光度：A标KLc标A样KLc样 注意事项标准曲线要过原点仪器单色光纯度要高C样与C标要接近分析方法第一百零八张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月109已知 L和吸光系数或 ，可根据测量值 A 值求被测物浓度注意事项用 -c 为g/100ml用-c 为mol/L（3）吸光系数法分析方法第一百零九张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月110中药蟾酥中脂蟾毒配基的含量测定精密称定试样0.472g，索氏提取后，滤液置100ml量瓶中，精密量取1ml置25ml量瓶中，加乙醇稀释至刻度。用1cm石英池在299nm波长处测得吸

41、光度为0.459，计算脂蟾毒配基的百分含量。（已知E标154）分析方法第一百一十张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月111解：法：先求试样中纯品浓度 试样浓度 结果分析方法第一百一十一张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月112法：先求试样的百分吸光系数结果 分析方法第一百一十二张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月113定义：用一与供试品浓度接近的标准溶液，代替空白溶液作参比，与供试品溶液进行比较的方法基本原理：供试品溶液与参比溶液的吸光度( A )与两溶液的浓度差成正比适用范围：高含量、稀溶液、高精度实质：透光率在表尺上的扩展（4）差示光度法-A法分析方法第一百一

42、十三张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月1142)多组分样品的定量方法计算分光光度法样品中有两种或两种以上组分共存时根据吸收光谱重叠的情况分别采用不同的测定方法第一种：按单组分测定方法第二种：根据吸光度加和性原理计算出b的浓度Cb 第三种：计算分光光度法分析方法第一百一十四张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月115(1)解线性方程组法(2)双波长分光光度法(3)三波长测定法(4)导数光谱法(5)正交函数法计算分光光度法分析方法第一百一十五张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月116分别测定a、b两组分在1和2处各自的吸光系数E或。测定a、b两组分混合液在1和2处的A

43、1a+b与A2a+b解线性方程组法计算出a、b两组分的浓度(1)解线性方程组法要求两组分浓度相差不大分析方法第一百一十六张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月117等吸收点法系数倍率法(2)双波长分光光度法利用两束不同波长的单色光1和2，以1为参比波长、 2为测定波长，测定同一样品，可得两波长间的吸光度值之差与被测组分浓度成正比原理分类分析方法第一百一十七张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月118等吸收点法分析方法第一百一十八张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月119等吸收点的选择：确定a为被测组分，b为干扰组分选被测组分的最大吸收波长为测定波长2从干扰组分曲线在2

44、处的交点引平行线交于干扰组分曲线的另一点，该点的波长即为1选择1和2的原则： 1. 干扰组分b应具有相同的吸光度，即 2. 待测组分吸光度差值A 应足够大分析方法第一百一十九张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月120根据吸光度加和性原则：因为所以从式中可见：被测组分浓度Ca只与其在两个波长处的吸收度有关分析方法第一百二十张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月121系数倍率法适用情况干扰物质的吸收曲线无明显吸收峰（如图中5、6、7、8、9、10图谱中的虚线），无法找出等吸收波长，不能运用等吸收点法分析方法第一百二十一张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月122在干扰曲线

45、Y上选择两个波长1和2被测组分在这两个波长处的吸光度差值A 要尽可能大掩蔽系数K=Ay1/Ay2测定原理分析方法第一百二十二张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月123令KAy2=Ay1，则A2K(AX2+Ay2) A1AX1+Ay1 AA2A1 K(AX2+Ay2)-(AX1+Ay1) （KAX2-AX1)+(KAy2-Ay1) （KEX2-EX1)CX K CX结果表明： A与被测组分CX成正比分析方法第一百二十三张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月124注意1.选择两个波长1和2时，应使被测组分在这两个波长处的吸光度差值A 尽可能大。2.掩蔽系数K的引入，使干扰组分和被

46、测组分的测定都放大了K倍，提高了检测灵敏度，但K值过大，会使噪声增大。当K值1时，系数倍率法就是等吸收点法。分析方法第一百二十四张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月125配制一系列被测组分的标准溶液，在1和2处测得A1和A2，得出A标。以C标为横坐标，A标为纵坐标，绘制标准曲线。测得被测组分样品溶液的A1和A2，得出A样，根据标准曲线求得C样，计算含量。等吸收点法和系数倍率法的测定步骤分析方法第一百二十五张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月126依据发色团之间的共轭关系及共轭体系中取代基的种类、位置及数目与吸收带强度、位置的规律结构分析分析方法第一百二十六张，PPT共一百四十三页，创作于2022年6月127有机化合物分子结构研究简介有机化合物的紫外吸收光谱主要取决于分子中发色团、助色团及它们的共轭情况，并不能表现整个分子的特性。单独