出口食品霍乱弧菌检验方法

1、出口食品霍乱弧菌的查验方法1仪器和设施11恒温培育箱：36112恒温水浴箱：45113高压灭菌锅14拍打式均质器15菌落计数器16试管:18150mm12mm100mm17锥形瓶:500ml250ml18平皿：直径为90mm19灭菌盒和枪头110灭菌袋111酒精棉112天平:感量0.1g1.13冰箱：0-4和-15-202培育基的制备21碱性蛋白胨水称取15g干粉于1000.0ml蒸馏水中，加热溶解，分装，12110min高压灭菌。22硫代硫酸钠、柠檬酸钠、胆盐、蔗糖琼脂（TCBS）称取89.1g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸至完满溶解，冷至55倾注平板备用。23三糖铁（TSI）称取6

2、5g于1升蒸馏水中，加热煮沸至完满溶解，分装试管12mm100mm，每管约24ml，11515分钟高压灭菌，制成高层斜面备用，桔红色。24霍乱双糖铁琼脂（KIA）称取64.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热溶解，分装。12115分钟高压灭菌，制成高层斜面备用。25TN琼脂11称取35g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸至完满溶解，12115分钟高压灭菌。倾注平板备用。在上项成分中改变氯化钠的含量，去除琼脂可制成T1N0和T1N3肉汤。26精氨酸葡萄糖斜面琼脂（AGS）称取58g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸至完满溶解，分装，12115分钟高压灭菌，制成高层斜面备用。27O/F实

3、验用培育基（HLGB）称取45.5g溶于1000.0ml蒸馏水中，加热煮沸至完满溶解，分装，每管3ml（有的加矿物油覆盖）12115分钟高压灭菌备用。28赖氨酸脱羧酶肉汤生化管29MR-VP肉汤生化管3.1样品的分别培育和初步判断:以无菌操作取25g样放入装有225ml生理均质1分30秒，制用灭菌枪头汲取1ml品盐水的无菌袋内，成1：10的样品匀液均质好的样液放入9ml碱性蛋白胨361培育1824h接种TCBS琼脂,36划线接种于TN琼脂11水中1培育1218h361培育1218h以无菌白色滤纸沾滴加氧化酶试剂进用接种环取氧化酶0.5去氧胆酸钠液T1N1琼脂表面培育物行氧化酶试验阳性培育物滴中

4、进行粘丝试验以接种针取氧化和粘丝试验阳性物酶接种TSIAGS，、KIA和穿刺基层并划线面斜在取氧化酶和粘试验阳性培育物丝接种T1N0和T1N3肉将TSI、KIA、AGS、于361培育汤T1N0、T1N3肉汤1824h注：霍乱弧菌菌落特点形状大，圆滑，黄色，稍平，拥有不透明中心和半透明的边沿。霍乱弧菌初步判断试验中的反响KIATSITNTN斜面基层斜面基层斜面基层1013霍乱弧A(K少见)AAa菌注：K-碱性；A-酸性；a-微酸性。霍乱菌属细菌在TSI、KIA、AGS中不产H2S，也不产气。一些气单胞菌属菌株可能产气。32确认试验以接种环取初步判断试验符合霍乱弧菌反响的T1N3培育物，分别接种到

5、以下培育基：Hugh-Leifson葡萄糖肉汤（HLGB），361培育1824h。ONPG胨水，361培育1h3h或24h。赖氨酸脱羧酶肉汤，361培育2496h。阿拉伯糖肉汤，361培育24h。O/129试验用培育基，361培育1824h。霍乱弧菌的生化反响表生化项目生化性状生化项目生化性状TCBSYD-甘露糖AGSKa氧化酶ONPGNacl0V-Pv3精氨酸双水解酶6赖氨酸脱羧酶8鸟氨酸脱羧酶10抑菌试验42生长10ugO/129S蔗糖150ugO/129SD-纤维二糖明胶酶乳糖尿素酶阿拉伯糖注：Y-黄色；K-碱性；-80或更多的菌株阳性；-80或更多的菌株阴性；v-依照种或菌株的可变反响

6、；S-敏感；AGS-精氨酸-葡萄糖斜面。全部试验均不产H2S平易体。4血清学凝聚试验41自分别培育基上挑取可疑菌落与O1群霍乱弧菌诊疗血清做玻片凝聚试验。如可疑菌落在诊疗血清中很快（一般在10s）出现肉眼可见的显然凝聚，在生理盐水中不凝聚者判为阳性。5报告结果霍乱弧菌的检出，可依照以下性状报告：革兰氏染色阴性，无芽孢或曲折杆菌；TSI：斜面产酸/基层产酸，不产气，不产H2S；Hugh-Leifson试验：葡萄糖发酵阳性；氧化酶：阳性；精氨酸脱羧酶试验：阴性；赖氨酸脱羧酶试验：阳性；42生长：阳性；嗜盐性试验：0Nacl(有的非O1群霍乱弧菌不生长)3Nacl6Nacl蔗糖发酵：阳性；ONPG试验