免疫学的技术原理

1、关于免疫学技术原理第1页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四（一）抗原抗体反应的原理 抗原抗体反应:指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。 抗原表位与抗体高变区间的互补结合 抗原表位与抗体高变区的沟槽分子表面的结合 抗原抗体之间的结合力 亲水胶体转化为疏水胶体 物质基础:第2页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四体内：表现为溶菌、杀菌、促进吞噬或中和毒素或引起免疫病理的损伤体外：凝集、沉淀、细胞溶解和补体结合等反应第3页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四（二）抗原抗体反应的特点特异性 可逆性比例性 阶段性第4页，共38页，2022年

2、，5月20日，9点46分，星期四特异性：抗原与抗体结合反应的专一性抗原抗体反应特异性示意图分子基础:抗原表位与抗体分子高变区之间空间构型的互补性（1）特异性第5页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四两种不同的抗原分子具有部分相同或类似结构的抗原表位，可与彼此相应的抗血清发生反应交叉反应（cross reactions）抗原抗体交叉反应示意图Ag B第6页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四(2)可逆性可逆性：抗原与相应抗体结合成复合物后，在一定条件下又可解离为游离抗原与抗体的特性 影响因素： 抗体对相应抗原的亲合力亲合力越高，结合越牢固，越不易解离 环境因素

3、对复合物的影响pH、离子强度 第7页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四前带(prezone)：抗体过量后带(postzone)：抗原过量等价带(equivalence zone)： 抗原抗体比例合适 抗原抗体反应比例性示意图比例性：抗原与抗体发生可见反应需遵循一定的量比关系(3)比例性第8页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见 第二阶段：反应可见阶段，反应慢，出现凝集、 沉淀和细胞溶解等现象 (4)阶段性第9页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四A.抗原、抗体反应物的自身因素环境因素（三） 影响抗原

4、抗体反应的因素抗原:理化性状、表位种类和数目抗体:来源、特异性、亲和性、效价第10页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四B.环境因素电解质: 生理盐水或缓冲液酸碱度: pH6pH9温 度: 1540，37最适第11页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四反应类型实验技术结果判断凝集反应直接凝集试验观察凝集现象间接凝集试验同上抗球蛋白试验同上沉淀反应液相沉淀试验观察沉淀，检测浊度免疫电泳技术观察扫描沉淀峰、沉淀弧补体参与的反应补体溶血试验观察测定溶血现象补体结合试验同上(四）免疫学检测技术的类型第12页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四反应类

5、型实验技术结果判断中和反应病毒中和试验检测病毒感染性毒素中和试验检测外毒素毒性标记免疫反应荧光免疫技术检测荧光现象放射免疫技术检测放射性强度酶免疫技术检测酶底物显色发光免疫技术检测发光强度金免疫技术检测金颗粒沉淀第13页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四按实际用途分为:e免疫组织化学技术(immunohistochemistry techniqu,IHCT)免疫测定(immunoassay)标记免疫技术：用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光物质等标记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测标记物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析第14页，共38页，2022年，5月20日，

6、9点46分，星期四按测定反应体系的物理状态分为: 均相免疫测定(homogenous immunoassay）非均相免疫测定(heterogenous immunoassay) 按检测现象分为: 放射免疫技术 荧光免疫技术酶免疫技术 化学发光免疫技术金免疫技术第15页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四1什么是抗原抗体反应？ 抗原抗体反应的原理是什么？ 2.抗原抗体反应有哪些特点？ 3.如何理解抗原抗体反应的特异性？4什么是抗原抗体反应的可逆性？有何应用？5抗原抗体反应体系中为何要确定抗原、抗体的最适比例？ 6抗原抗体反应有哪些影响因素？7基于抗原抗体反应的免疫学检测技术有哪

7、些？思考题第16页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四小结 抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。 抗原抗体反应的特点是特异性、可逆性、比例性和阶段性。 第17页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四 影响抗原抗体反应的因素包括反应物的自身因素和环境因素。免疫学检测技术的基础是抗原抗体反应，免疫学技术有凝集反应、沉淀反应、补体参与的反应、中和反应和标记免疫反应五种类型。 第18页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四抗原抗原排斥抗原抗体Y抗原抗原抗原YYYYYYYYYYYYYYYYY 颗粒性抗原（细菌、红细胞等）与相应抗体结

8、合，在电解质参与下所形成的肉眼可见的凝集现象，称为凝集反应。第二节 凝集反应第19页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四 分类直接凝集反应- 颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。细胞性抗原：细菌和红细胞第20页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四凝集原(agglutinogen)：凝集反应中的抗原。凝集素(agglutinin)：凝集参与反应的抗体第21页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四颗粒性抗原凝集素 直接凝集反应第22页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四1、玻片凝集反应: 已知抗原

9、+未知抗体凝集团块 混浊?2、试管凝集反应： 定量抗原+系列稀释抗体不同程度的凝集反应YES NO确定抗体的滴度第23页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四 在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。试管凝集试验第24页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四第25页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四鲜血者红细胞受血者血清O型(抗A、抗B)A型(抗B)B型(抗A)AB型(无)O型-A型+-+-B型+-AB型+- 注:“+”表示有凝集反应, “-”表示无凝集反应第26页，共38页，2022年，5月20日，9点4

10、6分，星期四间接凝集反应(indirect agglutination): 将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象.第27页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四载体可溶性抗原致敏致敏颗粒NS凝集颗粒 间接凝集试验示意图第28页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四 载体种类及其处理方法红细胞： 新鲜红细胞吸附蛋白质的能力差。一般先醛化后应用。聚苯乙烯胶乳颗粒： 可物理吸附蛋白质；常制备带有化学活性基团的颗粒第29页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四1.正向间接凝集试验2.

11、反向间接凝集试验3.间接凝集抑制试验间接凝集反应的类型第30页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四用抗原致敏载体-检测抗体正向间接凝集试验第31页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四反向间接凝集试验用抗体致敏载体-检测抗原第32页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四间接凝集抑制试验用抗原致敏载体-检测抗原第33页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四间接血凝试验第34页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四间接乳胶凝集试验概念金黄色葡萄球菌协同凝集试验第35页，共38页，2022年，5月20日，9点46分，星期四间接凝集反应的应用抗原的检测 反向间接凝集试验可用于检测病原体的可溶性抗原，也可用于检测各种蛋白质成分。抗体的检测检测细菌、病毒、寄生虫等感染后产生的抗体。 第36页，共38页，2022年，