【课程大纲】《观赏植物组织培养实验》

1、观赏植物组织培养实验课程大纲一、课程概述课程名称（中文）：观赏植物组织培养 （英文）：The Tissue Culture of Ornamental Plants课程编号：14371115课程学分：0.5课程总学时：15课程性质：专业选修课前修课程：园林植物遗传育种学二、课程内容简介观赏植物组织培养实验课程包括：培养基母液制备与保存、液体培养基和固体培养基的制备、植物材料的准备、接种与初代培养、植物愈伤组织诱导、继代培养和增殖、试管内生根培养、炼苗及移栽等实验内容；同时，参观一个因陋就简商业性组织培养实验室和一个现代化商业组织培养实验室，对比二者在设施、经营管理、成本与效益、技术能力等方面的

2、差异，并讨论我国植物组织培养商业性生产的发展前景。三、实验目标与要求通过实验课的教学，力求使学生能够对观赏植物组织培养的基本理论和概念有更加深刻的认识，激发同学们的学习兴趣，培养学生观察问题、分析问题和解决问题的能力；通过对植物细胞工程部分实验课程的学习，使学生掌握植物组织培养的基本原理，掌握组织培养的基本实验技术，了解不同外植体的灭菌及接种方法。为进一步学习其它相关知识和从事实际操作工作奠定良好的基础。并在实验过程中，使同学们学会有关仪器设备的使用操作，锻炼同学们的实际操作能力。四、学时分配观赏植物组织培养实验课学时分配实验项目名称学时实验类别备注培养基母液制备与保存2验证性实验液体培养基和

3、固体培养基的制备3验证性实验外植体的接种操作和培养观察3综合性实验植物愈伤组织诱导2设计性实验试管内生根培养、炼苗及移栽3设计性实验植物组织培养商品化生产的经营管理2综合性实验合计15注：观赏植物组织培养实验课程总计0.5学分，安排6次实验，其中验证性实验占33%，综合性、设计性实验占67%。五、教学内容与安排实验一：培养基母液制备与保存（验证性实验 2学时）（一）实验目的（1）了解植物组织培养所需设备及必要的实验环境条件，对植物组织培养有一个总体的认识。（2）学习和掌握MS培养基母液配制的基本方法和技能，并为培养基制备做好准备工作。（二）实验材料与用品酸度计或精密pH试纸（pH5.4-7.0

4、），配制培养基的各种化学药品：NH4NO3，KNO3，CaCL22H2O，MgSO47H2O，KH2PO4，KI，H3BO3，MnSO44H2O，ZnSO47H2O，CSO45H2O，CoCL27H2O，Fe SO47H2O，Na2EDTA2H2O，肌醇，烟酸，盐酸吡哆醇，盐酸硫胺素，甘氨酸。（三）实验内容与方法了解植物组织培养所需设备及必要的实验环境条件，掌握MS培养基母液配制的基本方法。（四）实验结果综述配制MS培养基母液（五）作业：交实验报告1份实验二：液体培养基和固体培养基的制备 (验证性实验 3学时)（一）实验目的学习并掌握MS液体培养基和固体培养基配制、灭菌的基本方法和技能，加深对

5、培养基组组成成分的了解，并为后续试验做好准备。（二）实验材料与用品配制培养基的各种化学药品、高压灭菌锅、烘箱、酸度计或精密pH试纸（pH5.47.0）、试剂瓶（1000ml、100ml、50ml）或可调定量加液器、刻度吸管（0.5ml、1ml、5ml、10ml）、三角瓶（100ml）、锡箔纸、玻璃铅笔、橡皮筋等。（三）实验内容与方法1、母液的配制以MS培养基为例，制取贮备液（见表），一般应按表列次序称量，分别溶解在少量蒸馏水中，最后再依次加到一起，并定容到规定的体积。称量大量元素可用精度低的托盘天平来称取；而称量微量元素、有机成分、植物激素等等，都要使用1/10000的电子天平。2、培养基的配

6、制先在洁净的不锈钢锅中放入约750ml蒸馏水，加入所需要的琼脂和糖，最好能在水浴锅里将琼脂溶化，如果加热应不停的搅拌，防止在锅底烧焦或沸腾溢出。加入表中的贮备液100ml，贮备液、各5ml，按需要加入植物激素和其他打算加入的物质。加蒸馏水将最终体积调整到1L。但应当预先测试一下，在接近沸腾的时候1L培养基所占的体积和锅内壁上处的位置，最好能做一刻度为记号，或用下口杯等定容积。充分混合好以后，用1NKOH（NaOH）调整pH值到所需值。然后复核一遍各物品是否加好，如无遗漏、差错，则行分装。趁热把培养基倒入下口杯中，通过下口杯橡皮管上的弹簧止水夹控制，将培养基分注到瓶子或试管中，按容器的大小和培养

7、要求放入适当量的培养基。加棉塞或包包头纸或包扎其他覆盖物，有盖子的的把盖子盖好。3、灭菌培养基灭菌：将三角瓶装入高压灭菌锅中，关上放气阀和安全阀，在电炉上加热，当高压锅中的压力达到3104Pa（5磅）时，打开放气阀，放气5分钟后关掉放气阀，等气压至9.9104Pa(15磅)时,在9.9104Pa1.3105Pa(15-20磅)下高压灭菌15-20（四）实验结果综述（五）作业培养基中的主要元素和附加成分有哪些生理作用和功能？实验三、外植体的接种操作和培养观察（综合性实验 3学时)（一）实验目的掌握取材和消毒、熟悉接种操作、外植体培养过程的观察（二）实验材料与用品月季、兰花等植物的叶片、氯化汞，漂

8、白粉、超净工作台、烘箱、培养室或培养箱、镊子、接种针、手术刀。（三）实验内容与方法1、灭菌培养基配好后，便可着手取材，接种。接种工作完全是在无菌条件下进行的，接种材料，接种用具和培养基都必须彻底消毒灭菌。（1）用具灭菌将手术刀、镊子、接种针等接种用具装入铅笔盒，在洗净的培养皿中放入洗水纸，把培养皿装入铝饭盒，然后在120烘箱中干热灭菌2-3（2）取材和消毒选取无病、无虫、生长正常的叶片、幼茎、花药或子房，用自来水洗净后装入300ml带塞磨口三角瓶中，打开超净工作台，在三角瓶中加入少量70%酒精处理1530秒，倒掉酒精，在超净工作台上用无菌水洗一遍，再加入0.1%升汞，消毒8分钟，倒掉升汞后，用

9、无菌水洗4-5次。充分洗除残留的消毒液。2、接种接种前先用肥皂洗手，穿上工作服，带上工作帽与口罩，在用新吉尔灭浸泡过的干净纱布将超净工作台或接种箱工作面擦洗一遍，然后放上培养基，接种材料和用具。点燃酒精灯，用酒精棉球擦洗手臂。手术刀，镊子，接种针等用具插入盛有70%酒精的广口瓶中。用镊子将接种材料加入培养基中的吸水纸上，吸干水珠，在培养皿将叶片、叶柄、幼茎等材料切成适当大小的小片或小段，打开三角瓶，将接种材料投入瓶内，再用接种针将其拨匀。重新盖上锡箔纸，橡皮筋扎紧，用玻璃铅笔在瓶子上写明材料代号，并表明接种日期。接种完毕后，将三角瓶放入26-28（四）实验结果综述（五）作业组织培养中为什么一定

10、要在无菌条件下进行？实验四、植物愈伤组织诱导（设计性实验 2学时)（一）实验目的了解愈伤组织诱导所需的培养基、植物生长调节物质、环境等条件。（二）实验材料与用品杨树、兰花等植物的叶片、氯化汞，漂白粉、超净工作台、烘箱、培养室或培养箱、镊子、接种针、手术刀。（三）实验内容与方法配制杨树叶片愈伤组织诱导培养基，培养基灭菌，取材和消毒，接种（四）实验结果综述：观察掌握愈伤组织发生的过程和状态。（五）作业培养基成分对愈伤组织形成有什么影响？实验五、试管内生根培养、炼苗及移栽（设计性实验 3学时)（一）实验目的通过实验，了解试管内生根培养的一般方法和步骤，并初步掌握炼苗及移栽的主要技术关键。（二）实验材

11、料与用品杨树组培苗、超净工作台、烘箱、培养室或培养箱、镊子、接种针、手术刀。（三）实验内容与方法杨树丛生芽的生根培养：在丛生芽中选取生长健壮，长度为23 cm的嫩茎，转入1/2MS + IBA 0.5 mg/L + NAA 0.01 mg/L培养基，附加蔗糖15 g/L；杨树组培苗的炼苗与移栽：选择根系发达、主茎高达35 cm的幼苗，将其组培瓶打开，用灭菌的镊子轻轻捣碎培养基，注入灭菌后的双蒸水，水位高度超过培养基表面12 cm，在组培室炼苗1周左右。将幼苗取出，用水清洗根部的培养基，移栽至基质（选用泥炭土或腐殖土与细砂按3:1体积比配制，用3%硫酸亚铁进行土壤消毒）中，遮光喷雾保湿4 d，再经过漫射光照射1周，逐渐转入直射光环境中或移栽至大田中培养。（四）实验结果综述：观察记载杨树组培苗生根和移栽成活率（五）作业人工培养条件下离体的植物细胞或组织通过分裂、繁殖、分化，发育而长成完整再生植株的过程，可说明哪些理论问题？实验六、植物组织培养商品化生产的经营管理（综合性实验 2学时)参观一个因陋就简商业性组织培养实验室和一个现代化商业组织培养实验室，对比二者在设施、经营管理、成本与效益、技术能力等方面的差异，并讨论我国植物组织培养商业性生产的发展前景。六、考核方式与成绩评定考核方式：具体实验操作、交实验报告，