比浊法自动测定乙酰螺旋霉素片的效价

1、比浊法主动测定乙酰螺旋霉素片的效价【摘要】目的创立比浊法测定乙酰螺旋霉素片的要领。要领金葡菌为实行菌，加菌量约0.5%(V/V)，(370.5)造就3.54.5h测定。效果抗生素线性浓度为3.215.6g/l，均匀接纳率为100.7%(n=9)，RSD=1.4%。结论本要领操纵便利、快速，敏捷、可信限率低，效果正确，细密度好，可作为乙酰螺旋霉素片效价的测定要领。【关键词】效价；比浊法；乙酰螺旋霉素KEYRDSPteny;Turbidietriethd;Aetylspirayintablets乙酰螺旋霉素是螺旋霉素乙酰化衍生物，属半合成大环内酯抗生素，是单乙酰螺旋霉素II、单乙酰螺旋霉素III与

2、双乙酰螺旋霉素II、双乙酰螺旋霉素III四个组分为主的混淆物，毒性低，不良反响小，较普及有用地应用于金葡菌、链球菌、肺炎杆菌、大肠埃希菌、淋球菌等引起的熏染1。因乙酰螺旋霉素为多组分抗生素，一样平常的化学阐发要领或高效液相色谱法均无法测定其含量，虽有文献2，3报道可用紫外分光光度法测定乙酰螺旋霉素制剂的含量，但紫外分光光度法专属性差，测定效果偏向较大。对乙酰螺旋霉素及其制剂的含量测定，中国药典2022年版4接纳管碟法测定其效价，但管碟法操纵繁杂、泯灭时间慢长(需d2才气得到效果)，影响因素多，且需有履历的实行职员才气得到抱负的效果，同时由于乙酰螺旋霉素是多组分，轻易导致双圈征象，使重现性差。比

3、浊法是一种快速、便利、经济的测定抗生素含量的要领，中国药典2022年版微生物检定法新增浊度法测定庆大霉素效价5。海内正在研制微生物比浊法测定仪，我们应用该测定仪在线主动测定乙酰螺旋霉素效价，淘汰了多种实行影响因素，节流了大量人力劳动，4h即可得到实行效果。1仪器与试剂1.1仪器金葡菌(Staphylusaureus)(B)26003、大肠埃希菌(Esherihiali)(B)44103与肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneuniae)(B)46117均由中国药品生物成品检定所提供。营养琼脂造就基(批号20220318)与抗生素检定造就基III(批号060211)均为北京奥博星生物技能有限责

4、任公司消费；0.9%氯化钠溶液和磷酸盐缓冲溶液(pH7.0)均按中国药典2022年版二部附录5配制。2效价测定2.1管碟法按中国药典2022年版二部要领4测定。2.2比浊法(1)含菌造就基的配制取金葡菌奇怪歪面造就物，接种于营养琼脂造就基小歪面上，置3537造就1820h，用0.9%氯化钠溶液洗下菌苔，并用0.9%氯化钠溶液稀释，使其在650n波长处的吸光度约为1.0。取菌液约5l加至造就基100l中，摇匀，为含菌造就基。(2)溶液的配制尺度品溶液细密称取乙酰螺旋霉素尺度品适量，加乙醇溶解后，加灭菌水稀释至1000g/l的溶液，作为储藏溶液；临用前再用磷酸盐缓冲溶液(pH7.0)稀释至实行浓度

5、。供试品溶液细密称取研细后的乙酰螺旋霉素片适量，加乙醇溶解后，加灭菌水稀释至1000g/l的溶液，作为储藏溶液；别的稀释步调同尺度品溶液。(3)造就与测定别离细密汲取实行用尺度品溶液和供试品溶液各1.0l，参加灭菌造就管中，再参加含菌造就基9.0l，置抗生素比浊法丈量仪内，于(370.5)造就。另取稀释溶剂1.0l，空缺造就基9.0l，混匀，作为空缺比较；再取稀释溶剂1.0l，含菌造就基9.0l，混匀，作为阳性比较。仪器在线于530n波长处测定各管金葡菌对数生恒久内差异造就时间下的吸光度(A)或浊度。按照量反响平行线原理6盘算供试品的效代价。3效果3.1测定条件的选择(1)实行菌的选择由于乙酰

6、螺旋霉素实用于革兰阳性菌如金葡菌、链球菌、肺炎杆菌、大肠埃希菌等，按照其抗菌作用与中国药典2022年版常用的效价测定用菌株，开端选择大肠埃希菌、金葡菌与肺炎克雷伯菌为实行用菌株，举行进一步的筛眩绘制菌株在差异抗生素浓度的生长曲线(图1)，按照生长曲线及在差异抗生素浓度下菌液吸光度值的变革，创造大肠埃希菌对乙酰螺旋霉素不敏感，对差异浓度的乙酰螺旋霉素，造就后菌液吸光度值相差很小，菌株生长曲线无显着地对数生恒久，不实用。乙酰螺旋霉素对肺炎克雷伯菌按捺作用较强，对差异浓度的乙酰螺旋霉素，造就后菌液吸光度值差值较小，且菌生长迟钝，也不实用。金葡菌对乙酰螺旋霉素敏感，对差异浓度的乙酰螺旋霉素，造就后菌液

7、吸光度值差值较符合，菌株生长曲线有较好地对数生恒久，可以选择。图1金葡菌的生长曲线(2)实行菌浓度的选择按含菌造就基的配制要领，参加差异体积的菌液2.08.0l至造就基100l中，效果表现菌液浓度太低时，细菌生长受抗生素按捺，生长时间达4h，吸光度值仍达不到0.2；菌液浓度太高时，吸光度值很快凌驾0.7，且由于造就基中含菌量太多，菌自己互相按捺，导致菌生长紊乱，偏离平行较差；终极选择菌液浓度为0.5%摆布，此时菌生长精良，有显着地对数生恒久，吸光度一样平常为0.30.7，偏离平行精良。3.2线性与范畴细密汲取实行用储藏溶液适量，别离用磷酸盐缓冲溶液(pH7.0)稀释至以下浓度：1.231.5g

8、/l，别离量取上述溶液各1.0l，参加灭菌造就管中，每个浓度35管，再参加含菌造就基9.0l，置抗生素比浊法丈量仪内，于(370.5)造就。仪器在线于530n波长处每隔5in主动测定各管肺炎克雷伯菌对数生恒久内差异造就时间下的吸光度或浊度(A)，以吸光度或浊度(A)对浓度()的对数举行回归盘算，效果为乙酰螺旋霉素在1.283.12g/l浓度范畴内，高、低剂量间的浊度无显着差异；在12.831.125g/l浓度范畴内，吸光度或浊度(A)与浓度()的对数固然也成线性干系，但在阳性菌生长为符合的浊度时，样品溶液中的菌被较强地按捺，生长迟钝，此范畴不得当比浊测定用；在3.215.6g/l浓度范畴内吸光

9、度或浊度(A)与浓度()的对数线性干系精良，阳性菌与样品溶液中的菌均生长精良，尤以6.415.6g/l浓度范畴为最正确，此时不单阳性菌与样品溶液中的菌均生长精良，各剂距间吸光度或浊度的差距较大，尺度曲线的歪率大，所得效果中可信限率最好，线性方程为：A=-0.9514g+1.4662r=0.99953.3测定要领3.4正确度细密称取乙酰螺旋霉素尺度品适量，按乙酰螺旋霉素片处方参加辅料，照供试品溶液的稀释要领稀释至实行浓度，作为供试品溶液。尺度品溶液的配制同上，剂量为80%、100%、120%的均匀接纳率为100.7%，RSD=1.4%，在效价测定范畴内，接纳率精良。3.5细密度实行用尺度品溶液的

10、配制同2.2(2)，同时也用作供试品溶液，按尺度曲线法重复测定6次，测定值别离为98.64%、101.33%、99.51%、102.29%、101.14%和102.50%，RSD=1.5%，在效价测定范畴内，该要领细密度精良。3.6测定样品用两个厂家差异测定原理的仪器对3批乙酰螺旋霉素片举行测定并与管碟法效果举行比力(表1)，效果无明显性差异。4讨论(1)比浊法较管碟法有显着长处，操纵便利、快速，可信限率低，尤其是仪器在线主动丈量，使效果更正确，细密度更好，值得推广应用，对病院和企业检测半成品能收缩检测时间，进步事情服从。【参考文献】1四川抗菌素产业研究所.抗生素及抗熏染药物.上海：上海科学技

11、能出书社，1981：213.2齐蓟，李振龙.紫外分光光度法测定乙酰螺旋霉素含量J.黑龙江医药科学，2001，24(5)：50.3陈俊芳，王环平，张振军.紫外分光光度测定乙酰螺旋霉素片的含量J.中国药事，2002，16(11)：699.4国度药典委员会.中华人民共和国药典2022年版(二部)S.北京：化学产业出书社，2022：7.5杨亚莉，胡昌勤.中国药典2022年版微生物检定法的增修订环境及要点J.中国抗生素杂志，2022，30(12)：721726.6国度药典委员会.中华人民共和国药典2022年版(二部)S.北京：化学产业出书社，2022：附录7984.7DnaldP,PaulA,alterH,etal.Seiau