实验七-大肠杆菌检测课件

1、实验七 大肠菌群的测定实验七 大肠菌群的测定一 实验目的1、掌握大肠杆菌的鉴定和计数方法2、 巩固无菌操作技术一 实验目的1、掌握大肠杆菌的鉴定和计数方法二 大肠杆菌鉴定原理大肠菌群：一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品中有否染肠道致病菌的可能。 样品中大肠菌群系以100mL（g）检样内大肠菌群最大可能数（MPN)表示。二 大肠杆菌鉴定原理大肠菌群：一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧 细 菌 学 检 验 程 序 样品 细菌总数 大肠菌群 水样稀释或不稀释 水样稀释或不稀释 第一步- 初步发酵试验

2、 倾注平板培养 （乳糖发酵） 37 24小时 37 24小时 菌落计数 第二步- 平板分离培养（取平均数报告） （转种鉴别培养基） 37 24小时 革兰染色镜检 第三步- 乳糖复发酵试验 报告结果 细 菌 学 三、实验器材 1、恒温培养箱（361 ）、高压灭菌锅、天平、灭菌培养皿、试管。 2、培养基及试剂： 乳糖胆盐发酵管、伊红美蓝琼脂平板（EMB） 三、实验器材四、实验步骤大肠菌群的检测 检品 胆盐乳糖发酵管 伊红美兰平板 大肠杆菌菌落纯培养 乳糖复发酵管（-） 乳糖复发酵管（） 四、实验步骤大肠菌群的检测1、检样稀释以无菌操作将检样1mL放于含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内

3、，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，注入含有9mL生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混匀，做成1：100的稀释液。另取1ml灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释液。根据食品卫生要求或对检验样品污染情况估计，选择三个稀释度，每个稀释度，接种3管，每支试管接种1ml。1、检样稀释2. 乳糖发酵试验 将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内，接种量在1mL以上者，用双料乳糖胆盐发酵管；1mL及1mL以下者，用单料乳糖发酵管。每一个稀释度接种3管，置361温箱内，培养24h2h，如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠菌群阴性，如有产生者，则按下列

4、程续进行。2. 乳糖发酵试验3.分离培养 将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，置361温箱内，培养18h24h，然后取出，观察菌落形态并做革兰氏染色和证实试验。4.证实试验在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落12个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置361的温箱内培养24h2h，观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性无芽胞杆菌，即报告为大肠菌群阳性。5.报告根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL（g）食品中大肠菌群的MPN 值。3.分离培养表1 大肠菌群最可能数（MPN）检索表 阳性管数 MPN 100mL(g） 95%可信限 1mL(g)3 0.1mL(

5、g) 3 0.01mL(g) 3 下限 上限 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 2 3 30 30 60 90 5 90 0 0 0 0 1 1 1 1 0 1 2 3 30 60 90 120 5 130 0 0 0 0 2 2 2 2 0 1 2 3 60 90 120 160 0 0 0 0 3 3 3 3 0 1 2 3 90 130 160 190 1 1 1 1 0 0 0 0 0 1 2 3 40 70 110 150 5 10 200 210 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 2 3 70 110 150 190 10 30 230 360 1 1 1 1 2 2

6、2 2 0 1 2 3 110 150 200 240 30 360 1 1 1 1 3 3 3 3 0 1 2 3 160 200 240 290表1 大肠菌群最可能数（MPN）检索表 2 2 2 200000123901402002601030360370 2 2 2 2111101231502002703403070440890 2 2 2 22222012321028035042040100470150022223333012329036044053033330000012323039064095040701501200130038003333111101234307501200160

7、0701403002100230038003333222201239301500210029001503003503800440047003333333301232400460011000240003607101500130002400048000 2009010360 21015030440 220210大肠菌群测定 挑选菌落特征：黑紫色、有光泽或无光泽菌落； 红色、粉红色菌落。抑制剂：胆盐、煌绿、十二烷基硫酸钠。 产酸判断：紫色培养液变成黄色产气判断：发酵导管内有小气泡，如轻轻打动试管有气泡沿管壁上浮，应考虑可能有气体产生，需进一步试验。 大肠菌群测定 挑选菌落特征：黑紫色、有光泽或无光泽菌落；抑制实验七-大肠杆菌检测课件 饮用水、乳、冷饮食品卫生标准的细菌指标 指 标 细菌总数 大肠菌群 饮用水 100个/ml 3个/L 消毒牛奶 30，000个/ml 40个/100ml 瓶装汽水、果味水 及果汁类饮料 品 种 100个/ml 5个/100ml 饮用水、乳、冷饮食品卫生标准的细五、实验报告（一）、列表记录并计算实验结果（二）、思考题1、怎样判断分离到的微生物是大肠杆菌？2、接种了微生物的培养皿为什么要倒置培养？五、实验报告（一）、列表记录并计算实验结果实验准备（2个样品/组）培养皿：10