氯化两面针碱平衡溶解度及油水分配系数的研究

1、氯化两面针碱平衡溶解度及油水分配系数的研究【摘要】目的测定氯化两面针碱在不同溶剂和外表活性剂溶液中的平衡溶解度以及在正辛醇-水/缓冲液体系中的表观油水分配系数。方法采用高效液相色谱法测定氯化两面针碱在不同溶剂和外表活性剂溶液中的浓度，用摇瓶法测定氯化两面针碱的表观油水分配系数。结果37下氯化两面针碱在水、甲醇、无水乙醇、60%乙醇、石油醚中的平衡溶解度分别为363.72，1047.23，301.92，695.62，2.89gL-1，泊洛沙姆188，吐温-80和PEG400对氯化两面针碱有较强的增溶才能；氯化两面针碱表观油水分配系数为54.61。结论氯化两面针碱的水溶解性较差，外表活性剂能进步氯

2、化两面针碱在水中的溶解度。【关键词】氯化两面针碱；平衡溶解度；表观油水分配系数氯化两面针碱(nitidinehlride)是从芸香科花椒属植物两面针的枯燥根中提取的一种生物碱1，其原植物两面针Zanthxylnitidu(Rxb.)D主要分布于广东、广西、云南、福建等南方省份，广西资源尤为丰富。氯化两面针碱化学构造见图1是两面针的主要有效成分，分子式为21H184Nl2H22，是两面针及其制剂的主要质量控制指标成分。近年来研究发现两面针碱的抗肿瘤活性较强，在抗肿瘤治疗方面氯化两面针碱具有比拟广泛的开发利用价值和应用前景。本实验对氯化两面针碱在不同溶剂中的溶解特性、不同外表活性剂对其增溶情况及表

3、观油水分配系数进展测定，为开发研制氯化两面针碱靶向制剂提供参考。1仪器与试药1.1仪器美国aters-1525高效液相色谱仪aters1525binaryHPLPup；aters2487DualAbsrbaneDetetr；Breeze3.3工作站；上海梅特勒-托利多PHS-2酸度计；德国Eppenndrf5810R型高速冷冻离心机；美国TherFrarbitalshaker-420恒温气浴振荡器。1.2药品与试剂氯化两面针碱原料药课题组自制，经HPL检测含量达95%；氯化两面针碱标准品中国药品生物制品检定所，批号：070612；吐温-80GenebaseGene-Teh.，Ltd.，批号：2

4、42108；聚乙二醇400汕头市西陇化工厂，批号：060723；泊洛沙姆188德国SIGA公司；胆酸钠德国SIGA公司；脱氧胆酸钠德国SIGA公司；配制溶液所用水均为单蒸水；其余试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件色谱柱为江苏汉邦18(2504,5)；流动相为乙腈0.15%磷酸=3268；检测波长271n；流速1lin-1；柱温30；进样量10l。在上述色谱条件下，氯化两面针碱保存时间约为6.0in，柱效不低于5000。结果见图2。2.2不同溶剂中氯化两面针碱平衡溶解度的测定3，42.2.1标准曲线的制备精细称取枯燥至恒重的氯化两面针碱对照品2g，置10l容量瓶中加甲醇适量，超声溶解，放

5、冷，加甲醇至刻度，摇匀，得质量浓度为200gL-1的贮备液。分别精细量取贮备液适量，置于10l容量瓶中，加甲醇至刻度摇匀，得到1.25，2.50，5.00，12.50，25.00gL-1的标准系列溶液，精细汲取各标准系列溶液10l注入高效液相色谱仪，记录其峰面积。以所得峰面积A对浓度进展回归分析，得回归方程A=56548X-2724.7，r=0.9995。结果说明，氯化两面针碱在1.2525.00gL-1内，浓度和峰面积之间呈良好的线性关系。2.2.2供试品溶液的制备配制质量浓度分别为5.0，10.0，20.0，40.0，60.0，100.0gl-1的吐温-80、PEG-400、泊洛沙姆188

6、、胆酸钠、去氧胆酸钠系列水溶液。2.2.3平衡溶解度的测定取过量氯化两面针碱置于具塞玻璃试管中，分别参加水、甲醇、无水乙醇、60%乙醇、石油醚及质量浓度分别为5.0，10.0，20.0，40.0，60.0，100.0gl-1的吐温-80、PEG-400、泊洛沙姆188、胆酸钠、去氧胆酸钠系列水溶液，超声至药物不再溶解，放入恒温气浴振荡器中，温度保持为371，振摇24h。将饱和的氯化两面针碱溶液以10000r/in的速度离心10in，取上清液用甲醇适当稀释后，取10l进样，记录峰面积。氯化两面针碱在不同溶剂中的平衡溶解度结果见表1。在37条件下氯化两面针碱在各外表活性剂溶液中的平衡溶解度见图3。

7、表137条件下氯化两面针碱在有机溶剂中的平衡溶解度略由图3可见37条件下，外表活性剂泊洛沙姆188、吐温80、PEG400均能增加氯化两面针碱在水溶液中的溶解度。2.3氯化两面针碱表观油水分配系数的测定572.3.1标准曲线的制备精细称取枯燥至恒重的氯化两面针碱对照品2g，置10l容量瓶中加甲醇适量，超声溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，得质量浓度为200gL-1的贮备液。分别精细量取贮备液适量，置于10l容量瓶中，加甲醇至刻度摇匀，得到0.625，1.25，2.50，5.00，20.00gL-1的标准系列溶液，精细汲取各标准系列溶液10l注入高效液相色谱仪，记录其峰面积。以所得峰面积A对浓度进

8、展回归分析，得回归方程A=57476X-1626.2，r=0.9997。结果说明，氯化两面针碱在0.62520.00gL-1内，浓度和峰面积之间呈良好的线性关系。2.3.2供试品溶液的制备取适量氯化两面针碱溶解于被水饱和的正辛醇中，制成药物的正辛醇溶液，精细量取该溶液1l置于具塞试管中，再分别参加被正辛醇饱和的水，pH值为1.2的盐酸溶液、pH值为3.0，5.0，6.8，7.4的磷酸盐缓冲液1l。转贴于论文联盟.ll.2.3.3表观油水分配系数的测定将上述配制好的样品放入恒温气浴振荡器中，温度保持(371)，振摇24h，样品以10000r/in速度离心10in，取下层水溶液10l进样超过线性范

9、围的样品用甲醇稀释，记录峰面积。将药物的正辛醇溶液用甲醇适当稀释，取10l进样，记录峰面积。氯化两面针碱的油水分配系数计算公式如下：Papp=(0V0-V)V上式中Papp为氯化两面针碱的表观油水分配系数，0为氯化两面针碱在正辛醇中的初始浓度，为药物分配平衡时在水相中测得的氯化两面针碱浓度，V0为正辛醇溶液的体积，V为水溶液的体积。氯化两面针碱在正辛醇-水中的分配系数为54.61，在pH1.0盐酸溶液中的表观分配系数为14.92，在系列磷酸盐缓冲溶液中随着pH值的增加，其分配系数也增大。正辛醇/缓冲液分配系数受缓冲液pH值影响较大。结果见图4。3讨论本文建立了HPL方法测定氯化两面针碱浓度的方

10、法，实验结果说明，该方法操作简单、精细度好、准确度高，能灵敏快速的检测样品中氯化两面针碱的含量。本文采用摇瓶法测定药物在油/水相中的分配系数，在测定分配系数前，应使正辛醇和水互相饱和，静置分层后两相别离，保存备用。平衡时间以药物在水相中到达平衡的时间来计。测定药物的分配系数时，选择油相和水相不互溶的有机溶剂，在处方设计中油相多项选择用正辛醇，因为其溶解度参数与生物膜整体的溶解度参数很接近，目前文献810也多以正辛醇作为有机相。本实验考察了5种外表活性剂对氯化两面针碱的增溶效果，发现泊洛沙姆188、吐温80、PEG400具有增溶效果，其中PEG400的增溶幅度最大，可考虑将其用于氯化两面针碱制剂处方溶出介质。氯化