维A酸对大鼠胃癌前病变增殖细胞核抗原和端粒酶活性的影响

1、维A酸对大鼠胃癌前病变增殖细胞核抗原和端粒酶活性的影响【摘要】目的观察维A酸RA对大鼠胃癌前病变增殖细胞核抗原PNA，用增殖指数PI表示和端粒酶活性用hTERT表示的影响。方法采用甲硝基亚硝基胍NNG、0.03%雷尼替盯5615%盐水、0.85%脱氧胆酸钠、40%乙醇、饥饱失常等多种因素制作大鼠胃癌前病变模型,免疫组化方法检测正常组、自然恢复组、RA20g/kg和RA40g/kg组大鼠胃黏膜组织中PI和hTERT蛋白表达情况。结果正常组和RA40g/kg组PI、hTERT蛋白阳性率均较自然恢复组低，差异有显著性P0.01或P0.05。结论维A酸可能是通过抑制端粒酶及细胞增殖活性，发挥逆转胃癌前

2、病变的作用。【关键词】维A酸；癌前病变；增殖细胞核抗原；端粒酶Abstrat:bjetiveTbservetheeffetfretiniaidRAnprliferatingellnulearantigen(PNA,representedithprliferatingindex,PI)andteleraseativity(representedithhuantelerasereversetransriptase，hTERT)inratsithgastripreaneruslesinethdsThedelasestablishedbyNNGtgetheriththerfatrsinluding15

3、%56brine，sdiudexyhlate，40%alhlstiulus，0.03%ranitidine，unduehunger，andvereatingPNA(nvertedtPI)andhTERTasdetetedbyiunhistheialethd，innralgrup，spntaneusreverygrup，andRA20g/kgand40g/kggrupResultsPIandhTERTfnralgrupandRA40g/kggrupserelerdetetedthanspntaneusreverygrupandassignifiantlydifferent(P0.01rP0.05

4、)nlusinRAakesGPLreversedinratesbyinhibitingativityfteleraseandellprliferatingKeyrds:retiniaid；preaneruslesins；prliferatingellnulearantigen；telerase利用某些化学物质诱导肿瘤细胞分化为正常细胞或近似正常细胞，已成为抗肿瘤药物研究的热点，维A酸是肿瘤分化诱导剂的代表之一。维A酸对多种化学致癌过程和诱癌作用有抑制作用，具有逆转胃癌前病变大鼠的肠化生和不典型增生作用，对急性早幼白血病型的疗效,已被证实和公认1，2。为进一步讨论其作用机理，本文观察维A酸对大鼠

5、胃癌前病变增殖细胞核抗原和端粒酶活性的影响，报告如下。1材料1.2主要药品及试剂维A酸(RA)，上海第六制药厂；甲硝基亚硝基胍NNG为Fluka公司产品；脱氧胆酸钠，北京双旋微生物培养基制品厂；雷尼替丁，杭州赛诺菲圣德拉堡民生制药；无水乙醇，上海振新兴化工一厂；氯化钠，天津化学试剂三厂；即用型PNA单抗、即用型端粒酶催化活性亚单位hTERT多抗试剂盒、SPDAB即用型显色试剂盒均购自北京中山生物技术公司。1.3主要仪器UT5062轮转切片机，德国SLEE公司；BX40系统显微镜，日本LYPUS公司；HPIAS1000型显微摄像全自动图像分析仪，同济千屏影像工程公司。2方法2.1造模及给药方法按

6、综合法复制模型3。大鼠50只，随机抽取11只作为正常对照组，其余39只用于造模。正常对照组大鼠不做任何处理；造模大鼠每日自由饮用100g/LNNG液新颖配制，饮水瓶用油漆涂黑避光，上午用56、=15%的氯化钠液10L/kg灌胃。摄食为含=0.03%雷尼替丁的纯鼠饲料,饥饱相间，进食2d的当天下午，用=0.85%脱氧胆酸钠溶液按10L/kg灌胃；禁食1d的当天下午，用=40乙醇10L/kg灌胃，持续6个月(造模过程中死亡6只大鼠)。6个月末时,取正常和造模大鼠各1只杀检,观察组织病理学变化，确认模型是否成功。模型成功后，将造模存活的大鼠,随机分为:自然恢复组12只、RA20g/kg和RA40g/

7、kg组各10只。正常对照组和自然恢复组大鼠给蒸馏水10L/kg；RA20g/kg和RA40g/kg组大鼠分别给0.2%RA和0.4%RA10L/kg灌胃,每日1次，连续3个月(自然恢复组大鼠死亡4只)。末次给药后,所有动物禁食1d，放血处死，剖腹取胃，沿胃大弯剪开，生理盐水冲洗，肉眼观察，平铺于硬纸板上，于胃窦部剪取组织1块，=4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片5,免疫组织化学染色。2.2检测方法免疫组织化学用SP法，按试剂说明书操作，DAB显色，PBS代替一抗作阴性对照，阳性切片作阳性对照。免疫组化染色阳性信号为棕色，PNA阳性物质定位于细胞核，hTERT阳性物质定位于细胞质。采用显微摄像计算

8、机图像分析系统，每张切片检测5个视野400。计算PNA阳性细胞数以及腺上皮细胞总数每例200个,求出细胞增殖指数PI，PI=PNA阳性细胞数/腺上皮细胞总数100%。hTERT：无阳性细胞或阳性细胞数25%为-,阳性细胞数2550%为，阳性细胞数5075%为，阳性细胞数75%为。2.3统计学处理PI值的比拟，采用t检验；hTERT蛋白表达阳性率的比拟，采用2检验校正2值计算，以P0.05为差异有显著性。转贴于论文联盟.ll.3结果3.1维A酸对胃黏膜细胞增殖指数的影响正常大鼠胃黏膜增生带细胞可见PNA阳性细胞；自然恢复组大鼠胃黏膜细胞增殖指数明显高于正常对照组和维A酸各组,差异有非常显著性P0

9、.01；维A酸组高于正常对照组，提示维A酸有一定的抑制胃黏膜细胞增殖活性作用，见表1。表1维A酸对胃黏膜细胞增殖指数的影响略Tab.1EffetfRAnPIfthegastriusa与自然恢复组比拟：*P0.01；与正常对照组比拟：P0.01(t检验)3.2维A酸对胃黏膜细胞hTERT蛋白表达阳性率的影响正常大鼠胃黏膜没有hTERT蛋白表达。自然恢复组大鼠8例均呈阳性表达，阳性率达100。维A酸20g/kg和40g/kg组hTERT蛋白阳性率分别为60%和40%,较自然恢复组低，见表2。表2维A酸对胃黏膜细胞hTERT蛋白表达阳性率的影响略Tab.2EffetfRAnhTERTpsitiver

10、atefthegastriusa与自然恢复组比拟：*P0.05;*P0.01；与正常组比拟：P0.05(2检验)4讨论增殖细胞核抗原PNA是目前被公认的能较好地判断细胞增殖状态的一项指标4。PNA又称周期数,是存在于细胞核内的一种周期蛋白。研究说明，在胃癌前病变阶段已存在PNA的表达异常，推论胃黏膜发生癌变的机制之一,可能是某些致癌因素引起持续的胃黏膜细胞增殖过度。端粒酶活化是细胞保持持续分裂增殖的根底，与细胞的异常增殖亲密相关，是肿瘤发生学上的一个共同途径，在肿瘤的发生开展中起非常重要的作用5。端粒酶是一种逆转录酶，至少由3个亚单位组成，即端粒酶RNA、端粒酶相关蛋白和端粒酶催化活性亚单位h

11、TERT，但仅hTERT程度与细胞端粒酶活性呈正相关6。研究发现由胃黏膜正常细胞胃癌前病变胃癌的过程中，端粒酶逐渐被激活7，而且其阳性率、活性程度相应地逐渐增高；也有研究发现端粒酶阳性的胃癌或癌前病变细胞增殖活性PNA明显高于阴性者8，均说明端粒酶的激活在胃黏膜癌变形成、开展中扮演重要角色。本实验模拟临床发病原因，采用多因素建立胃癌前病变大鼠模型，侧重维A酸对其逆转作用机理研究。结果显示：正常大鼠胃黏膜增殖带可见PNA阳性细胞，但没有hTERT活性表达，自然恢复组大鼠PI明显高于正常组，hTERT蛋白阳性表达率100%，说明在胃癌前病变阶段，由于各种因子的刺激而导致了端粒酶被激活和细胞增殖活性

12、增加，使局部细胞逃脱死亡危象,并出现永生化或恶性增殖。模型动物应用维A酸治疗3个月后，大鼠胃黏膜PI和hTERT蛋白的表达显著降低，说明维A酸对其端粒酶活性和细胞增殖活性有一定的抑制作用。由此推论维A酸逆转大鼠胃癌前病变的机制之一，可能与其抑制了大鼠胃癌前病变PNA和端粒酶活性，从而抑制胃黏膜恶性增殖，增加细胞稳定性，恢复细胞增殖和凋亡平衡有关。【参考文献】1陈新谦，金有豫，汤光.新编药物学.16版.北京：人民卫生出版社,2022:759.2李春启，刘为纹，王建荣,等维甲酸治疗胃黏膜癌前病变的实验研究J中国肿瘤临床，1996，2312:8778803陈奇中药药效研究思路与方法.2版北京：人民卫生出版社,2022:531-533.4戴林，张学庸.增殖细胞核抗原与胃癌J国外医学：消化系分册,1996，13(1)：35BURGERA,IBBY,DUBLEJATeleraseativityinnralandalignantaaliantissues:feasibilityfteleraseasatargetfranerhetherapyJBrJaner,1997,75:5166NAKAURAT，RINGB，HAPAKB，etalTel