小儿清热利肺口服液中总绿原酸的含量测定方法研究

1、小儿清热利肺口服液中总绿原酸的含量测定方法研究【关键词】小儿清热利肺口服液;高效液相色谱法;绿原酸;含量测定Keyrds:XiaerQingreLifeiralslutin;HPL;hlrgeniaid;deterinatin小儿清热利肺口服液由银翘散和麻杏石甘汤2个古方合方化裁而成，处方由金银花、连翘、牛蒡子、麻黄、等11味中药组成1，主治外感风热邪在肺卫或卫气同病之风热咳嗽，用于发热、咳嗽，咯痰、流涕或鼻塞、咽痛、口渴、舌红黄等证候的小儿急性支气管炎。其中绿原酸为金银花的主要活性成分，在牛蒡子中含量亦较高。它是一种具有广泛生理和药理活性的物质，具有利胆、抗菌、降压、增加白细胞及兴奋中枢神经

2、系统、抗肿瘤、降脂、去除自由基等多种药理作用2。小儿清热利肺口服液现有质量标准采用紫外分光光度法测定其盐酸麻黄碱含量，并未以绿原酸为含量测定指标。因此，本实验建立高效液相色谱法测定小儿清热利肺口服液中总绿原酸的含量，旨在为完善小儿清热利肺口服液的质量标准提供基矗1仪器与试药广东药学院学报第26卷第4期魏大华,等.小儿清热利肺口服液中总绿原酸的含量测定方法研究2方法与结果2.1色谱条件2.2对照品溶液的制备精细称取绿原酸对照品(于室温用P25枯燥24h)8.14g，置20L棕色容量瓶中，加50%(体积分数)甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品贮备液。精细汲取绿原酸对照品贮备液2L置于25L容量

3、瓶中，用50%(体积分数)甲醇稀释制成每1L含绿原酸0.0326g的对照品溶液。2.3供试品溶液的制备精细汲取小儿清热利肺口服液1L至分液漏斗中，用水饱和正丁醇萃取4次，每次10L，合并正丁醇层于70水浴蒸干，残渣用50%(体积分数)甲醇溶解，定容至50L容量瓶中，摇匀，用0.45微孔薄膜滤过，即得。2.4阴性对照溶液的制备称取处方组成中除金银花和牛蒡子外的其余药材，按照消费工艺制备阴性样品，并按“2.3项下方法制备，即得阴性对照溶液。2.5系统适用性试验分别严密汲取对照品、供试品、阴性对照溶液各20L注入液相色谱仪中，按“2.1项下色谱条件进展测定，记录色谱图。在此条件下，阴性对绿原酸测定无

4、干扰，绿原酸和其他组分可到达基线别离，别离度R5。理论塔板数以绿原酸计，应不低于1000。结果见图1。转贴于论文联盟.ll.2.6线性关系考察精细吸劝2.2项下绿原酸对照品贮备液各1、2、3、4、5L，分别至25L棕色容量瓶中，加50%(体积分数)甲醇稀释至刻度，摇匀，得绿原酸质量浓度分别为16.28、32.56、48.84、65.12、81.4gL-1的系列对照品溶液。分别精细汲取20L进样，按“2.1项下色谱条件测定，记录峰面积。以峰面积积分值(Y)为纵坐标，绿原酸对照品量(X，g)为横坐标进展线性回归，求得回归方程为：Y=6.2465104X-3.6896104，r=0.9996。结果说

5、明,绿原酸在16.2881.4g范围内，与峰面积呈良好线性关系。2.7精细度试验精细汲取同一对照品溶液20L注入液相色谱仪，重复进样5次，按“2.1项下色谱条件测定绿原酸峰面积，结果RSD值为1.51%(n=5)，说明仪器精细度良好。2.8稳定性试验精细汲取同一供试品(批号E06002)溶液，于0、4、8、12、18、24h分别进样，按“2.1项下色谱条件测定，记录色谱峰面积。结果RSD值为1.60%(n=6)，说明供试品溶液在24h内稳定性良好。2.9重复性试验取同一批号(批号F03002B)小儿清热利肺口服液6份，按“2.3项下方法制备供试品溶液，依法测定。结果绿原酸含量的RSD值为0.1

6、9%(n=6)，说明本方法重复性良好。2.10加样回收率试验精细汲取小儿清热利肺口服液(批号I11002B)适当稀释后的药液共6份(绿原酸质量浓度为0.8427gL-1)，分别参加绿原酸对照品溶液适量，按照“2.3项下方法制备供试品溶液，按照“2.1项下方法测定绿原酸的含量，计算回收率。结果见表1。表1加样回收率试验结果2.11样品测定取小儿清热利肺口服液3批(批号E06002、F03002B、F10001B)，分别按“2.3项下方法制备供试品溶液，依法测定，以外标法计算绿原酸的含量。结果3个批号样品的质量浓度分别为2.331、1.861、1.928gL-1，RSD值依次为0.48%、1.09

7、%和0.77%。3讨论3.1绿原酸为金银花的特征有效成分。本实验在去除金银花的阴性对照液中检测出较高含量的绿原酸(见图2)，并通过实验发现绿原酸在牛蒡子中含量较高。曾有关于在牛蒡叶中提取绿原酸的文献报道3，但未见牛蒡子中检测出绿原酸的报道。本研究这一发现不仅进步了牛蒡子药材的可利用度，同时也可作为其质量控制的指标之一。3.2对绿原酸对照品溶液在200400n处进展紫外光谱扫描检测，结果显示绿原酸在217、240、327n处均有最大吸收，选择干扰较少的327n作为检测波长。3.4小儿清热利肺口服液为11味中药组成的大复方，成分非常复杂，因此，供试品制备方法的选择难度较大。曾尝试用甲醇对样品液进展

8、超声提取，提取液直接进样检测。检测结果说明，绿原酸峰与其它杂质峰到达基线别离耗时较长，且由于目的峰后还有较多杂质峰，为不干扰下一样品的检测必须等待90in以上才可进样。为改善别离效果，对甲醇提取液采用中性氧化铝柱柱与大孔吸附树脂5进展纯化，结果发现，二者别离纯化的效果并不理想，且操作繁琐。故尝试使用溶剂萃取法对样品进展处理，并对乙酸乙酯与水饱和正丁醇的萃取2效果进展了比拟。结果说明，2种溶剂所得萃取液的色谱图根本一样，峰形、峰时一致，但乙酸乙酯萃取液的峰面积较小，说明乙酸乙酯萃取时绿原酸损失较多，其主要原因是绿原酸微溶于乙酸乙酯。因此，确定样品采用水饱和正丁醇萃取，不仅能有效去除杂质，且绿原酸

9、损失较少，操作简便、快速。对萃取溶剂用量与萃取次数考察结果说明，20倍水饱和正丁醇萃取2次与15倍水饱和正丁醇萃取3次所得萃取液中绿原酸的含量较低;10倍水饱和正丁醇萃取3次较20、30倍水饱和正丁醇萃取3次所得萃取液中绿原酸的含量低;10倍水饱和正丁醇萃取4次所测得绿原酸含量与20、30倍水饱和正丁醇萃取3次的含量根本一致，且高于5倍水饱和正丁醇萃取4次的含量。因此，确定水饱和正丁醇用量为10倍量，萃取次数为4次。3.5本研究建立的绿原酸含量测定方法简便快速、别离度好、灵敏度高，可用于小儿清热利肺口服液的质量控制。【参考文献】1易明娟,谢子清,谭亿明,等.清热利肺口服液的药理研究J.成都中医药大学学报,1997,20(4):35-39.2刘军海,裘爱泳,任惠兰.绿原酸提取与纯化别离方法研究进展J.粮食与油脂,2022,(7):42-45.3杨丽芬.牛蒡叶绿原酸提取工艺、别