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1、考马斯亮蓝法测定苹果组织 微量可溶性蛋白含量2011级化学生物学 吴凡 郭梦雨1 实 验 准 备2 实 验 实 施3 结 果 分 析4 结 论2实验准备 果蔬可溶性蛋白质含量是果蔬品质和营养的重要评价指标之一。许多可溶性蛋白是构成果蔬中酶的重要组成部分，参与果蔬多种生理生化代谢过程的调控。因此，果蔬组织可溶性蛋白含量的测定就显得尤为重要。3实验准备实验原理 考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下时最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸收在595nm。 在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，通过测定595nm处光吸收的增加

2、量可知与其结合蛋白质的量。4实验准备实验原理5实验实施主要仪器及试剂：分光光度计；电子天平;容量瓶 25ml十个；50ml 烧杯2个；BSA新鲜苹果 ；Tris、外援添加物等7实验实施(1)试剂的配制：标准蛋白溶液的制备：配制100g/mL的BSA溶液提取缓冲溶液：pH 7.2、7.4、7.6、7.8、8.0、8.2、8.4、8.6、8.8和9.0梯度Tris-HCl缓冲液(100mmol/L)梯度浓度Tris-HCl缓冲液(pH 9.0)：10、30、50、80、100mmol/L外援添加物：EDTA(1mmol/L)、PVP(1g/100mL)、NaCl(0.15mol/L)、抗坏血酸(2

3、mmol/L)、MgCl2(0.5mmol/L)、半胱氨酸(2mmol/L)、-巯基乙醇(2%，V/V)8实验实施 实验操作步骤开启分光光度计，预热20分钟标准溶液吸光度的测定标准曲线的绘制 待测液的测定 10结果分析表一：不同吸光度值对应BSA含量线性回归率为0.9990，线性方程y=186.33X-4.8440 。11结果分析不同缓冲体系对可溶性蛋白提取效果的影响1.不同缓冲液及其pH1-11分别代表水、pH为7.2、7.4、7.6、7.8、8.0、8.2、8.4、8.6、8.8、9.0的Tris-HCl缓冲溶液12结果分析3.不同外援添加物A-J分别代表抗坏血酸、半胱氨酸、EDTA、PVP、-巯基乙醇、NaCl、MgCl2、PVP-巯基乙醇、PVPEDTA、EDTAPVP-巯基乙醇14结果分析苹果组织可

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