欧蒙印迹法检测ANA抗核抗体实验报告

1、 1 / 5试验 1：抗 ANA 自身抗体的检测欧蒙斑点法一、试验目的及原理ANA 性结缔组织病、枯燥综合症、全身性硬皮病、原发性胆汁性肝硬化等。ANA DNA 抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗核仁抗体和抗其他细胞成分抗体。在本试验中，抗核抗体谱IgG检测试剂盒欧蒙印迹法的检测模条上平行包被了高度纯化的自身抗原。用于体外定性检测人血清或血浆中的抗、m、A 、0、l、B、 类抗体。 洗膜后添加碱性磷酸酶P标记的羊抗人 G二抗，将与结合在膜条相应 抗原位点上的自身抗体一抗结合，形成抗原-1st Ab-2nd Ab 复合物。最终，参加NBT/BCIP四唑硝基苯胺兰/5-溴-4-氯啶-磷酸盐显色

2、，阳性血清在对应膜条抗原条带处原位可形成蓝紫色的化合物沉淀。二、试验材料包被抗原的检测膜条 、P 蛋白 倍浓缩，1x0.02mlIgG，10 倍浓缩，1x3ml1x100ml清洗缓冲液，10 倍浓缩，1x50ml四唑硝基苯胺兰-溴-吲哚-磷酸盐130ml2x8 槽三、试验步骤一预处理30 分钟后使用，取出膜条。10 倍稀释：30mL 清洗缓冲液+270mLDW，50ml/支分装。血清样本，使用前 101X 稀释：No.1666 血清 210uL +21mL 样本缓冲液2 0.02ml 阳性比照+2ml 样本缓冲液。10 倍稀释：AKP-IgG2.1mL18.9mL 样本缓冲液10mL/2 支。

3、二正式处理预处理 5min1.5ml 样本缓冲液；5min。 抗体30min1.5ml 已稀释血清，常温，摇床震30min。用枪头吸去槽内液体，在摇摆摇床上用1.5ml 3 次，每5min。X 稀释的酶结合物二抗，抗原-抗体-二抗1.5ml 30min。用枪头吸去槽内液体，在摇摇床上用1.5ml 3 次，每次5 分钟。加底物溶液，反响 10min1.5ml 10min。蒸馏水终止反响液体，用蒸馏水清洗3 次，1.5ml/次，1。风干15 min。三判读结果体的种类。白色条带应判为阴性；阳性反响在抗原包被区呈兰色或紫色条带。无色为阴性。四、试验结果8 1 从左至右数第一列2 所示。1. 本次试验

4、膜条条带 结果示意图的第一区域，说明试验操作正确。1条和第九区域2 条，条带呈深紫色。比照结果示意图，说明本试验所用患SS-ARo-52 以及抗核糖体P 蛋白抗体为强阳性。SS-B 抗体为弱阳性。dsDNA 抗体。依据结果判读原则，应判为阴性。五、分析与争辩一试验结果分析SS-ARo-52 以及抗核糖 SS-B 抗体为弱阳性。 mRNA SS-A阳性率 %、系统性红斑狼疮%、原%2 A A 包括Ro-52SS-B 抗原是 III SS-B SS-A 抗原的 SS-A 抗体一起消灭。抗SS-B 抗体几乎仅见于枯燥综P E SLE 人群根本一样。断该患者患有自身免疫疾病，并且可能是系统性红斑狼疮E。如皮肤狼疮、口鼻咽部溃疡，是否有肾脏、神经病变，是否有外周白细胞或淋巴SLE 分类标准中，需同时依据临床分类标准和免疫学标准作出诊断。二关于试验操作及结果判读的争辩条洗涤不充分，导致膜条背景加深，影响试验结果判读。作为核酸分子，dsDNA 抗原与其他蛋白质抗原具有完全不同的带电荷力量。 抗原包被的位置不易与血清样本中的其他物质结合。当样本为dsDNA dsDNA 条带发白的现象。消灭上述试验结果时，样本可推断为明确牢靠的阴性结果。【参考资料】王莉等, 抗 Ro52 抗体和抗 Ro60 . 华西医学, 2022.29(05): 879-882 页.李圣楠 与黄慈波,系统性红斑