资料八乳铁蛋白可以向社会公开的内容

1、资料八乳铁蛋白可以向社会公开的内容无锡科捷诺生物科技有限责任公司第二部分通用名称、功能分类，用量和使用范围通用名称、功能分类，用量及使用范围详见下表:通用名称功能分类使用范围使用重(g/kg)备 注食品分类 号食品名称乳铁蛋白Lactoferrin营养强化 剂01.01.03调制乳1.001.02.02风味发酵乳1.001.03.02调制乳粉1.014.03.01含乳饮料1.013.01婴幼儿配方食 品1.0第三部分证明技术上确有必要和使用效果的资料或文件（一）重组人乳铁蛋白的开发应用及功能研究鉴于乳铁蛋白广泛的生物学功能，国际上开展了利用基因工程菌、 转基因植物、转基因动物大规模生产重组人乳

2、铁蛋白的研究与开发， 汇总结果如表6,同时相继开发了一系列以重组人乳铁蛋白为主要功 效成分的抗肿瘤、抗菌等新药和功能食品（表7）,表明国际上利用基因工程技术生产重组人乳铁蛋白已经日趋成熟，即将产业化。表6转基因表达重组人乳铁蛋白表达系统物种名称奔f文献微生物米曲霉Ward, P.P. 199216构巢曲霉Ward, P.P 199217黑曲变种泡盛曲霉Ward, P.P 199518昆虫杆状病毒Salmon, V. et al 199719酿酒酵母Liang, Q.W et al 199320巴斯德毕赤酵母Choi, B.K. et al 200821Jo, J.H et al 199422植

3、物烟草Mitra, A et al 199423土豆Chong, D.K et al 200024水稻Nandi, S. et al 200225Lin, C. et al 201026图丽参来源细胞Kwon, S.Y. et al 200327Jo, S.H. et al 200628梨树Malnoy, M. et al 200329大麦Kamenarova, K. et al 2007 30紫花苜.蓿Tanasienko, I.V. et al 201131动物家雷Liu, T et al 200532小鼠Platenburg, G.J. et al 199833Sokolov, A.V.

4、 et al 200634奶牛van Berkel,et al 200235,36鱼Zhong, J.Y. et al 200237兔子Li, L. et al 200638山羊Han,乙S. et al 200739Zhang, J. et al 200840鸡utykhina, I.L. et al 200941表7国际上正在开发的乳铁蛋白产品表适应症公司表达宿主状态肾细胞癌Agennix基因一工程酵母完成临床II期恶性脓毒症Agennix基因一工程酵母完成临床II期非小细胞肺癌Agennix基因一工程酵母临床iii期早产儿医院感染Agennix基因一工程酵母临床i/ii期粘膜炎Agenn

5、ix基因一工程酵母临床i/ii期哮喘Agennix基因一工程酵母临床i/ii期非小细胞肺癌NCI基因一工程酵母临床II期细菌感染AM-Pharma基因一工程酵母完成临床II期提高免疫力、补血Pharming转基因奶牛临床II期腹泻Ventria Bioscience转基因水稻FDA GRAS 认定资料源自：美国 NIH临床研究网以下是已在国外期刊杂志发表证明重组人乳铁蛋白有效功能的 论文摘要整理：1)调节先天免疫Spasaro M等人2008年在美国实验生物学会联合会会志 发表研究论文称 重组人乳铁蛋白能够促进人树突状细胞成熟， 调节先天性免疫42 (Lactoferrin, a major

6、defense protein of innate immunity, is a novel maturation factor for human dendritic cells)。2)免疫调节治疗作用Hwang等人2014年在国际免疫学杂志上发表称重组人乳铁蛋白对 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus MRSA) 的免疫调节性治疗作用，重组人乳铁蛋白能够促进感染MRSA的单核细胞和颗粒细胞 IFN-g 和 IL-2 的表达，抑制 TNF- a、IL-6、IL-1b、IL-12p40 和 IL-10 表达 43 (

7、Immunomodulatory effects of recombinant lactoferrin during MRSA infection)。Lewis MA等人2011年在J Clin Med Res杂志上发表研究论文称口服 重组人乳铁蛋白可以有效的延长转移性肾细胞癌病人的生命44 (Talactoferrinimmunotherapy in metastatic renal cell carcinoma: a case series of four long-term survivors)。Hwang SA等人2009年在疫苗杂志上发表论文称重组人乳铁蛋白增 强卡介苗免疫力，保护

8、结核杆菌感染的小鼠 的肺泡完整性45 (A novel recombinant human lactoferrin augments the BCG vaccine and protects alveolar integrity upon infection with Mycobacterium tuberculosis in mice)。Yakuwa K等人2007年在妇产科档案杂志上发表论文称重组人乳铁 蛋白能够抑制子宫的过早成熟预防早产的发生46 ( Recombinant human lactoferrin has a potential to suppresses uterine c

9、ervical ripening in preterm delivery in animal model)。Dial EJ等人2005年在药剂和药理学杂志杂志上发表论文称重组人 乳铁蛋白能够抑制非番醇类抗炎症药物引起的肠出血，表明重组人乳铁蛋白可用于治疗肠道损伤 47 ( Recombinant human lactoferrin prevents NSAID-induced intestinal bleeding in rodents)。Varadhachary A等人2004年在国际癌症杂志杂志上发表论文称重组 人乳铁蛋白作为安全无任何副作用的免疫调节剂，结合化疗药物可以有效的治疗癌症48

10、 (Oral lactoferrin inhibits growth of established tumors and potentiates conventional chemotherapy。3)补铁和抗菌Bethell DR等人2004年生物金属杂志上发表综述文章称重组人乳铁蛋 白可以用于治疗全球性的健康问题：缺铁性贫血和急性腹泻疾病49 (Recombinant human lactoferrin treatment for global health issues: iron deficiency and acute diarrhea。4)皮肤损伤修复Engelmayer J等人2

11、008年在外科研究杂志发表论文称重组人乳铁蛋 白调节免疫因子分泌，促进糖尿病模型鼠足溃烂部位的皮肤损伤修复。Lyons, T.E等人2007年在美国外科杂志发表论文称重组人乳铁蛋白 治疗糖尿病人的足溃烂的修复50 (Talactoferrin Alfa, a Recombinant HumanLactoferrin Promotes Healing of Diabetic Neuropathic Ulcers: A Phase 1/2 Clinical Study)。Tang L等人2010年同时在英国皮肤病需学杂志和创伤修复和再生 上发表研究论文，表明饱和铁的重组人乳铁蛋白能促进角质细胞增殖

12、和 迁移，并且抑制其凋亡，非常有利于皮肤的损伤后修复51,52 (Humanlactoferrin stimulates skin keratinocyte function and wound re-epithelialization 和 A rice-derived recombinant human lactoferrin stimulates fibroblast proliferation, migration, and sustains cell survival。(二)人乳铁蛋白相对于牛乳铁蛋白的生物活性优势及经济优势生物活性优势人乳铁蛋白在人乳中的高表达对婴幼儿的生长发育非常重

13、要，相比较而言，尽管人乳铁蛋白与牛乳铁蛋白有较大的同源性，但还是存在以下区别，及牛乳铁蛋白在牛乳中的低丰度表达。(1)人乳铁蛋白对胰酶的水解抵抗能力是牛LF的100倍53。(2)人小肠粘膜吸收人LF转运的铁是牛LF的5倍54,因而在胃 肠道内能够更好地发挥生物学作用。(3)牛LF与人肠上皮细胞受体的结合能力仅为人LF的1/555。综合以上三点，尤其是与同源受体的高亲合力以及人乳铁蛋白的应用消除了潜在的牛源蛋白的致敏性，人乳铁蛋白相对于牛乳铁蛋白更能有效的被人体吸收利用经济优势牛乳铁蛋白的有益功能使得其在市场的需求逐步增大，已成供不应求的态势，预期市场对乳铁蛋白的需求年增长率20%,如图1所示。

14、到2013年为止，市场对乳铁蛋白的需求量达到了216.5吨。图1牛乳铁蛋白市场需求趋势（二）在拟添加的食品中添加与否的效果对比根据GB14880-2012及卫生部公告2012年第15号的规定，乳铁蛋白的添加量设定为小于等于1.0 g/kg,添加食品类别为：调制乳、 风味发酵乳、调制乳粉、含乳饮料、婴幼儿配方食品。选取三类食品 风味发酵乳（酸奶）、调制乳粉、含乳饮料添加重组人乳铁蛋白，考 察其在在添加后对食品的功能属性的影响。我们选择 5 个不同添加量（0.00 g/kg；0.25 g/kg；0.5 g/kg；0.75 g/kg； 1.0 g/kg）人乳铁蛋白，分别添加到酸奶、配方乳粉、含乳饮料

15、三类食品中，考察不同时间食品的均匀性、溶解性、风味对比(滋气味， 口感，接受度)，人乳铁蛋白含量和铁元素的含量。关于考察时间，奶粉实验选择12个月，酸奶选择7天，含乳饮 料选择6个月。经过试验结果分析，不同时间食品的均匀性、溶解 性、风味对比(滋气味，口感，接受度)，人乳铁蛋白含量和铁的含 量并未发生显著变化。人乳铁蛋白在酸奶中的应用(1)实验目的：考察人乳铁蛋白在保质期内对酸奶的稳定性和风味 的影响。(2)实验方法:选择5个不同添加量(0.00 g/kg; 0.25 g/kg; 0.5 g/kg;0.75 g/kg; 1.0 g/kg)人乳铁蛋白，分别添加到酸奶中，考察 7天时间 内食品的均

16、匀性、溶解性、风味对比(滋气味，口感，接受度) ，人 乳铁蛋白含量和铁的含量。(3)实验结果：表11含人乳铁蛋白酸奶的均匀性对比添加量 (g/kg)1天2天3天4天5天6天7天0.00状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀0.25状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀0.5状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀0.75状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀1.0状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均_匀_状态均 匀表12含人乳铁蛋白酸奶的滋气味对比添

17、加量 (g/kg)1天2天3天4天5天6天7天0.002.02.02.02.02.02.02.00.252.02.02.02.02.02.02.00.52.02.02.02.02.02.02.00.752.02.02.02.02.02.02.01.02.02.02.02.02.02.02.0评分标准：-5-0-5分，以0分为基准，分值偏左的差，偏右的好表13含人乳铁蛋白酸奶的口感对比添加量 (g/kg)1天2天3天4天5天6天7天0.002.52.52.52.52.52.52.50.252.52.52.52.52.52.52.50.52.52.52.52.52.52.52.50.752.52.

18、52.52.52.52.52.51.02.52.52.52.52.52.52.5评分标准：-5-0-5分，以0分为基准，分值偏左的差，偏右的好表14含人乳铁蛋白酸奶的接受度对比添加量 (g/kg)1天2天3天4天5天6天7天0.002.52.52.52.52.52.52.50.252.52.52.52.52.52.52.50.52.52.52.52.52.52.52.50.752.52.52.52.52.52.52.51.02.52.52.52.52.52.52.5评分标准：-5-0-5分，以0分为基准，分值偏左的差，偏右的好表15含人乳铁蛋白酸奶的乳铁蛋白含量(g/kg)添加量 (g/kg)

19、1天2天3天4天5天6天7天0.00未检出未检出未检出未检出未检出未检出未检出0.250.240.250.250.260.250.240.240.50.510.500.500.500.480.510.500.750.750.760.760.770.750.740.751.00.980.991.021.001.010.991.00表16 含人乳铁蛋 白酸奶的铁元素含量 (mg/kg)添加量 (g/kg)1天2天3天4天5天6天7天0.003.243.243.253.243.253.243.240.253.253.253.253.253.253.253.250.53.253.263.253.263

20、.263.243.250.753.263.253.263.263.273.253.281.03.273.273.273.283.273.273.28人乳铁蛋白在含乳饮料中的应用(1)实验目的：考察人乳铁蛋白在保质期内对含乳饮料的稳定性和风味的影响。(2)实验方法：选择5个不同添加量(0.00 g/kg; 0.25 g/kg; 0.5 g/kg； 0.75 g/kg； 1.0 g/kg)人乳铁蛋白，分别添加到含乳饮料中，考 察6个月时间内食品的均匀性、溶解性、风味对比(滋气味，口感， 接受度)，人乳铁蛋白含量和铁的含量。(3)实验结果：表17添加人乳铁蛋白含乳饮料的均匀性对比添加量 (g/kg)

21、1个月2个月3个月4个月5个月6个月0.00状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀0.25状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀0.5状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀0.75状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀1.0状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀状态均 匀表18添加人乳铁蛋白含乳饮料的滋气味对比添加量 (g/kg)1个月2个月3个月4个月5个月6个月0.002.02.02.02.02.02.00.252.02.012.02.02.02.00.52.02.02.02.02.02.0

22、0.752.02.02.02.02.02.01.02.02.02.02.02.02.0评分标准：-5-0-5分，以0分为基准，分值偏左的差，偏右的好表19添加人乳铁蛋白含乳饮料的口感对比添加量 (g/kg)1个月2个月3个月4个月5个月6个月0.002.52.52.52.52.52.50.252.52.512.52.52.52.50.52.52.52.52.52.52.50.752.52.5 :2.52.52.52.51.02.52.52.52.52.52.5评分标准：-5-0-5分，以0分为基准，分值偏左的差，偏右的好表20添加人乳铁蛋白含乳饮料的接受度对比添加量 (g/kg)1个月2个月3

23、个月4个月5个月6个月0.002.52.52.52.52.52.50.25r 2.52.512.52.5P 2.52.50.52.52.52.52.52.52.50.752.52.5 12.52.52.52.51.02.52.52.52.52.52.5评分标准：-5-0-5分，以0分为基准，分值偏左的差，偏右的好表21添加人乳铁蛋白含乳饮料的乳铁蛋白含量(g/kg)添加量 (g/kg)1个月2个月3个月4个月5个月6个月0.00未检出未检出未检出未检出未检出未检出0.250.270.25 :0.260.250.260.240.50.510.530.500.480.480.510.750.750

24、.78 10.780.770.750.741.00.981.031.011.051.010.99表22添加人乳铁蛋白含乳饮料的铁离子含量(mg/kg)添加量 (g/kg)1个月2个月3个月4个月5个月6个月0.004.574.584.554.564.584.570.254.574.5814.574.574.594.580.54.594.594.584.574.594.600.754.614.60 14.604.604.604.601.04.624.624.614.604.624.62人乳铁蛋白在奶粉中的应用(1)实验目的：考察人乳铁蛋白在保质期内对奶粉的稳定性和风味的影响。 实验方法：选择5个

25、不同添加量(0.00 g/kg;0.25 g/kg;0.5 g/kg;0.75 g/kg; 1.0 g/kg)人乳铁蛋白，分别添加到奶粉中，考察 12个月 时间内食品的均匀性、溶解性、风味对比(滋气味，口感，接受度)， 人乳铁蛋白含量和铁的含量。(3)实验结果：表23添加人乳铁蛋白奶粉的均匀性对比添加量 (g/kg)2个月4个月6个月8个月10个月12个月0.00状态均匀状态均匀状态均匀状态均匀状态均匀状态均匀0.25状态均匀状态均匀1状态均匀状态均匀状态均匀状态均匀0.5状态均匀状态均匀状态均匀状态均匀状态均匀状态均匀0.75状态均匀状态均匀状态均匀状态均匀状态均匀状态均匀1.0状态均匀状态

26、均匀状态均匀状态均匀状态均匀状态均匀表24添加人乳铁蛋白奶粉的滋气味对比添加量 (g/kg)2个月4个月6个月8个月10个月12个月0.002.02.02.02.02.02.00.25r 2.02.012.02.02.02.00.52.02.02.02.02.02.00.752.02.0 12.02.02.02.01.02.02.02.02.02.02.0评分标准：-5-0-5分，以0分为基准，分值偏左的差，偏右的好表25添加人乳铁蛋白奶粉的口感对比添加量 (g/kg)2个月4个月6个月8个月10个月12个月0.002.52.52.52.52.52.50.252.52.52.52.52.52.

27、50.5P 2.52.512.52.52.52.50.752.52.52.52.52.52.51.02.52.52.52.52.52.5评分标准：-5-0-5分，以0分为基准，分值偏左的差，偏右的好表26添加人乳铁蛋白奶粉的接受度对比添加量 (g/kg)2个月4个月6个月8个月10个月12个月0.002.52.52.52.52.52.50.252.52.512.52.52.52.50.52.52.52.52.52.52.50.752.52.5 12.52.52.52.51.02.52.52.52.52.52.5评分标准：-5-0-5分，以0分为基准，分值偏左的差，偏右的好表27添加人乳铁蛋白奶

28、粉的乳铁蛋白含量(g/kg)添加量 (g/kg)2个月4个月6个月8个月10个月12个月0.00未检出未检出未检出未检出未检出未检出0.250.260.2510.250.260.250.240.50.540.530.500.520.530.520.750.770.76 10.760.750.750.741.00.981.021.011.031.021.01表28添加人乳铁蛋白奶粉的铁离子含量(mg/kg)添加量 (g/kg)2个月4个月6个月8个月10个月12个月0.008.278.288.288.288.278.290.25P 8.278.2718.298.298.298.290.58.28

29、8.298.308.298.308.300.758.298.30 18.308.308.308.301.08.298.318.318.318.308.31综上所述，选择5个不同添加量(0.00 g/kg; 0.25 g/kg; 0.5 g/kg;0.75 g/kg; 1.0 g/kg)人乳铁蛋白，分别添加到酸奶、配方乳粉、含乳 饮料三类食品中，不同时间食品的均匀性、溶解性、风味对比(滋气 味，口感，接受度)，人乳铁蛋白含量和铁的含量并未发生显著变化。添加人乳铁蛋白牛奶的功能性研究结果重组人乳铁蛋白有很多有益功能，目前研究性研究成果如下表29所示:表29重组人乳铁蛋白功能研究结果归纳功能类别义献

30、调节先天免疫Spasaro M, 2008免疫调节治疗Hwang,2014;LewisMA,2011;HwangSA, 2009;YakuwaK,2007;Dial EEJ,2005;VaradhacharyA,2004;补铁抗菌Bethell DR, 2004皮肤损伤修复EngelmayerJ, 2008; Lyons T.E.,2007; Tangl, 2010促进生长发育王小丹等，2011改善缺铁性贫血王小丹等，2012调节肠道菌群Hu W,2012增加小肠内微绒毛长 度，改善肠道健康状况Cooper CA,2013使用从基因工程奶牛牛乳中分离纯化出来的人乳铁蛋白饲喂 大鼠，具有促进大鼠

31、生长发育的作用，饲喂组的体重、身长及食物 利用率指标均显著高于对照组56。止匕外，从基因工程奶牛牛乳中 分离纯化出来的人乳铁蛋白对缺铁性贫血大鼠铁的营养状况有一 定的改善作用57。含有人乳铁蛋白的基因工程奶牛牛奶饲喂仔猪， 可以调节仔猪的肠道菌群，使其肠道内容物的菌群培养计数结果表 明，回肠中的沙门氏菌的数量显著降低，而大肠杆菌的数量在十二 指肠、空肠、回肠、结肠4个肠道中，人乳铁蛋白饲喂组都显著降 低。而双岐杆菌的数量在回肠中，人乳铁蛋白饲喂组有显著升高，乳酸杆菌的数量，在4个肠道中都更高58,见表30。同时，有研究 表明，用含有人乳铁蛋白的基因工程牛奶饲喂仔猪，可以降低系统 性炎症发生并增

32、加小肠内微绒毛的长度和肠道隐窝的深度，有效改 善胃肠道的健康状况59,见表31。另外，中国农业大学研究有证 据表明，人乳铁蛋白有促进成骨细胞增殖分化的作用，人乳铁蛋白 奶粉饲喂仔猪后，可以提高仔猪胫骨骨密度、骨矿盐含量（如图3） 及最大抗压力，表明人乳铁蛋白对骨形成有促进的作用。图3 rhLF对仔猪胫骨骨密度和骨矿盐含量的影响A: BMD骨密度；B: BMC骨矿盐含量；数值为最小二乘均值 晰准误；*:与对照组相比差异水平P 0.05OM :普通牛奶；MM :普通牛奶与人乳铁蛋白牛奶 1:1; LFM :人乳铁蛋白牛奶表30三组实验动物十二指肠、空肠、回肠、结肠中所检测的六种细菌的数量（logc

33、fu/g）对比情况（源于58）实验组平均标P-值项目0MMM LFM 准误总需十二指肠10.6910.4810.730.100.221空肠10.0910.2310.170.140.765回肠9.03a8.17c8.64b0.110.001结肠9.470b9.80a9.12b0.210.102总厌氧菌十二指肠10.5010.5610.630.090.560空肠8.858.668.800.150.649回肠11.68010.93b11.34a0.130.003结肠10.3110.2510.230.160.770沙门氏菌十二指肠6.756.696.760.130.915空肠6.917.026.970

34、.100.715回肠6.856.966.800.120.611结肠6.96a6.75ab6.51b0.080.005大肠杆菌十二指肠6.60a5.38b5.29b0.170.001空肠6.90a6.21b5.35c0.120.001回肠9.34a7.28b6.91c0.110.001结肠9.86a9.10b8.67b0.220.006双歧杆菌十二指肠7.887.947.800.090.599空肠7.867.877.910.090.901回肠7.66b8.03a7.97a0.080.011结肠8.628.668.740.080.582乳酸杆菌十二指肠9.0小9.67a10.12a0.160.00

35、1空肠8.48b8.71b9.43a0.160.002回肠7.54c8.21b9.50a0.120.001结肠9.40b9.50b10.11a0.120.002注：统计分析采用单因素方差分析，LSD(Least-significantdifference)及 Duncan（Duncans multiple range test） （SPSS 11.5）。 同排的不同的 ac上标表示 P 0.05。表31人乳铁蛋白牛奶饲喂组与对照组十二指肠、回肠肠绒毛及隐窝深度分析a （源于60）十二指肠对照组（n=8）人乳铁蛋白组（n=8）P值肠绒毛高度（pm）539.70 至4.14609.60 至3.76

36、0.0914肠绒毛宽度（pm）184.20 37.03182.150 40.800.8565隐窝深度（pm）109.90 加.27183.96 33.6470.0001*粘膜固有层厚度（pm）496.00 315.5359.13 48.730.2978淋巴细胞数目/单位高度0.223 01320.1617 009500.1155杯状细胞数目/单位高度0.031 00150.0302。0110.8807回肠对照组（n=8）人乳铁蛋白组（n=8）P值肠绒毛高度（pm）413.83 41.17571.32 至4.490.0002*肠绒毛宽度（pm）162.15 51.36167.59 51.740.

37、4386隐窝深度（pm）90.17 53.68166.72 35.1495.01GB 5009.5-2010乳铁蛋白，%90.0附录A.1铁含量，mg/100g35GB/T 5009.90-2003水分，%5.0GB 5009.3灰分，%5.0GB 5009.4PH5.5-7.5中国药典2015版铅（以 Pb 计，mg/kg）0.15GB 5009.12总神（以As计,mg/kg）0.2GB/T 5009.11总汞（以Hg计,mg/kg）0.02:GB/T 5009.17a 20c下测定2%K溶液微生物指标：应符合表3的规定表3微生物指标项目指标检验方法菌落总数/ （cfu/。1000GB 4

38、789.21大肠菌群/ （cfu/。10GB 4789.3金黄色葡稳球菌/ （cfu/。10GB 4789.10酵母和霉菌/（cfu/1GB 4789.151沙门氏菌/（CFu/g0/25 gGB 4789.44检验规则：原辅料检验合格后方可入库使用表4检验规则检验分类检验项目检验规则判断规则出厂检验感官指标、蛋白质、乳铁蛋 白、铁饱和度、水分、菌落 总数、大肠菌群。1每批产品应经质量检验 部门进行检验，合格后， 附有合格证方可出厂。2出厂检验项目包括：感 官指标、蛋白质、乳铁蛋 白、铁饱和度、水分、菌 落总数、大肠菌群。产品经检 验,如有 不合格 项，允许 自同批产 品中加倍 取样，对 不合

39、格项 进行复 检，复检 结果仍不 合格，则 判批产品 或该次型 式检验不 合格。微 生物指标 不允许复 检型式检验3.2、3.3和3.4中所列项目有卜列情况之一时，应进 行型式检验：a）正常情况 下，每半年1次；b）停产 三个月以上，恢复生产时； c）原料来源或产地发生变 化时；d）食品安全监管部门提出要求时；组批与抽样3.2、3.3和3.4中所列项目以一次投料生产的产品为 一批次。每批随机抽取生 产总量的0.1%0.2%,不 少于25g,作为检验和备用 样本。型式检验样本应从 出厂检验合格的产品中随机抽取。5标志、包装、运输、贮存：应符合表 5的规定表5标志、包装、运输、贮存规定项 目规定标

40、 志.销售包装标志应符合 GB 7718和GB28050的规定。.运输包装标志应标明：产品名称、生产厂名、厂址、生产日期或批号、规 格、重量、商标、标准号、许可证号、保质期及符合GB/T 191-2008规定的图小标志。包 装.内包装材料应符合食品卫生要求，包装应密封。.包装容器应清洁、干燥、无异味、无毒。包装箱应封装、捆扎牢固；正常 运输、装卸时不得松散。运输运输时应避免日晒，雨淋，装卸时应轻拿轻放，防止碰撞、重压，严禁与 后毒、有害、有异味物品混运。贮 存产品应贮存在清洁、干燥、阴凉、通风的库房内。保存温度需低于20C,相对湿度低于70%。纸箱离墙30cm,离地面10cm。不得与有毒、有害

41、、 有异味物品混贮。保 质 期在上述贮运条件下，产品保质期为 24个月。（五）使用拟申请的添加剂生产的食品的生产工艺添加人乳铁蛋白配方奶粉生产工艺流程图添加人乳铁蛋白含乳饮料生产工艺流程图添加人乳铁蛋白酸奶生产工艺流程图（六）食品中人乳铁蛋白的检验方法或者相关情况说明高效液相色谱法测定食品中人乳铁蛋白的含量.范围适用于配方奶粉、含乳饮料、酸奶中人乳铁蛋白含量的测定。检出限为0.05 g/L。.原理样品通过加入盐酸调节pH至酪蛋白的等电点4.6,使酪蛋白聚 沉，离心后除去。而人乳铁蛋白为碱性蛋白，不会引起沉淀，样品经预处理后通过配制紫外检测器的高效液相色谱进行分析测定，外标法定量。3,试剂和材料

42、乙睛，色谱纯。三氟乙酸，色谱纯。超纯水：经纯水净化系统处理（电阻率达 18兆欧）。盐酸，分析纯。人乳铁蛋白标准品，购于Sigma公司。4仪器高效液相色谱仪：配有紫外检测器。电子天平：感量为 0.001 g离心机：最大转速为8000 r/min。离心管：15 mL聚丙烯离心管。高速涡流混合器。微量移液器：10-100区和1000-5000国L酸度计：精度为0.02样品过滤器：0.45微米水系过滤膜。5分析步骤样本制备奶粉样品准确称取8.00 g奶粉样品于50 mL离心管，加25 mL水充分溶解，用2 mol/L盐酸调节至pH4.6附近。室温静置30 min后4000 r/min 离心10 min

43、,收集上清液于10 mL容量瓶中。再用4 mL水加入离心 管中，漩涡震荡3 min洗涤沉淀中的残留蛋白，4000 r/min离心10 min, 合并上清液，用水定容至10 mL。取2.0 mL过0.45区破孔滤膜后用 于高效液相色谱测定。含乳饮料样品准确称取10.00 g含乳饮料样品于15 mL离心管，用2 mol/L盐 酸调节至pH4.6附近。室温静置30 min后4000 r/min离心10 min, 收集上清液于10 mL容量瓶中。再用3 mL水加入离心管中，漩涡震 荡3 min洗涤沉淀中的残留蛋白，4000 r/min离心10 min,合并上清 液，用水定容至10 mL。取2.0 mL

44、过0.45小秋孔滤膜后用于高效液 相色谱测定。酸奶样品准确称取10.00 g酸奶样品于15 mL离心管，4000 r/min离心10 min,收集上清液于10 mL容量瓶中。再用3 mL水加入离心管中， 漩涡震荡3 min洗涤沉淀中的残留蛋白，4000 r/min离心10 min,合 并上清液，用水定容至15 mL取2.0 mL过0.45区微孔滤膜后用于 高效液相色谱测定。标样制备5 mg/mL人乳铁蛋白标准储备液的配置：准确称取 50.00 mg人 乳铁蛋白标准品于10 mL容量瓶中，用超纯水溶解并定容，-20C下 保存，有效期6个月。根据人乳铁蛋白的检测灵敏度和仪器检测线 性范围，用水稀释

45、标准储备液制备不同浓度的人乳铁蛋白标准工作溶液。5.3测定条件液相色谱参考条件色谱柱：Xbridge Peptide BEH G Column, 300A, 4.6mm*250mm 或同类型色谱柱流动相：A:水+0.1%三氟乙酸，B:乙睛+0.1%三氟乙酸，流速：1.0 mL/min,柱温：30C,检测波长：220nm,进样量：20区L梯度洗脱时间（min）A (%)B (%)0.0065.035.024.0060.040.025.0065.035.030.0065.035.0液相色谱测定取一系列浓度的人乳铁蛋白的标准溶液分别进样，以峰面积和标准溶液浓度绘制标准曲线，样品溶液中人乳铁蛋白的响应

46、值应在仪器 测定的线性范围内。在上述色谱条件下，人乳铁蛋白的色谱图见附图 1。6.结果计算样品中人乳铁蛋白含量按公式（1）计算X c V （ 1）m式中：X样品中人乳铁蛋白含量，单位为克每千克（g/Kg）;c从标准工作曲线得到的被测样品溶液浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL);V样品溶液定容体积，单位毫升（mL）;m样品质量，单位克（g）7.标准图谱，如图3所示:分钟UA分钟UA图3人乳铁蛋白标准物质色谱图（七）食品中人乳铁蛋白高效液相色谱测定方法的验证报告一、方法与材料试齐I乙睛，色谱纯；三氟乙酸，色谱纯；超纯水：经纯水净化系统 处理（电阻率达18兆欧）；盐酸，分析纯。标准与样本人乳铁蛋白标

47、准品，购于 Sigma公司；添加1 g/Kg人乳铁蛋白奶粉样品；添加1 g/Kg人乳铁蛋白酸奶样品；添加1 g/Kg人乳铁蛋白乳饮料样品。样本制备与色谱分析系统奶粉样品准确称取8.00 g奶粉样品于50 mL离心管，加25 mL水充分溶 解，用2 mol/L盐酸调节至pH4.6附近。室温静置30 min后4000 r/min 离心10 min,收集上清液于10 mL容量瓶中。再用4 mL水加入离心 管中，漩涡震荡3 min洗涤沉淀中的残留蛋白，4000 r/min离心10 min, 合并上清液，用水定容至10 mL。取2.0 mL过0.45区破孔滤膜后用 于高效液相色谱测定。含乳饮料样品准确称

48、取10.00 g含乳饮料样品于15 mL离心管，用2 mol/L盐 酸调节至pH4.6附近。室温静置30 min后4000 r/min离心10 min, 收集上清液于10 mL容量瓶中。再用3 mL水加入离心管中，漩涡震荡3 min洗涤沉淀中的残留蛋白，4000 r/min离心10 min,合并上清液，用水定容至10 mL。取2.0 mL过0.45区弑孔滤膜后用于高效液相色谱测定。酸奶样品准确称取10.00 g酸奶样品于15 mL离心管，4000 r/min离心10 min,收集上清液于10 mL容量瓶中。再用3 mL水加入离心管中， 漩涡震荡3 min洗涤沉淀中的残留蛋白，4000 r/mi

49、n离心10 min,合 并上清液，用水定容至15 mL取2.0 mL过0.45区微孔滤膜后用于 高效液相色谱测定。标样制备5 mg/mL人乳铁蛋白标准储备液的配置：准确称取50.00 mg人乳铁蛋白标准品于10 mL容量瓶中，用超纯水溶解并定容，-20C下 保存，有效期6个月。根据人乳铁蛋白的检测灵敏度和仪器检测线 性范围，用水稀释标准储备液制备不同浓度的人乳铁蛋白标准工作 溶液。1.3.5液相色谱测定条件色谱柱：Xbridge Peptide BEH G Column, 300A, 4.6mm*250mm 或同 类型色谱柱流动相：A:水+0.1%三氟乙酸，B:乙睛+0.1%三氟乙酸，流速： 1.0 mL/min,柱温：30C ,检测波长：220nm，进样量：20区L梯度洗脱时间（min）A (%)B (%)0.0065.035.024.0060.040.025