局部Ang Ⅱ水平与ERK的活化在人门静脉高压症脾静脉血管病变中的

1、部分Ang 程度与ERK的活化在人门静脉高压症脾静脉血管病变中的【摘要】目的讨论血管紧张素(Ang)程度与细胞外信号调节激酶(ERK)活化在人门静脉高压症(PHT)脾静脉血管病变中的作用及可能机制。方法选取乙型肝炎感染后肝硬化PHT患者26例为PHT组;选取因外伤性脾破裂行脾切除术患者10例为对照组。放射免疫分析法(RIA)检测脾静脉中Ang程度;免疫组织化学法和蛋白免疫印迹法检测脾静脉中ERK的表达。结果PHT组脾静脉组织Ang程度(248.9148.31)ng/L，显著高于对照组(143.3536.45)ng/L(P0.01)。蛋白免疫印迹/免疫组织化学染色均显示PHT组脾静脉ERK表达较

2、对照组明显增加。结论PHT时脾静脉组织Ang程度升高，ERK表达增加。部分Ang升高及ERK信号传导通路的激活可能与门静脉高压症的形成和维持有关。【关键词】高血压，门静脉;脾静脉;血管紧张素;钙-钙调素依赖性蛋白激酶近年研究发现门静脉高压症(prtalhypertensin，PHT)患者脾静脉部分血管紧张素原RNA程度升高1，提示部分肾素-血管紧张素系统(renin-angitensinsyste，RAS)激活可能在门静脉高压血管病变中起重要作用，但其机制仍不清楚。笔者通过检测脾静脉组织部分血管紧张素(angitensin，Ang)程度、脾静脉组织中细胞外信号调节激酶(extraellular

3、signal-regulatedkinase，ERK)蛋白表达，讨论Ang及ERK信号传导通路在门静脉高压症发活力制中的作用。1对象与方法1.1对象PHT组脾静脉26例取自因乙型肝炎感染后肝硬化PHT脾功能亢进展脾切除+选择性贲门周围血管离断术患者，男性l6例，女性10例，年龄(45.110.2)岁(3065岁)，肝功能均为hildB级。全组均无高血压病及糖尿病病史。对照组10例脾静脉取自因外伤性脾破裂而行脾切除的患者，年龄(44.39.8)岁(2963岁)，均无肝炎、高血压病及糖尿病病史。每例脾脏切除后立即于脾门部无菌操作切取脾静脉，所取脾静脉分为2部分，一部分福尔马林固定，石蜡包埋，切片，

4、行免疫组织化学检测;另一部分立即置于液氮中保存，行蛋白免疫印迹。1.2方法1.2.1放射免疫分析法(radiiunassay，RIA)检测脾静脉组织中Ang的含量取150g血管组织放入匀浆管中，参加预冷的0.9%氯化钠溶液中(1L/100g)，冰浴匀浆，再将该匀浆液置于预冷的含EDTA二钠3.0l/L、8-羟基喹啉3.4l/L和二巯基丙醇3.2l/L的试管中，煮沸10in，43000r/in离心10in，取上清液，测定采用125I-Ang标记的放射免疫分析，以SN-628B-3型放射免疫-计数器记录结果。1.2.2免疫组织化学法检测脾静脉组织中ERK的表达切片脱蜡至水，加3%H225in，PB

5、S冲洗5in，重复3次，加非特异性血清，室温30in，弃上清参加1500ERK抗体(SantaruzBitehnlgyIn)，37孵育1.5h，PBS冲洗5in，重复3次，加酶标二抗(即用型，北京中杉)，室温30in，PBS冲洗5in，重复3次，DAB显色，苏木素复染。计算机图像分析系统分析，光密度值表示ERK表达程度。1.2.3蛋白免疫印迹法检测ERK的表达采用细胞裂解液进展脾静脉组织总蛋白提取及制备。蛋白样品经电泳，转膜，3%脱脂奶封闭30in，加一抗(1500)4孵育过夜，TBS漂洗5in，重复3次，加二抗(12000)37孵育1h，TBS漂洗5in，重复3次，加鲁米诺，胶片上显影，显影

6、信号的强弱用光密度分析，目的蛋白与-atin(D)比值表示蛋白表达相对量。1.3统计学处理数据以xs表示，应用SPSS13.0统计软件处理，两组之间均数比拟用t检验，P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1PHT组与对照组脾静脉组织Ang程度比拟PHT组Ang为(248.9148.31)ngL-1，显著高于对照组(143.3536.45)ngL-1(P0.01)。2.2PHT组与对照组脾静脉组织ERK表达比拟免疫组织化学检测脾静脉组织中ERK表达显示，PHT组表达阳性细胞大部分位于增厚的中膜和内膜，阳性部位定位于细胞核及细胞质，免疫组织化学计算机图像分析光密度值明显高于对照组(图12);es

7、tern-blt检测脾静脉组织中ERK表达显示，PHT组明显高于对照组(P0.01，图3)。ERK:细胞外信号调节激酶;PHT：门静脉高压症.A：PHT组，大量胞核和胞质中可见棕黄色颗粒;B：对照组，胞质及胞胲中可见少许棕黄色颗粒.转贴于论文联盟.ll.3讨论PHT患者除了血流动力学的紊乱外，门静脉系统还存在血管病变。这种病变既是PHT的结果，又是门静脉高动力循环维持和加重、促进PHT形成和开展的原因。门静脉系统的内脏血管病变包括血管平滑肌细胞(vasularsthusleells,VS)的表型转化以及内脏静脉的血管重构。中膜平滑肌增殖、肥大和迁移是PHT内脏静脉病变的根底2-3。研究证明An

8、g是一种强烈的促有丝分裂剂，部分旁分泌和自分泌的Ang有明显的促细胞增殖、ERK:细胞外信号调节激酶;PHT：门静脉高压症.：P0.01,t=8.669.肥大作用4。本实验结果显示PHT组脾静脉组织中Ang程度显著高于对照组，可能是由于PHT时门静脉系统的高压力导致部分RAS系统激活，致使脾静脉血管部分Ang合成增多。体外试验说明Ang能明显促进血管平滑肌细胞增殖5。因此笔者推测部分Ang表达增高通过引起血管平滑肌增殖参与了PHT的血管病变形成。丝裂原活化蛋白激酶(itgen-ativatedprtEinkinase,APK)是生物体内一种重要的信号转导系统，ERK是APK家族中的成员之一，它

9、能被多种因子激活，主要介导细胞增殖和分化的信号转导6。研究说明ERK激活可能在VS增殖过程中起重要作用7-8。本研究发现PHT组脾静脉ERK的表达较对照组显著增高。提示ERK信号传导通路的激活可能与PHT的形成和维持亲密相关。部分Ang升高及ERK信号传导通路的激活可能与PHT内脏血管病变关系亲密，参与PHT的形成和维持。研究发现Ang能激活ERK信号传导通路，同时Ang能促进VS增殖，ERK的特异性抑制剂能抑制Ang引起的VS增殖5,9。提示部分Ang升高可能通过激活脾静脉平滑肌细胞的ERK信号传导通路，导致脾静脉血管平滑肌细胞增殖，参与PHT血管病变的形成。然而Ang如何激活ERK信号传导

10、通路仍待进一步试验说明。【参考文献】1孙政,杨镇,徐鋆耀.部分血管紧张素原的表达与核因子-B的活化在门静脉高压症性血管病变中的意义J.中华医学杂志，2022，85(32):2283-2286.2李涛,杨镇.门脉高压性血管病变研究进展J.世界华人消化杂志，2022，13(1):64-68.3李海洋,杨镇,张彤,等.细胞外信号调节激酶1/2及-fs在门静脉高压症患者脾静脉壁的表达及意义J.中华实验外科杂志,2022,22(9):1066-1067.4ullerDN,BhlenderJ,HilgersKF,etal.Vasularangitensinnvertingexzyeexpressinreg

11、ulateslalangitensinJ.Hypertensin,1997,29(1Pt1):98-104.5abrukE,TuyzR，ShiffrinEL.DifferentialANG-induedgrthativatinpathaysinesenteriarterysthusleellsfrSHRJ.AJPhysilHeartirPhysil,2001,281(1):H30-H39.6EguhiS,IasakiH,UenH,etal.Intraellularsignalingfangitensininduedp70S6kinasephsphrylatinSer(411)invasularsthusleellsPssiblerequireentfepideralgrthfatrreeptr,Ras,extraelluarsignalregulatedki-nasesandAktJ.JBilhe,1999,274(52):36843-36851.7angTH，TanZ，FuXD，etal.EffetfERKn17-estradil-induedinhibitinfVSprliferatininratsaftervasularinjuryJ.AtaPhysilSin,2022,55(4)：411-416.8