植物生理生化实验

1、-. z.植物生理生化实验复习习题一、名词解释：标准曲线:用标准溶液制成的曲线。先配制一系列不同浓度的标准溶液，在溶液最大吸收波长下，逐一测定吸光度，然后用坐标纸以溶液浓度为横坐标，吸光度为纵坐标作图， 假设被测物质对光的吸收符合光的吸收定律， 必然得到一条通过原点的直线， 即标准曲线。斐林Folin酚试剂法:又称lowry法，它结合了双缩脲试剂和酚试剂与蛋白质的反响，是双缩脲方法的进一步开展，可利用其在650nm波长下的特定吸收进展比色测定。茚三酮显色法:游离氨基酸与茚三酮共热时，能定量生成紫色的二酮茚-二酮茚胺。其吸收峰在570nm，而且在一不定期*围内吸光度与游离氨基酸浓度成正比，因此可

2、用分光光度法测定其含量。茚三酮溶液与氨基酸共热，生成氨。氨、茚三酮 与 复原性茚三酮 发生反响，生成紫色化合物。该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成正比，通过测定570nm 处的光密度，可测定氨基酸的含量。氮素代谢:氮素及含氮的活体物质的同化、异化、排泄，总称为氮素代谢。淀粉酶：水解淀粉和糖原的酶类总称真空渗入: 指将叶片打孔放入注射器中，加水浸没，排出空气后用手指堵住前端小孔，同时 把 活塞向外抽拉，即可造成减压而排出组织中的空气，轻放活塞，水液即进入组织的方法。离心技术: 根据物质颗粒在一个实用的离心场中的行为而开展起来的是1.别离细胞器和生物大分子物质的必备的手段之一，也是2.测定*些纯品

3、物质的局部性质的一种方法。差速离心法基于待测物质颗粒大小、密度、沉降速度 的不同 而得到别离。电泳:各种生物大分子在一定pH条件下，可以解离成带电荷的颗粒,这种带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动利用带电粒子在电场中移动速度不同而到达别离的技术称为电泳技术。同工酶: 指催化同一种化学反响，但其酶本身分子构造和带电性质却有所不同的一组酶。迁移率:指带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度。溶液中带电粒子在电场中向着与它电性相反的电极移动，它的移动速度是电场和粒子的有效迁移率(m)的乘积，即：V=mE。聚丙烯酰胺凝胶: 一种人工合成凝胶。以丙烯酰胺为单位， 由甲叉双丙烯酰胺交联成的，经枯燥粉

4、碎或加工成形制成粒状，控制交联剂的用量可制成各种型号的凝胶浓缩胶：5%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺凝胶浓度较低，孔径较大，有堆积作用，把较稀的样品加在浓缩胶上，经过凝胶的迁移作用，样品被浓缩至一个狭窄的区带，使其在进入别离胶之前在同一水平线上别离胶：10%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺，凝胶浓度较高，孔径较小，施加电压的时候，小的蛋白可以穿过孔跑到下面去，分子量大的蛋白就可能被拦住，就跑的慢，通过这种方式以分子量大小的区别来别离蛋白质。酶活力 ：又称酶活性，指酶催化一定化学反响的能力。比活力：每毫克蛋白质所具有的酶活力单位数 酶活力单位/mg蛋白质比活力的大小可以用来比拟酶制剂中单位质量蛋白质的催化能力

5、，衡量酶的纯度种子生活力: 指种子潜在的发芽能力或种胚具有的生命力。抗逆性: 植物对逆境的抵抗和忍耐能力，简称为抗性。光合速率: 单位时间、单位叶面积吸收CO2或放出O2的量。呼吸速率: 单位时间鲜重或干重的植物组织或原生质释放的CO2或吸收O2的量无土培养:不用土壤而用加有养分溶液的物料作为植物生长介质的栽培方法。超氧化物歧化酶SOD)：普遍存在于动、植物体内，是一种去除超氧阴离子自由基的酶。硝酸复原复原酶:植物氮素同化的关键酶,催化植物体内硝酸盐复原成亚硝酸盐的反响。诱导酶：又称适应酶，指植物体内本来不含有，但在特定外来物质的诱导下诱导生成的酶。E.g.硝酸复原酶可为NO3-诱导生成。二、

6、填空：在测定植物可溶性蛋白质含量时，绘制标准曲线是以标准蛋白质浓度为横坐标，以 吸光值为纵坐标。常用的测定植物可溶性蛋白质含量的方法有：Folin-酚试剂法(Lowry 法)、考马斯亮蓝法和紫外吸收法用滴定法测Vc含量时，假设样品本身带有颜色，则需先将样品用_草酸_ 处理。用茚三酮显色法测定植物组织氨基酸含量时，茚三酮溶液与氨基酸共热生成氨，氨_与茚三酮和复原性茚三酮反响，生成蓝紫色的二酮茚胺。该化合物颜色的深浅与氨基酸的含量成 正比，可通过测定570 nm处的光密度，求出氨基酸的含量。在测定淀粉酶的活性时：淀粉酶不耐酸，淀粉酶不耐热。在测定淀粉酶活性时，3，5二硝基水杨酸试剂DNS的作用是1

7、、与复原糖显色生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸 2、终止酶活性。聚丙烯酰胺凝胶电泳别离过氧化物同工酶实验中，电泳存在三大效应，分别是 浓缩效应、 分子筛效应和 电荷效应。测定硝酸复原酶活性的方法有 活体法和 离体法。用活体法测定硝酸复原酶的材料，取样前叶子需进展一段时间的光合作用，以积累光合产物，产生更多NADH ，加速硝酸盐的复原。叶绿素吸收光谱有 红光 和 蓝紫光 区两个最强吸收区。类胡萝卜素吸收光谱最强吸收区在蓝紫光，它不仅可以吸收传递光能，还具有 保护叶绿素的作用。叶绿素溶液在透射光下呈绿色，在反射光下呈暗红色。缺 N 和缺 Fe 都能引起缺绿病， 二者区别在于缺氮 老叶 病。缺乏

8、必需元素Mg、 N 、Ka等，均可引起植物产生缺绿病。缺钙(Ca)症首先会表现于植物的嫰 叶上。植物光合速率测定方法有 红外线CO2气体分析法和 改进半叶法等。植物呼吸速率常用的测定方法有_红外线法 CO2气体分析法和改进半叶法在研究植物矿质元素中,常用的植物溶液培养法有 水溶液培养法、 砂基培养法和 气栽法 。常用水溶液培养法确定植物生长的必需元素。水培时要选用黑色容器装营养液，这是为了防止藻类滋生。在植物生理研究中常用的完整植物培养方法有 _、 _ 、_和_。三、选择题：1、*蛋白质pI为7.5，在pH6.0 的缓冲液中进展自由界面电泳，其泳动方向为 A A、向负极移动 B、向正极移动 C

9、、不运动 D、同时向正极和负极移动在7.5的时候，这个蛋白质为电中性，不带电而6.0的时候更酸，结合上的氢就多，于是呈正电性于是就向负极去了2、进展酶活力测定时A A、底物浓度必须极大于酶浓度B、酶浓度必须极大于底物浓度，C、酶能提高反响的平衡点 D、与底物浓度无关3、蛋白质分子中含有共轭双键的酪氨酸、色氨酸等芳香族氨基酸。它们具有吸收紫外光的性质，其吸收顶峰在D波长处A、260nm B、650nm C、540nm D、280nm4、Folin-酚试剂法(Lowry法)测定蛋白质浓度时，用B 波长比色，测定光密度值。A、260nm B、650nm C、540nm D、280nm5、不连续聚丙烯

10、酰胺凝胶电泳比一般电泳的分辨率高，是因为具有以下哪种效应？ ABC A、浓缩效应B、电荷效应C、分子筛效应D、粘度效应6. 硝酸复原酶与亚硝酸复原酶 ( D )A.都是诱导酶 B.硝酸复原酶不是诱导酶，而亚硝酸复原酶是 C.都不是诱导酶D.硝酸复原酶是诱导酶，而亚硝酸复原酶不是 7、酶的别离提纯过程中，不正确的操作是C 。A、需在低温下进展，一般在05之间B、酶制剂制成干粉后可保存于4冰箱中C、需经常使用巯基乙醇以防止酶蛋白二硫键发生复原D、提纯时间尽量短8、在提取叶绿素时，研磨叶片时参加少许CaCO3，其目的是D A.使研磨更充分 B.加速叶绿素溶解 C.使叶绿素a、b别离 D.保护叶绿素1

11、0、一般而言，正常植物叶片的叶绿素与类胡萝卜素的比值为B A.2:1 B.3:1C.1 :2 D.1:311、叶绿素卟啉环的中心原子是 C A. Cu B. Fe C. MgD. Mn12、测定叶绿素总量时，分光光度计选用的波长是 D A.663nm B.645nm C.430nm D.652nm13、在95%提取液中,叶绿素a在红光区的最大吸收峰为 ( D )。A、 470 nm B、649 nm C、 656 nm D、665 nm14、植物的幼嫩局部，亏缺以下哪种元素时，缺素症首先表现出来。B A. K B. Ca C. P D. N 15、以下元素中，属于必需的大量元素有B A、铁B、

12、氮C、硼D、锌16、高等植物的老叶由于缺少*一种元素而发病，下面元素属于这一类的有 A A、氮B、钙C、铁17、呼吸作用的底物为( A )。A、有机物和O2B、CO2和H2O C、有机物和CO217、光合作用的底物为( B )。A、有机物和O2B、 CO2和H2OC、有机物和CO219、小蓝子法测定呼吸强度生成的白色沉淀是( A ) A、 BaCO3B、Ba(COO)2C、Ba(D、CaCO3Ba(OH)2+ CO2BaCO3+ H2O20、TTC法测定种子生活力的试验中，活种子的现象为 ( A )。A、种胚全部染成红色B、种胚全部未染色C、种胚全部染成黑色D、种胚非关键部位染色，而胚根和胚芽

13、的尖端都不染色21、小篮子法测定呼吸强度中，假设在滴定时，外界CO2进入呼吸测定装置内，会使测得的结果(A )。A、偏大B、偏小C、不变D、不一定三、简答题1、怎样提高样品测定的准确性答：正确采集代表性样品选择适宜的测定方法减少测定误差正确记录和处理测定数据 。2、植物材料的取样有哪些方法？ 答：原始样品的取样法：随机取样、对角线取样。平均样品的采样法：混合取样法、按比例取样法。3、简述分光光度计的使用方法。答：检查721A型分光光度计的旋钮和开关，使其回复零点。按要求接通电源，按下T键，翻开暗盒盖和电源开关，指示灯亮。预热20分钟。调节波长旋钮至所需波长。选定波长取比色皿分别盛装B、S、U液

14、，置入检测室比色皿先用蒸馏水洗后，再用比色液润洗才能装比色液。B液对准光路。调节面板零位细调，使指示为00.0，即透射比T的零点，同时一号闪跃。合下检测室盖.调节光量粗、细调电位器，使指示为100.0，须反复5、6两点操作到达稳定。按下A键，指示为.000”同时一闪跃，如果指示读数不是比值时，应调节消光调零电位器，使其到达要求。拉出或推入拉杆，使U、S液分别置于光路读取A值，然后移动拉杆，读B管A值，如为0，则前述A值有效。在稳定时，重复读数一次，并按下T键。翻开检测室盖，取出比色皿，倾去比色液于水槽中，用自来水冲洗干净，倒置于外表皿铺有滤纸中。11关上电源开关，拔出电源插头，取出比色皿架，检

15、查检测室内是否有液体溅出，并擦净。检测室内放入硅胶袋，合上盖，套上仪器罩。预热仪器选定波固定灵敏度档调节0点调节 T=100%测定关机4. 请介绍3种常用的可溶性蛋白质的测定方法。答：.5、简述斐林酚试剂法测定植物可溶性蛋白质的原理。188页在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物，Folin酚试剂中的磷钼酸盐磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基复原，产生深蓝色钼兰和钨兰的混合物。在一定的条件下，蓝色深度与蛋白的量成正比。6、植物组织可溶性蛋白质含量的测定中，斐林酚试剂法、考马斯亮蓝法两种方法各有何优缺点？7、Folin-酚试剂法测定植物可溶性蛋白质时受哪些因素的干扰？答： Folin

16、-酚试显色反响是由络氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起的，因此样品中假设含有酚类、柠檬酸和巯基类化合物均有干扰作用。此外，不同蛋白质音络氨酸、色氨酸含量的不同而使显色强度稍有差异。8、用茚三酮显色法测定植物组织氨基酸时，参加Vc的作用是什么？ 答：防止复原型茚三酮在含氧量高的情况下再氧化9、茚三酮显色法测定植物组织氨基酸时为什么要除去蛋白质？用10%乙酸除去蛋白质的原理是什么？3四、计算题1、斐林酚试剂法测定植物可溶性蛋白质实验中，以标准蛋白含量为横坐标，以650nm吸光度为纵座标，所得标准曲线如以下图所示。实验中称取鲜样0.5g，用5ml蒸馏水提取，取0.1ml提取液同标准曲线测定650nm处吸光度

17、为0.50，请从标准曲线查出相应的蛋白质含量ug，根据有关公式，求出每克样品中的蛋白质毫克数。 解：由标准曲线查出0.1ml提取液中蛋白质含量为67ug 可得，每克样品中的蛋白质毫克数=(67*5)/(0.1*0.5*1000)=6.7mg/g2、称取1g叶片和0.3g花瓣，用5 mL提取液分别提取它们的SOD粗酶液，在3 mL反响体系中参加10L粗酶液反响20 min后测得OD分别为： 叶片 花瓣 未加酶液对照OD 0.372 0.405 0.727SOD活解：叶片SOD酶活性：0.727-0.372*5000 =489.65U/g叶片鲜重0.727*50%*10*1花瓣SOD酶活性：0.727-0.405*5000 =1476.39U/g叶片鲜重0.727*50%*10*0.3用95