酶性质-最适pH值测定

1、酶性质一最适pH选择姓名：俞华军 班级：09级生科3班 学号：200900140157时间：2011/04/11实验目的了解掌握测定酶最适pH的实验原理和方法了解酶的一般特性和性质实验原理酶的催化活性与环境PH有密切关系，通常各种酶只在一定PH范围内才有 活性，酶活性最高时的PH,称为酶的最适PH。高于或低于此PH时酶的活性逐 渐降低。值得指出的是，不同的酶最适PH也不同，如胃蛋白酶的最适PH为 1.52.5,胰蛋白酶的最适PH为8。酶的最适PH不是一个特征性的物理常数，对于同一个酶，其最适PH因缓 冲液和底物的性质不同而有差异。如唾液淀粉酶最适PH为6.8,但在磷酸缓冲 液中，其最适PH为6

2、.46.6，而在乙酸缓冲液中则为5.6。实验器材1.2.1.2.仪器：8支试管(15x15)、电磁搅拌器、水浴锅、电磁加热炉、沸水浴、 玻璃棒、锥形瓶(x9)、100ml容量瓶(x2)、吸管2ml (x2)、10ml (x2)、3ml (x3)、液枪 0.5ml (x2)、1.0ml (x2)、点样板、吸管 (x2)、烧杯200ml (x2)、洗耳球、冰水浴；3.材料：人口腔唾液淀粉酶。3.实验步骤1 .配制溶液A：配制0.2mol/L的磷酸氢二钠溶液200ml，称取143256g磷酸氢二钠标准 试剂于300ml锥形瓶中，加入200ml蒸馏水充分溶解；B：配制0.1mol/L的柠檬酸溶液100

3、ml；称取21g柠檬酸于200ml锥形瓶中， 加入100ml水充分溶解；C：配制0.3%氯化钠0.5%淀粉溶液，称取03g氯化钠于200ml烧杯中，充 分溶解后，取出约20ml到100ml烧杯中，剩余的溶液放到电磁加热炉上 加热至沸，然后称取05g淀粉加入到有20ml左右的少量氯化钠溶液中， 用玻璃棒搅成糊状后，加入到已煮沸的大量氯化钠溶液中，充分搅拌，使 淀粉完全溶解；D：配制唾液淀粉酶液，漱口后在嘴里含100ml蒸馏水30s1min后，倒于 200ml烧杯中，并置于冰水浴中保藏；E：用0.2mol/L磷酸氢二钠溶液和0.1mol/L柠檬酸溶液配制PH为5.4,6.0， 6.4，6.8，7.

4、2，7.6，8.0的缓冲液，分别置于锥形瓶中并贴上标签：表一配制不同pH缓冲液所加试剂量表PH值5.46.06.46.87.27.68.00.2mNa PO 2411.1512.6313.8561.817.3918.7319.450.1m柠檬酸8.857.376.1518.22.611.270.55总体积/ml20202080202020测定保温时间取一支试管，加入0.3%氯化钠0.5%淀粉溶液2毫升，加入pH6.8磷酸氢二钠 一柠檬酸钠缓冲液3毫升，放入37C水浴锅中保温5min，随后加入稀释 100-300倍的唾液2毫升，并开始计时。充分摇匀后，放入37度水浴中保温，每隔1分钟用滴管取1滴

5、混合液，至于 点滴板上，加1滴碘液，检验淀粉水解程度，待呈橙黄色时，为进一步确定保 温时间，应加1滴碘液至试管中，若为橙黄色表示反应完全，记录所需保温时 间。若2-3分钟内，取出的保温液与碘液作用呈橙黄色，则说明酶活力太高，应 再稀释唾液淀粉酶，记录稀释倍数，若保温时间超过15分钟，说明酶活力太 低，要提高酶的浓度。最佳保温时间8-15分钟以内，因此要掌握好唾液淀粉 酶的稀释倍数，确定准确的保温时间才能进行下步实验。最适pH的测定根据第二步中的保温时间，取7支试管编号并加入0.3%氯化钠0.5%淀粉溶 液2毫升，再分别加入pH5.4、6.0、6.4、6.8、7.2、7.6、8.0磷酸氢二钠一柠

6、 檬酸钠缓冲液3毫升，放入37C水浴锅中保温5min；保温后向1号试管内加入有适宜保温时间的唾液酶稀释液2ml，充分摇匀后， 放入37度水浴中保温，随后每隔一分钟向后一只试管加入唾液酶稀释液2ml， 进行同样的操作。到保温时间后(根据步骤2里的所测的保温时间)，依次取出试管加入一滴碘 液检测淀粉水解情况，从各管呈现的颜色，判断不同PH对淀粉水解和淀粉酶 活性的影响,并确定其最适PH值。表二测定最适pH步骤表试剂(毫升)1234567PH值5.46.06.66.87.27.68.00.3%氯化钠0.5%淀粉2222222相应PH缓冲溶液3333333每隔1分钟加入唾液淀粉酶液2222222充分摇

7、匀,37度水浴保温，到达保温时间后，每隔1分钟依次取出立即加入碘液1滴，摇匀1111111记录结果颜色深蓝淡紫微紫偏黄淡黄微紫偏黄淡黄偏紫紫色实验结果记录实验结果稀释100倍后的酶在pH6.8条件下的保温时间：12min17号试管的颜色分别为：深蓝、淡紫、微紫偏黄淡黄、微紫偏黄、淡黄偏紫、紫色;所以，人唾液淀粉酶最适黄偏紫、紫色;所以，人唾液淀粉酶最适pH为68左右。2.实验图片：六.实验分析及注意事项配制0.3%氯化钠0.5%淀粉溶液时要注意不要把淀粉一下子全部加到氯化钠溶 液中，而是先在少量氯化钠溶液中变成糊状后，加入到煮沸的大量氯化钠溶液 中，否则不能溶解完全，影响时间结果。保温时间指从加入酶液开始到从水浴中取出试管加入碘液的一段时间。摸准保 温时间是实验的关键步骤之一，保温时间一定要控制好，尽量控制在812分 钟，原始酶液不能弃掉，