温润养血颗粒治疗肺纤维化的实验研究

1、温润养血颗粒治疗肺纤维化的实验研究【关键词】肺纤维化；,大鼠；,中药复方；,实验研究摘要：目的：寻找治疗肺纤维化有效的中药复方制剂。方法：将36只SD大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组和孝中、大剂量组，每组6只。从造模第2天开场给予温润养血颗粒治疗，28d后处死，取左上肺以10%中性福尔马林固定，做HE、VG、ASSN染色，进展病理检查，并以电子计算机图象分析系统进展图象量化分析。结果：病理光镜检查显示，治疗组肺泡炎和肺纤维化程度较模型组轻，治疗组肺间隔面积/视场面积小于模型组(P0.05)，治疗组肺间隔灰度/肺泡灰度大于模型组(P0.05)。结论：温润养血颗粒可以有效抑制由急性肺损伤引起的

2、肺纤维化，小剂量给药效果最好。关键词：肺纤维化；大鼠；中药复方；实验研究肺纤维化是多种肺间质疾病的共同结果。主要表现为进展性呼吸困难、干咳等病症，其死亡率较高。目前对其治疗以口服糖皮质激素为主。温润养血颗粒是根据曹世宏教授的临床经历方化裁而成，在临床应用中获得较好疗效。本实验采用博莱霉素引发的肺纤维化大鼠模型为实验对象，以温润养血颗粒治疗28d，将各组大鼠的肺组织做病理切片，利用计算机图象分析系统进展图象分析，评价疗效。1材料和方法1.1动物清洁级SD雄性大鼠36只，由中国科学院上海实验动物研究所提供，体重210250g。完全随机分成6个组，分别为：正常组、假手术组、模型组、小剂量组、中剂量组

3、、大剂量组。动物饲养条件：温度20，湿度47%。1.2实验药物温润养血颗粒(批号：021029)，由江苏省中医医院制剂部提供。其组成是：人参，蛤蚧，当归，熟地，丹参，川芎等共13味。实验用药为浸膏制剂，浓度以生药计为3.8g/L。实验剂量确定以临床用量(以生药计：24g/kg体重)的4倍为大剂量，2倍为中剂量，临床用量为小剂量，分别为9.6，4.8，2.4g/kg。实验时将浸膏临时配制成相应浓度(0.96，0.48，0.24g/l)，灌喂量为1l/100g体重，模型组灌喂一样体积的生理盐水。从造模后第2天开场治疗，1次/d，共28d。博莱霉素(BL)由日本化学株式会社消费，1.5g/只，溶于0

4、.3l生理盐水中。1.3肺间质纤维化模型的制作按文献1的方法进展。实验组动物用乙醚吸入麻醉后，切开颈部皮肤，以血管钳钝性别离暴露气管，用注射器在环状软骨间刺入气管腔，向气管内注射博莱霉素(1.5g/只溶于0.3l的生理盐水中)，假手术组动物在一样条件下气管内注射生理盐水0.3l。注射后立即将大鼠直立并前后旋转。正常组同期饲养，不作任何处理。1.4病理学评价方法取大鼠的左上肺以10%中性福尔马林固定，酒精梯度脱水，石蜡包埋，制成5的切片，做HE，VG，ASSN染色。形态定量分析采用ias2000图象分析系统(四川大学图象图形研究所)，将切片进展HE，VG染色，将切片置于分析仪显微镜上，在100倍

5、下每例切片自左向右，自上向下选取10个视野，分别测定肺泡间隔面积，视场面积，肺泡间隔灰度，肺泡灰度。测定条件：分辨率800600，256度灰阶。所有数据以s表示，治疗组与模型组先进展F检验，检验方差齐性。再进展t或t检验。治疗组间进展方差分析。P0.05为有显著性差异。转贴于论文联盟.ll.2结果2.1肺泡间隔面积模型组肺泡间隔面积大于假手术组，有显著差异(P0.01)，小中大剂量组肺泡间隔面积及视场的比值均小于模型组，有统计学差异(P0.05)。对三个剂量组进展方差分析有显著性差异(P=2.16105)。另外，假手术组的肺间隔面积，和与视场的比值均大于正常组，且有显著性差异(P0.01)。见

6、表1。表1各组标本肺泡间隔面积略#与小剂量组比拟；*与正常组比拟；与假手术组的比拟；与模型组比拟2.2肺泡间隔灰度、肺泡间隔灰度与肺泡灰度比值模型组肺泡间隔灰度小于正常组及假手术组，且有显著性差异(P0.01)。小剂量组大于模型组，且有显著性差异(P0.01)，与正常组比拟未见统计学差异(P0.05)。中大剂量组与模型组比拟有统计学差异(P0.05)。小中大剂量组A/B比值行方差分析有显著性差异(P=3.53109)。见表2。表2各组标本肺泡间隔灰度略#与小剂量组比拟；*与正常组比拟；与假手术组的比拟；与模型组比拟3讨论肺间质纤维化临床病症的主要特点是进展性的运动性呼吸困难和干咳。现代中医理论

7、认为，肺间质纤维化与“肺痿“喘证“咳嗽相类似，根本可归属于“肺痿的范畴。其病机与肺肾两虚有关，而肺间质纤维化病理过程中的肺泡壁增厚、渗出物机化、肺泡变形闭锁、间质中的纤维组织收缩、毛细血管数量减少和影响血液循环等表现与“肺痿中的精血缺乏、气阴两虚、血行瘀滞的病机相似。肺纤维化的治疗应以温润行气、生津化燥、养血活血为主。温润养血颗粒是在蛤蚧散(?博济方?)、炙甘草汤以及四物汤的根底上，结合治疗劳嗽久喘的经历用药化裁而成。整体成效以温补肾阳、纳气平喘、润肺生津、活血行气为主。肺纤维化患者服用温润养血颗粒34周后，血气分析中的P2，Sa2较治疗前有所进步。博莱霉素引发的肺纤维化模型是目前公认的比拟符

8、合人肺纤维化病理演变的模型。从模型制作后第2天即给予温润养血颗粒治疗，观察其从急性肺损伤期开场，对致纤维化因素是否有阻抑作用。戴令娟等3的研究说明气管内注入博莱霉素后第28天间质纤维化成分增加、肺泡壁增厚、肺泡腔缩小，此时肺纤维化开展到顶峰，而28d后由于自生修复作用肺纤维化程度有所减轻，所以在我们的研究中以28d为治疗持续时间。在第28天模型组肺泡间隔面积/视场增大与正常组及假手术组比拟显著增大，且有显著差异(P0.01)，表现出一样的病理演变过程。治疗组肺间隔面积/视场小于模型组(P0.05)，小剂量组与正常组比拟无显著性差异(P0.05)。说明温润养血颗粒可阻断上述病理过程的开展。为了更

9、明确的观察胶原的增生情况，我们采用了VG染色以显示胶原。在图象分析中灰度值减小说明在显微镜下透光性下降，胶原纤维密度增高。结果显示模型组灰度最低，说明胶原密度最大，含量最多。同样治疗组与模型组比拟均有差异(P0.05)。说明温润养血颗粒可减少肺纤维化形成过程中的胶原纤维含量的增加。戴令娟等4给模型大鼠腹腔注射芎嗪、当归注射液治疗28d后，发现肺纤维化程度较模型组低。刘卫敏等5用25%浓当归注射液后，急性肺泡炎阶段自由基损伤减轻，炎性细胞渗出明显减少，炎性介质如Fn含量显著下降；病理上肺纤维化明显减轻；电镜下胶原纤维减少，反映胶原纤维含量的Hyp明显减少，肺纤维化过程受到阻遏，疗效与用激素无明显

10、差异。与以往的研究不同的是，本研究为口服复方制剂，川芎和当归在复方中仅占1/5，并且随着给药剂量的增加，肺泡隔面积相对于小剂量组增大，灰度值减小，说明中大剂量抗纤维化作用较小剂量低。故我们认为作用机理可能与以往的研究不同，不能用单一成分的作用解释。详细的作用机理有待进一步研究说明。参考文献：1陈伯义，姜莉.博莱霉素致大鼠肺纤维化肺泡巨噬细胞氧化和抗氧化损伤的动态研究J.中国医科大学学报，1995，24(3)：240242.2SzapielSV,ElsnNA,FulerJD.Bleyininduedintersitialpulnarydiseaseinnude,athyiuseJ.ARevRespirDis,1979,120:893.3戴令娟，候杰，蔡后荣，等.肺纤维化动物模型肺组织形态定量分析J.南京铁道