槲皮素铜(Ⅱ)配合物清除自由基活性的研究

1、槲皮素铜()配合物去除自由基活性的研究【摘要】目的研究槲皮素铜()配合物的抗氧化作用。方法采用DPPH法和NBT法分别测定了槲皮素铜()配合物对二苯代苦味肼基自由基DPPH和超氧阴离子2-的去除作用。结果槲皮素铜()配合物能有效去除DPPH和2-，其去除才能均强于单独的槲皮素。结论槲皮素铜()配合物是一种较强的自由基去除剂，具有较高的SD活性。【关键词】槲皮素；铜()配合物；自由基；抗氧化作用Keyrds：Queretin；upriplexes；Freeradial；Antixidatin槲皮素queretin,3,5,7,3,4-五羟基黄酮Que广泛存在于植物界，大约68%的植物中都含有。槲

2、皮素药理作用广泛，具有降血压、降血脂、扩张冠状动脉、抗血小板聚集、抗炎、抗过敏、抗氧自由基和抗心律失常等多种生物活性及药理作用13。根据中药配位化学原理，中药有机成分与微量元素结合后往往会进步其生物活性或产生新的生物活性4。槲皮素对金属离子具有强烈的螯合作用，生成的配合物往往具有较强的荧光，所以槲皮平素用于金属离子的荧光分析5，6。近来研究说明槲皮素与Fe，Pb，d等金属离子形成配合物后生物活性和药理作用明显增强7，8，这对天然药物的开发利用开拓了新的途径。本文研究了槲皮素铜配合物去除DPPH自由基和超氧阴离子2-的作用，初步讨论了配合物与2-的反响机理。1材料与方法1.1试剂与仪器二苯代苦味

3、肼基自由基DPPH、黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶、氯化硝基四唑氮蓝NBT均为Siga产品。槲皮素Queetin购于成都超人植化BR。槲皮素铜配合物按文献9提供的方法合成，所有其它试剂均为分析纯。756型紫外可见分光光度计，石英比色皿。1.2体外去除DPPH自由基的作用DPPH用无水乙醇配制成0.65l/L的溶液，临用时稀释。DPPH溶液的浓度在0.01l/L0.08l/L范围内与其在517n处的吸光度线性相关，其线性回归方程为：A=0.1337DPPH-0.0091，r2=0.9981。样品溶液用11v/v的DF-乙醇溶液配制，在1.9l0.065的DPPH溶液中参加0.1l不同浓度的样品溶液。于室温

4、下反响30in，在517n下测定吸光度Ai。以相应溶剂代替样品作为空白对照，吸光度为Aax，相应样品溶液的吸光度为A0。每个样品做3次平行样，取其平均值。DPPH自由基的去除活性按下式计算：DPPHSavenging(%)=(1-Ai-A0Aax)100%半数去除浓度E50根据实验结果计算。1.3体外去除超氧阴离子2-的作用0.1l样品溶液加到含有0.4l/L黄嘌呤、0.24l/LNBT的pH=8.0的0.1l/L磷酸盐缓冲体系中，然后再参加黄嘌呤氧化酶溶液1l混合均匀。反响混合物在37水浴中反响20in。然后参加2l69l/L的十二烷基苯磺酸钠SDS溶液终止反响，在560n下测其吸光度Ai，

5、以相应溶剂代替样品作为空白对照，吸光度为A0。每个样品做3次平行样，取其平均值。2-去除活性按下式计算：2-Savenging(%)=Ai-A0Aax100%半数抑制浓度I50根据实验结果计算。2结果3讨论槲皮素是抗氧化才能较强的一种黄酮类化合物，能有效去除多种活性氧自由基。从槲皮素的构造来看，其B环上的3，4-邻位羟基是其能有效去除2-的主要原因10。槲皮素的3H4=和3，4-H能和两个铜离子发生配位形成槲皮素铜(II)配合物11。槲皮素铜(II)配合物的去除自由基的活性比单独的槲皮素的活性要高。槲皮素铜(II)配合物虽然没有了邻位的羟基，但仍然表现出较高的自由基去除才能，这可能与u(II)的配位有关。当配合物溶于水时，水分子有可能在配合物分子平面上下方配位，而形成变形的四方锥或八面体构型。由于水分子配位较弱，水分子易被2-取代，同时又由于配体分子呈平面构造12，位阻小，有利于2-向中心离子靠近，其反响的可能机理如图3所示。因此槲皮素铜(II)配合物有可能和其它金属配合物13，14一样具有类似SD的活性。配合物中的两个u()对去除2-是否具有协同作用，还有待进一步研究。本实验