实验三：菌种保存及细菌形态观察课件

1、菌种保存及细菌形态观察2010.10 2010.1210/1/2022实验目的1.了解简单染色法和革兰氏染色法的原理，掌握具体操作方法2.了解细菌芽孢染色法的原理，掌握具体操作方法3.学习并掌握微生物涂片、染色的基本技术和无菌操作技术4.学习油镜的使用方法5.初步认识细菌的宏观和个体特征2实验原理微生物培养技术斜面接种液体培养基接种穿刺接种3 形态观察主要包括群体的形态和个体的形态观察。 细菌的基本形态主要分为球菌、杆菌、螺旋菌三大类，近年还发现星状和四方形细菌等。细菌形态受培养时间、培养基成分、浓度、培养温度、培养时间等发生变化。 细菌菌落大多表面光滑湿润，有光泽，一般菌落较小，质地颜色均匀

2、，同培养基结合不紧密。 细菌个体微小，较透明，必须染色方可呈现。根据细菌个体形态观察的不同要求，可将染色分为3种类型：简单染色、鉴别染色、特殊染色。1.细菌4棒状杆菌丝状菌链球菌及螺旋菌53.革兰氏染色法原理 细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌G+），后者为革兰氏阴性菌（G-）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。7 芽孢壁比营养细胞的细胞壁结构复杂而且致密，透性低，着色和脱色较营养细胞难。用着色力强的碱性染料在微火上加热，或

3、延长染色时间，使菌体和芽孢同时染色后，用蒸馏水冲洗，脱去菌体颜色，保留芽孢的颜色。并用另一种对比鲜明的染料使菌体着色。4.芽孢染色原理8试剂与器材1、材料 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、四联球菌、枯草芽孢杆菌（培养12h-18h）、酵母菌2、试剂 吕氏碱性美蓝染液（或草酸铵结晶紫染液）、齐氏石炭酸复红染液、革兰氏染色液（结晶紫液、碘液、95乙醇、番红液）、5孔雀绿水溶液、0.5番红水溶液3、器材 显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、双层瓶（内装香柏油及二甲苯）、擦镜纸、生理盐水、滤纸等。10实验内容一.菌种保存二.简单染色法三.革兰氏染色法四.芽孢染色法11菌种保存a.斜面接种：由已长好微生物的斜面中

4、挑取少量菌种接种至另一空白斜面培养基上。配制牛肉膏蛋白胨培养基每班配制500ml，每组分装2支试管，摆斜面。 1.接种前用记号笔在距试管口23cm位置上，注明菌名、接种日期等。 2.将试管放于手掌中，并用手指夹住，使两支试管呈“V”字形。 3.用火焰将接种环烧红，然后将接种环来回通过火焰数次。 4.用小指、无名指和手掌拔下试管塞，并持于手中。 5.将试管口在火焰上微烧一周。 6.将烧过的接种环伸入菌种管内，先将环接触一下没有长菌的培养基部分，使其冷却， 以免烫死菌体，然后用环在菌苔上轻轻地接触，刮下少许培养物，并将接种环慢慢的从试管中抽出，并迅速地伸入另一试管中，在斜面上划线（波浪或直线），使

5、菌体沾附在培养基上。 7.将接种环抽出，灼烧管口。 8.塞上棉塞。 9.将接种环经火焰灼烧灭菌。12细菌形态观察14一、简单染色实验步骤1、涂片金黄色葡萄球菌2、干燥：室温自然干燥3、固定：通过火焰23次，细胞质凝固4、染色：滴加染液5、冲洗：水洗至无色6、干燥：自然，吹干，吸干7、镜检. 15染色显示革兰氏阳性阴性细菌17三、芽孢染色1.制片：挑取菌（枯草杆菌）做常规涂片、干燥、固定2.染色：加数滴孔雀绿染液于涂片上，用木夹夹住载玻片一端，在微火上加热至染料冒蒸汽开始计时，维持5min（加热过程中要及时补染液，切勿干涸）3.流水冲洗：待玻片冷却后，洗至无色4.番红复染：2min5.水洗：缓流水洗后，吸干6.镜检：芽孢绿色，芽孢囊及营养体为红色。18实验结果绘图表示你观察到的芽孢杆菌的芽孢形状、大小、着生位置上有什么不同？19革兰氏阴性菌革兰氏阳性菌20绿色的为芽孢图中绿色的为芽孢21注意事项1.涂片时水滴不要过大，菌体最好涂成一个薄膜，而且均匀。2.干燥是室温自然干燥。3.固定是通过火焰23次，不可以加热过久。4.染色时滴加染液覆盖上菌体薄膜即可。5.冲洗是水洗至无色，要注意水流是有一个角度，从载片 的 一端自然流到另一端，但是水流要通过染色过的菌体薄膜。水流不宜过大，防止将菌体冲走。6.镜检时，油镜与普通的物镜要严格的按照操作规程执行。7. 在染色过