诊断-血液学一般检查课件

1、04 十月 2022诊断血液学一般检查03 十月 2022诊断血液学一般检查1.血红蛋白测定- 氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法 该法具有操作简便，结果稳定可靠，试剂容易保存等优点，被国际血液学标准化委员会(ICSH)推荐为参考方法，为我国测定血红蛋白首选方法。实 验 一1.血红蛋白测定- 血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白被高铁氰化钾K3Fe(CN)6氧化为高铁血红蛋白（Hi），后者与氰离子（CN-）结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。在特定波长（540nm）和光径（比色杯内径1.0cm）条件下具有一定的吸光度，通过用标准液制备的标准曲线，可求出血红蛋白浓度来。 原 理H

2、b Hi+ CN- HiCNK3Fe(CN)6实 验 一血液在血红蛋白转化液中溶血后，血红蛋白被高铁氰化钾K3Fe试剂血红蛋白转化液（文齐氏液）：氰化钾（KCN） 0.05g高铁氰化钾K3Fe(CN)6 0.20g无水磷酸二氢钾（KH2PO4） 0.14gTriton X100 1.0ml蒸馏水 加至1000ml器材1.血红蛋白吸管，5ml吸管2.大试管3.721分光光度计上述试剂为淡黄色溶液，贮存于棕色瓶中室温保存，其中非离子表面活性剂可加速溶血，缩短转化时间，防止因血浆蛋白改变引起的混浊标本来源EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血实 验 一器材上述试剂为淡黄色溶液，贮存于棕色瓶中室温保存，

3、其中非操作1.取血红蛋白转化液5.0ml加入大试管中。2.用血红蛋白吸管吸取全血20l，轻拭管尖外余血，并准确调节血柱液面至20l。加入到准备好的血红蛋白转化液底部，并用上清液吸、吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液，充分混匀，静置5分钟。实 验 一操作1.取血红蛋白转化液5.0ml加入大试管中。2.用血3.于722分光光度计上以转化液为空白进行比色测定，波长540nm,光径1.0cm。4.通过标准曲线间接求出血液中Hb的含量实 验 一3.于722分光光度计上以转化液为空白进行比色测定，波长54将HiCN标准液倍比稀释（如50g/L、100g/L、150g/L、200g/L）后,在所用的分光光度计

4、上540nm处，光径1.0cm，以转化液为空白测定各稀释度的吸光度。以标准品血红蛋白含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线,或求出换算常数K(K=Hb/A)。则通过待测标本吸光度值查标准曲线或用K值计算血红蛋白浓度（Hb=KA）。附HiCN标准曲线绘制和K值计算：实 验 一将HiCN标准液倍比稀释（如50g/L、100g/L、150参考值成年男性： （120160）g/L成年女性： （110150）g/L新生儿： （170200）g/L注意事项1.试剂因含氰化钾，虽浓度较低，但在配制、保存、使用中需妥善。2.标准曲线或K值，应定期检查、校准。报告方式Hb：_g/L实 验 一参考值报告方式

5、实 验 一2.白细胞计数原理血液用白细胞稀释液（2%醋酸溶液）稀释，使红细胞溶解，白细胞形态更加清晰后，充入血细胞计数池，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数量 实 验 一2.白细胞计数原理实 验 一1.血细胞计数板，盖玻片2.血红蛋白吸管（具有10l及20l刻度）3.1ml吸管，小试管，玻棒4.光学显微镜器材实 验 一1.血细胞计数板，盖玻片器材实 验 一试剂白细胞稀释液：冰醋酸 2ml1%龙胆紫 1ml或结晶紫数滴蒸馏水加至 100ml标本来源EDTA-K2抗凝全血或毛细血管采血实 验 一试剂实 验 一1.加稀释液：取白细胞稀释液0.38ml于一干净小试管中。

6、2.加血：用血红蛋白吸管取全血（指血或EDTA-K2抗凝血）20l，轻拭管尖外余血，准确调节血液液面至20l处，将血红蛋白吸管插入白细胞稀释液中（即小试管底部），迅速将血液放出，并用上清液吸吐两次洗净血红蛋白吸管内残余血液。3.溶血：轻轻混匀后室温静置，待液体变为棕褐色，即红细胞被完全破坏。4.冲池：用微量吸管或玻棒取适量混匀的白细胞悬液充入血细胞计数池（一次充好，液体不可外溢，不可有气泡，否则擦净重充），室温水平静置23分钟，待细胞下沉后显微镜下计数。5.计数：将血细胞计数盘放在显微镜载物台上，低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞总数。（压线细胞计数原则：数上不数下，数左不数右）操作实 验 一

7、1.加稀释液：取白细胞稀释液0.38ml于一干净小试管中。6.计算：白细胞/L=(N/4)1010620=(N/20)109式中N表示四个大方格内数得的白细胞总数。/4:为平均每个大方格（0.1mm3）稀释液内 WBC数。10：将一个大方格白细胞数换算为1l 内的白细胞数。106：1L=106l。20：为血液稀释倍数。白白白白白细胞计数区实 验 一6.计算：白细胞/L=(N/4)1010620=(N/计数池构造实 验 一计数池构造实 验 一低倍镜下的计数池大方格结构实 验 一低倍镜下的计数池大方格结构实 验 一低倍镜下的白细胞形态（10X10）实 验 一低倍镜下的白细胞形态（10X10）实 验

8、 一白细胞计数操作步骤实 验 一白细胞计数操作步骤实 验 一报告方式白细胞数（WBC）：_109/L参考值成人： （410）109/L新生儿：（1520）109/L实 验 一报告方式实 验 一1.采血及计数室充液注意事项:毛细血管采血部位的皮肤必须正常，凡局部有水肿、发炎、紫绀或冻疮等均不可穿刺采血。穿刺必须足够深，使血液自行流出或轻施压力即可流出。EDTA-K2抗凝全血使用前需混匀。计数盘和盖玻片在使用前需用稠布或纱布擦拭干净。血红蛋白吸管内腔一定要干燥，否则会影响吸血量及导致溶血。毛细血管采血动作必须迅速否则常易凝固，若作血红蛋白和红细胞计数两项时，应先取红细胞计数标本，后作血红蛋白测定。手指血红细胞与静脉采血有差异且影响因素多，条件允许时应尽量静脉采血。注意事项实 验 一1.采血及计数室充液注意事项:注意事项实 验 一2一定要在稀释液转为棕褐色后方能充池计数，否则因RBC残存而干扰计数使结果偏高。3白细胞稀释液不能破坏有核红细胞