乳腺癌细胞培养

1、, 培养基用 DMEM或 RPMI1640. 一般两到三天传一代1ml, 轻轻晃动培养瓶, 培养基用 DMEM或 RPMI1640. 一般两到三天传一代1ml, 轻轻晃动培养瓶 ,25min, 待细胞缩起变圆 , 将胰酶吸出加入培养. 我一般都不用缓冲液冲刷, 感觉效果还不错 . 因, 以免消化太过 . 需要, 一般. 该细胞表达表皮生长因子., 而EGF受体、 TGF-之巴公井开创作时间：二 O 二一年七月二十九日MCF-7 是一种很好养的人乳腺癌细胞均可 , 10 15的小牛血清就能长得很好传代也很惯例 . 吸出培养基 , 加入的胰酶使胰酶流遍瓶壁 , 以去除残余的培养基 . 再加入 2m

2、l 胰酶（ 25ml 培养瓶）静置消化基 3ml 奏乐成单细胞悬液分瓶即可直接用胰酶冲刷一下以去除剩余血清的作用为 MCF-7消化较快 , 一般不放到培养箱中消化注意的是 MCF-7生长较快如不及时传代可呈现整瓶细胞浮起都来不及抢救 .MDA-MB-231人乳腺癌细胞细胞中文名称人乳腺癌细胞细胞英文名称 MDA-MB-231物种人细胞形态特征上皮样细胞生长特性贴壁生长细胞特种特性 MDA-MB-231是从一名 51 岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的受体和 WNT7B癌基因培养基 L15: Leibovitz Medium时间：二O二一年七月二十九日传代；每周 23 次溶液, 消化传代；

3、每周 23 次溶液, 消化 5-, 投入 37 , 加入 5 ml 37 预热的培养min）, 弃去Hs 578Bst 规格： 70%密度的4-5 代左右包装：内血清 10%FBS细胞传代方法 1:21:4细胞传代情况 C5细胞冻存条件 MDA-MB-231 人乳腺癌细胞 基础培养基+5%DMSO+20%FBS支原体检测阴性说明培养基： DMEM 90%, Fetal Bovine Serum 10%培养条件： 37 5% CO2消化条件： 0.25% (w/v) Trypsin-0.53mM EDTA10min传代的比例： 1：21：4换液时间： 23 天换液一次冻存液比例： 85%培养基

4、,10%FBS, 5% (v/v) DMSO冻存密度： 1-2 10 6/ 管 , 液氮保管MDA-MB-231 人乳腺癌细胞 复苏方法：取出冻存管后水浴中 , 震荡解冻 2 min, 酒精消毒管壁外侧后 , 将其转入超净台中, 将管内细胞转移至离心管中基, 并清洗冻存管一次 , 将离心管离心（ 1000 rpm,5 上清液 , 再加入 2 ml 培养基 , 转入培养瓶中培养 .产物名称： 人正常乳腺细胞25cm2培养瓶的细胞一瓶特点：细胞代数为时间：二O二一年七月二十九日、ICLC 7 天, 如发现, 死亡, 快递运输等原因）时E-mail 致销售人员 , 我们将尽快为您, 、ICLC 7

5、天, 如发现, 死亡, 快递运输等原因）时E-mail 致销售人员 , 我们将尽快为您, 须立即放入 37 水槽中1 分钟内全部融化 , 并注意水面不成, 是否应马上去除,10-15ml 新鲜培养基之培养角瓶中DMSO 即可, 如此可防止年夜部份. . 每一细胞株均, 若骤然使用和原先提供之培, 细胞年夜都无法立即适应. 血清是细胞, 应出具书面DMSO？除少数特别注, 造成细胞无法存层无菌自封袋；专用防压泡沫盒；外层防压保温气泡袋；说明书细胞来源： ATCC、sciencell货期： 1-2 周运输方式：快递运输售后：收到细胞后细胞有质量问题（如污染质量问题陈说并及时传真或解决.细胞培养罕见

6、问题分析细胞培养1、冷冻管应如何解冻？取出冷冻管后快速解冻 , 轻摇冷冻管使其在超越冷冻管盖沿 , 否则易发生污染情形 . 另冷冻管由液氮桶中取出解冻时 , 必需注意平安 , 预防冷冻管之爆裂 . 2、细胞冷冻管解冻培养时明对 DMSO 敏感之细胞外 , 绝年夜部份细胞株（包括悬浮性细胞）在解冻之后 , 应直接放入含有待隔天再置换新鲜培养基以去除解冻后细胞无法生长或贴附之问题3、可否使用与原先培养条件分歧之培养基？不能有其特定使用且已适应之细胞培养基养条件分歧之培养基活. 4、可否使用与原先培养条件分歧之血清种类？不能时间：二O二一年七月二十九日, 所以血清的种类和品质对细胞的. 来自分歧物种

7、的血清 , 在一些物质或分, 血清使用毛病常会造成细胞无法存）和 FCS （fetal calf serum, FCS 乃毛病的使用字, 所以血清的种类和品质对细胞的. 来自分歧物种的血清 , 在一些物质或分, 血清使用毛病常会造成细胞无法存）和 FCS （fetal calf serum, FCS 乃毛病的使用字眼 , 请不要5 % 或 10% CO2？或根本没有影响？一般培HCO3-/CO32-/H+ 作为 pH 的缓冲系统 , 而培养CO2 浓度. 当培养10 % , 或遵照细胞株基本, 一般正. trypsin-EDTA 浓度？应如何处trypsin-EDTA , 保管于）是相浓度为

8、0.05% trypsin-培养上一个极为重要的营养来源生长会发生极年夜的影响子的量或内容物上都有所分歧活. 5、何谓 FBS, FCS, CS, HS ? FBS （fetal bovine serum同的意思 , 两者都是指胎牛血清再使用 .CS （calf serum ）则是指小牛血清 .HS （horseserum ）则是指马血清 . 6、培养细胞时应使用养基中年夜都使用基中 NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的基中 NaHCO3 含量为每公升 3.7 g 时, 细胞培养时应使用CO2；当培养基中 NaHCO3 为每公升 1.5 g 时, 则应使用 5 % CO2 培养细胞 .

9、 7、何时须更换培养基？视细胞生长密度而定数据上之更换时间 , 按时更换培养基即可 . 8、培养基中是否须添加抗生素？除于特殊筛选系统中外常培养状态下 , 培养基中不应添加任何抗生素9、附着性细胞继代时所使用之置？一般使用之0.53mMEDTA.4 Na.次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中时间：二O二一年七月二十九日trypsin , 加入新鲜培养基稀释至适当浓度, 其离心速率应为几多转速？欲回300 xg （约 1,000rpm ）,5 - 10 . 细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞. 5 - 10 %DMSO （dimethyl sulfoxidetrypsin , 加入新鲜培养基稀释至

10、适当浓度, 其离心速率应为几多转速？欲回300 xg （约 1,000rpm ）,5 - 10 . 细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞. 5 - 10 %DMSO （dimethyl sulfoxide. 注意：由于, 故不成将 DMSO 直接加入细胞液. DMSO 之 DMSO （如 Sigma D2650）, 次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中DMSO 之裂解而释出有害物质之活性降低 , 并可减少, 重）和 90 , 保,20 , 防止反复冷冻解冻造成污染之机会 . 10、悬浮性细胞应如何继代处置？一般仅需继续加入新鲜培养基于原培养角瓶中 , 稀释细胞浓度即可 , 若培养液太多时 , 可将

11、培养角瓶口端稍微抬高 , 直到无法容纳为止 . 分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶复前述步伐即可 . 11、欲将一般植物细胞离心下来收植物细胞 , 其离心速率一般为分钟, 过高之转速 , 将造成细胞死亡 . 12、细胞之接种密度为何？依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可无法生长之一重要原因13、细胞冷冻培养基之成分为何？植物细胞冷冻保管时最常使用的冷冻培养基是含- 95 % 原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之DMSO 稀释时会放出年夜量热能中, 必需使用前先行配制完成14、DMSO 之品级和无菌过滤之方式为何？冷冻保管使用之品级, 必需为 Tissue cul

12、ture grade其自己即为无菌状况管于 4, 防止反复冷冻解冻造成时间：二O二一年七月二十九日. 若要过滤 DMSO,则须使用耐 DMSO 之 Nylon : 冷冻管置于 . 若要过滤 DMSO,则须使用耐 DMSO 之 Nylon : 冷冻管置于 41-3 至 80 以. 1x106 cells/ml vial,为宜. . 主要的污染原因为无菌把持技术不妥、. 严格之无菌把持技, 应如何处置？加入相应抗生素, 年夜大都遭受支原体污染的细胞融合瘤细胞则以.5x106 并可减少污染之机会材质滤膜 . 15、冷冻保管细胞之方法？冷冻保管方法一3060 分钟（ -20 30 分钟*） -80 1

13、618 小时（或隔夜） 液氮槽 vaporphase 长期贮存 . 冷冻保管方法二 : 冷冻管置于已设定法式之可法式降温机中每分钟降下, 再放入液氮槽 vapor phase 长期贮存 .*-20 不成超越 1 小时, 以防止冰晶过年夜 , 造成细胞年夜量死亡 , 亦可跳过此步伐直接放入-80 冰箱中 , 惟存活率稍微降低一些15、细胞欲冷冻保管时 , 细胞冷冻管内应有几多细胞浓度？冷冻管内细胞数目一般为cells/ml vial 16、应如何防止细胞污染？细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌把持室环境欠安、污染之血清和污染之细胞等术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配

14、制是减低污染之方法 . 17、如果细胞发生微生物污染时直接灭菌后抛弃之 . 18、支原体（ mycoplasma）污染的细胞 , 是否能以肉眼观察出异状？不能 . 除极有经验之专家外株, 无法以其外观分辨之 . 时间：二O二一年七月二十九日, 代谢及研究之任一数据. . 4 冰箱中 , 颜色会偏暗红色 , 且 pH值会4 , 代谢及研究之任一数据. . 4 冰箱中 , 颜色会偏暗红色 , 且 pH值会4 冰箱中 , 培养基内之 CO2 会逐. 而培养基中之酸碱指示剂（通. 培养基偏. 若培养基偏碱时 , 可以通入dish,flask, 惟少数细胞则可能因使用厂而有显著之生长不同 . , 为何会

15、发生细胞数目太少之情, 罕见原因可归纳为：培养基使用毛病或. 解冻过程毛病 . 培, 瓶盖有裂纹 , 或瓶盖脱落之原因？冷. 故进行实验前 , 必需是否均相同？分歧厂牌的19、支原体污染会对细胞培养有何影响？支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数确认细胞为 mycoplasma-free, 实验结果之数据方有意义20、CO2 培养箱之水盘如何坚持清洁？按期（至少每两周一次）以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之21、为何培养基保管于越来越偏碱性？培养基保管于渐溢出 , 造成培养基越来越偏碱性常为 phenol red ）的颜色也会随碱性增加而更偏暗红碱之结果 , 将造成细胞生长停滞或死亡无菌过滤之

16、CO2,以调整 pH 值. 22、各种细胞培养用的dish 或 flask, 其所 coating 的 polymer 分歧, 制造法式亦分歧 ,虽对年夜部份细胞没有太年夜之影响牌分歧之 dish 或 flask 23、购买之细胞冷冻管经解冻后形？购买之细胞死亡或细胞存活率欠安可能原因？研究人员在细胞培养时呈现存活率欠安培养基品质欠安 . 血清使用毛病或血清的品质欠安冷冻细胞解冻后 , 加以洗涤细胞和离心 . 悬浮细胞误认为死细胞养温度使用毛病 . 细胞置于 80太久 . 24、收到之冷冻管瓶身破裂时间：二O二一年七月二十九日. 另冷冻管瓶盖松, 冷冻管有可能因此而造成细, 均应立刻将冷冻管再

17、一, 各种目的无血清培养首选. 脱失落氨基后 . 另冷冻管瓶盖松, 冷冻管有可能因此而造成细, 均应立刻将冷冻管再一, 各种目的无血清培养首选. 脱失落氨基后 ,L- 谷氨酰胺可.L- 谷氨, 可是确切的降解率一直没有, 而氨对一些细胞具有GlutaMAX-I ？这个二, 释放 L-谷氨酰胺, 如果在相同条件下 ,L- 谷AIM V冻管瓶盖裂纹 , 或瓶身破裂 , 可能是因为把持者夹取冷冻管时用力不妥, 造成冷冻管裂损 , 建议使用止血钳小心夹取动或松脱 , 乃因热胀冷缩之物理现象胞污染 , 故冷冻管于放入和取出液氮桶时次扭紧 . 25、如何选用特殊细胞系培养基？培养某一类型细胞没有固定的培养

18、条件 . 在 MEM中培养的细胞 , 很可能在 DMEM或 M199中同样很容易生长 . 总之 , 首选 MEM做粘附细胞培养、 RPMI-1640做悬浮细胞培养是一个好的开始（12005）培养基（ SFM）. 26、L- 谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？L- 谷氨酰胺在细胞培养时是重要的作为培养细胞的能量来源、介入卵白质的合成和核酸代谢酰胺在溶液中经过一段时间后会降解最终定论 .L- 谷氨酰胺的降解招致氨的形成毒性. 27、GlutaMAX-I 是什么？培养细胞如何利用肽有多稳定？GlutaMAX-I 二肽是一个 L- 谷氨酰胺的衍生物 , 其不稳定的 alpha-氨基用 L- 丙氨酸来呵护 . 一种肽酶逐渐裂解二肽供利用 .GlutaMAX-I 二肽非常稳定 , 即使在 121磅灭菌 20分钟,GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解时间：二O二一年七月二十九日. , 酸性时为黄色 , 碱性时为紫色 . 研, （特别是雌激素） . , 酸性时为黄色 , 碱性时为紫色 . 研, （特别是雌激素） . 为防, 不使用, 可是, 如果. EDTA的.EDTA用来螯合游, 以便坚持抑制胰卵白酶的活性HBS）和, 在 Eagles （）中比CO2平衡, 以维持溶液CO2 中, 溶液会变碱 ,Han