10游泳池水微生物检验方法大肠菌群测定操作规程

1、作 业 指 导 书大肠菌群测定操作规程编号：JNKZ/ZY-010 1 次修订实施日期：2022 12 1 日1、目的 游泳池水微生物检验方法大肠菌群测定，娴熟把握此规程，保证检验结果的准确性。2、适用范围本标准规定了游泳池水大肠菌群的测定方法。3、责任使操作者生疏本规程，并在具体样品检验中严格遵照操作，确保检测结果准确性。4、内容：定义：大肠菌群 无芽胞杆菌。第一法 多管发酵法仪器：干热灭菌箱。冰箱。灭菌平皿：直径 9cm.：1mL,10mL灭菌棉拭子。放大镜。PHPH培育基和试剂：乳糖胆盐发酵培育液作 业 指 导 书大肠菌群测定操作规程编号：JNKZ/ZY-010 1 次修订实施日期：20

2、22 12 1 日4.3.1.1成分： 蛋白胨20g牛肉膏3g乳糖5g氯化钠5g1.6%v/v溴甲酚紫乙醇溶液1ml蒸馏水1000ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培育液按上述乳糖蛋白胨培育液浓缩三倍配制。1000ml 蒸馏水中加热溶解，调 pH 溴甲酚指示剂，充分混匀，分装到含有带有倒管的试管中，在11515 分钟。伊红美兰琼脂4.3.2.1成分： 蛋白胨10g乳糖10g磷酸氢二钾2g琼脂17g2%伊红水溶液20ml0.65%美蓝溶液10ml蒸馏水1000ml制法：将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，调pH7.1，分装到烧瓶内。12115 5055，参加伊红和美篮溶液，摇匀，倾注平板。革兰氏染色液结晶

3、紫染色液：结晶紫1g95%乙醇20ml1%草酸铵水溶液80ml将结晶紫溶于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。作 业 指 导 书大肠菌群测定操作规程编号：JNKZ/ZY-010 1 次修订实施日期：2022 12 1 日革兰氏碘液：碘1g碘化钾2g蒸馏水300ml300ml。95%乙醇沙黄复染液：沙黄0.25g95%乙醇10ml蒸馏水90ml将沙黄溶解于乙醇中，然后用蒸馏水稀释。染色法将涂片在火焰上固定，滴加结晶紫染色液，染色 1 分钟，水洗。滴加革兰氏碘液，作用 1 分钟，水洗。95%30 秒，水洗。滴加复染液，复染 1 分钟，水洗，待干，镜检。染色结果：革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。推

4、想性试验50ml 100ml。10 5ml 10ml。轻摇试管，使液体充分混匀，置 361培育箱中，培育 24h。验阳性，需做进一步的证明试验。证明试验平板分别自推想性阳性管中取一接种环培育液，接种到伊红美兰琼脂平板上，置361培育箱作 业 指 导 书大肠菌群测定操作规程编号：JNKZ/ZY-010 1 次修订实施日期：2022 12 1 日1824h，观看菌落形态，典型的大肠菌群菌落为黑紫色或红紫色，具有金属光泽。复发酵试验 361培育24h。登记证明试验的阳性管数，查总大肠菌群MPN检索表得出 1000ml 水样中总大肠菌群的MPN 值。表1总大肠菌群MPN检索表100ml水量的阳性管01

5、2瓶数每升水样中每升水样中每升水样中10ml 水量阳性管数总大肠菌群数总大肠菌群数总大肠菌群数03411138182713273111838414245251830706223692727431208315116193660230104069230其次法 滤膜法滤器35mm 47mm 两种。抽滤设备无菌镊子。高压蒸汽灭菌器。361。作 业 指 导 书大肠菌群测定操作规程编号：JNKZ/ZY-010561实施日期：2022121冰箱培育基品红亚硫酸钠培育基分： 蛋白胨10g酵母浸膏5g牛肉膏5g乳糖10g琼脂1020g磷酸氢二钾3.5g5% 碱性品红乙醇溶液20ml蒸馏水1000ml备培育基的制

6、备将磷酸氢二钾、酵母浸膏、牛肉膏及蛋白胨加到含有 900ml 蒸馏水的烧杯中，溶解后调pH1000ml再参加乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，11520min，置冷暗处备用。4.6.1.3平皿培育基的制备1:501:200的比例称取所需的无水10min。防止产生气泡，马上将此种培育基适量倾入灭菌的空平皿内，待其冷却凝固后置冰箱内备用。此培育基于冰箱中保存不宜超过两周，如培育基已由淡红色变成深红色，则不能再用。乳糖蛋白胨培育操作步骤作 业 指 导 书大肠菌群测定操作规程编号：JNKZ/ZY-010 1 次修订实施日期：2022 12 1 日滤膜灭菌：将滤膜放入含有蒸馏水的烧杯中，煮沸灭菌三次，每次 15min。前两次23次，以除去残留溶剂。12120min 或用点燃的酒精灯棉球火焰灭菌。水样过滤：用无菌镊子夹取灭菌滤膜边缘局部，将粗糙面对上，贴放在滤床上。固注入滤器中，培育：水样滤完后，再抽气约 5s，关上滤器阀门，取下滤器。用灭菌镊子夹取滤膜3611824h。紫红色，具有金属光泽的菌落；淡红色，中心色较深的菌落。将革兰氏