真菌学总论(1)课件

1、第十七章 真菌学总论真菌学概述真菌（fungus），也称Eumycota，来源于拉 丁文的fungus，即蘑菇。真菌属于真核细胞 型微生物，与原核细胞型微生物有很多区别真菌细胞壁含有甲壳质（chitin）和-葡聚糖营养方式为吸收，无吞噬作用，营腐生、寄 生、共生和超寄生生活。 原核细胞型微生物与真核细胞型微生物比较 原核细胞型微生物 真核细胞型微生物 细胞核结构核膜无 有核仁无 有分裂方式 主要以二分裂有丝分裂，减数分裂细胞质结构质膜 常缺乏固醇常有固醇 内膜 较简单，有中介体复杂，有内质网和高尔基体核糖体 70S 80S 呼吸系统 质膜或中介体线粒体 真菌分类 我国普遍采用的是Ainswor

2、th等分类法，与医学有关的真菌为真菌门中的四个亚门:接合亚门（zygomycotina）子囊菌亚门（Ascomycotina）担子菌亚门（Basidiomycotina）半知菌亚门（Deutermycotina）假丝酵母菌属（Candida）隐球菌属（Cryptococcus）表皮癣菌属（Epidermophton）球孢子菌属（Coccidioides）组织胞浆菌属（Histoplastoma） 真菌生物学性状多数对人有益，仅少数导致人类疾病对人致病的真菌分为四类：病原性真菌、 条件致病性真菌、产毒真菌及致癌真菌。目前大多数真菌的鉴定，形态学（包括真 菌形态、菌落形态）检查仍有重要意义 。 单

3、细胞真菌酵母菌：孢子，无菌丝类酵母菌：芽生孢子，假菌丝多细胞真菌 丝状菌（霉菌）：孢子和菌丝真菌形态特征类酵母菌白假丝酵母菌孢子假菌丝多细胞真菌形态二相型真菌机体内寄生37单细胞型：多细胞型：含动物蛋白培养基酵母菌沙保氏培养基25普通培养基25丝状菌真菌的基本形态结构菌丝孢子适宜温/湿度芽管延长呈丝状菌丝 营养、气生、生殖菌丝分支交织成团菌丝体菌丝多形态菌种鉴定孢 子 的 分 类有性孢子：同一/不同菌体上两细胞融合减数分裂而成无性孢子：菌丝上细胞分化生成，不 发生细胞融合。无性孢子分生孢子叶状孢子孢子囊孢子芽生孢子厚膜孢子关节孢子大分生孢子小分生孢子大多真菌行有性/无性生殖，病原性真菌多以无性

4、生殖为主。生殖菌丝末端细胞分裂或收缩形成；也可从菌丝侧面出芽形成大分生孢子的形态芽生孢子厚膜孢子关节孢子真菌的生长特性营养要求不高，常用沙保氏培养基 基本成分：葡萄糖、蛋白胨、琼脂 生长条件：pH4.06.0 温度2228（深部 真菌37） 较高的湿度、O2菌 落 类 型（1）酵母型/类酵母型（单细胞真菌菌落形式）A、湿润、柔软而致密，形态似一般细菌菌落B、镜下：酵母型 类酵母型卵圆孢子、芽生孢子芽生孢子、假菌丝酵母型菌落白假丝酵母菌菌落(类酵母型) 曲霉菌青霉菌临床标本的采集种类（1）皮肤的角质性物质：毛发、指（趾） 甲、皮屑等。（2）各种分泌物和排泄物：生殖道分泌物、 耳垢、痰、粪便、尿液

5、等。（3）血液和体液：体液包括胸水、腹水、脑 脊液、淋巴穿刺液等。（4）脓汁及渗出物。采集标本注意事项 （1）采集的标本要适宜 不同真菌感染应采取不同的临床标 本。怀疑为浅部真菌感染如体癣，应刮取病变边缘的痂、皮屑，发癣应取折断了的病发。怀疑为深部真菌感染应取血液、脑脊液、痰、脓汁等。（2）在用药前采集标本一般真菌标本须在用药前采集，对已用药者则需停药一段时间后再采集标本。采集标本注意事项（3）采集的标本量要足 血液和脑脊液标本5ml，胸腔液20ml，皮屑标本两块，活体组织两份（一份送病理科检查，一份作镜检和培养）。（4）严格无菌操作在采集标本时严格无菌操作，并进行消毒处理，尤其是在采集血液和

6、脑脊液标本时，要避免污染杂菌。（5）采集的标本立即送检对采集的标本应立即送检，特别是深部真菌标本采集后最长不超过2h。真菌的检验方法 镜检真菌形态真菌抗原检测真菌分离培养与鉴定真菌核酸检测真菌毒素检测 真菌标本直接检查1.直接镜检：方法简便，快速10%KOH微加热低倍/高倍镜检查有无菌丝/孢子角质标本（皮肤癣菌） 直接观察/染色后观察2.抗原检测: 采用免疫学方法检测真菌抗原，常用的方法有胶乳凝集试验、ELISA、半定量放射免疫测定法。 常用的染色方法常用的染色方法有革兰染色、瑞氏染色、荧光染色，乳酸酚棉蓝染色、还有墨汁负染色等。对检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌，需作瑞氏染色或姬氏染色后镜

7、检。检测病人脑脊液标本中新生隐球菌，需作墨汁负染色后检查，背景为黑色，新生隐球菌和荚膜不着色 直接镜检意义阳性结果意义1.有诊断意义，如浅部真菌病、隐球菌病、皮肤粘膜假丝酵母菌病等2.代表组织相，直接镜检看到的真菌形态就是该真菌的组织形态，如假丝酵母的菌丝、浅部真菌的厚膜孢子等；确定某些致病性真菌属或种，如皮肤癣菌、曲霉等3.判断某些真菌种的致病性等 直接镜检意义直接镜检局限性1.阴性结果不能排除真菌感染，直接镜检不如培养敏感，其敏感性随标本类型、数量、采集时间和质量等而有所不同 2.有假阳性结果，如溶解的淋巴细胞在脑脊液印度墨汁湿片中易误认为新生隐球菌；脂肪微滴也可与出芽酵母细胞混淆 分 离

8、 培 养真菌培养是目前鉴定真菌的唯一方法。培养成功与否与采集的标本是否适当、是否新鲜、培养基的选择、培养温度与时间等有关。大多数真菌培养的温度为28，但深部真菌为37。对二相性真菌培养时,28培养真菌呈菌丝相（霉菌型），37培养为组织相（酵母型）。 真菌培养方法 平皿培养 :表面较大可使标本散布，便于观察菌落形态，但水分易蒸发，只能培养生长繁殖较快的真菌，如假丝酵母菌、隐球菌。 大试管培养:水分不易蒸发，主要用于皮肤癣菌的培养和真菌菌种的保存。玻片培养(微量培养、小培养):可用于真菌菌种的鉴定。 观察菌落形态时注意1.菌落性质，是酵母菌还是霉菌。2.菌落大小,一般病原性真菌菌落小，而条件致病性

9、真菌菌落大。3.菌落颜色，一般病原性真菌颜色淡，污染真菌颜色深。4.致病性真菌菌落下沉，污染性真菌菌落不下沉;致病性真菌有时使培养基开裂，但污染霉菌很少引起培养基开裂。 真 菌 鉴 定菌种鉴定是一个复杂过程，仅观察菌落形态是远远不够的，还需作生化反应，分子生物学鉴定，必要时将菌种送有关单位鉴定。检验真菌常用的生化反应有糖(醇)类发酵试验、同化碳源试验、同化氮源试验或利用硝酸钾试验、牛乳分解试验、酚氧化酶试验、明胶液化试验和脲酶试验等。试验方法同细菌试验，主要用于检验深部感染真菌如假丝酵母菌、隐球菌等。1.多烯类抗生素，如两性霉素B、制霉菌素、曲古霉素等。2.吡咯类，包括酮康唑、伊曲康唑、氟康唑

10、、伏立康唑、克霉唑、益康唑等。3.其他类如氟胞嘧啶。抗真菌药物分类-化学结构分类1.作用于真菌细胞膜：两性霉素B、制霉菌素、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、酮康唑及克霉唑等。2.作用于真菌细胞壁：尼可霉素Z、卡泊芬净及普拉米星（pradimicin）等。3.作用于真菌核酸：干扰真菌DNA合成，5氟尿嘧啶（5FC）等。4.其他：大蒜新素（allitridum）及冰醋酸（glaciale acetic acid）等。 抗真菌药物分类-作用机理分类1两性霉素B 两性霉素对大多数深部致病真菌具有活性，如念珠菌、新型隐球菌、曲菌、组织胞浆菌、双向真菌等均有较强的抑制作用。但对皮肤和毛发癣菌大多耐药。2酮康唑

11、(ketoconazole) 对念珠菌、着色真菌 属、球孢子菌属等有抗菌活性，对毛发癣菌亦具抗菌活性。 临床常用抗真菌药物 3氟康唑(fluconazole) 对念珠菌、隐球菌 具有较高抗菌活性。4氟胞嘧啶 为窄谱抗生素，对念珠菌、新型隐球菌和球拟酵母有较高抗菌活性，对其他真菌抗菌作用差，易产生耐药性，故常和两性霉素B联合使用。 临床常用抗真菌药物 5伊曲康唑(itraconazole) 伊曲康唑体外有广谱抗真菌活性。对念珠菌、隐球菌、曲霉菌、组织胞浆菌、马内非青霉均有效。6伏立康唑（Voriconazole） 伏立康唑适用于侵袭性曲霉病及严重真菌感染不能耐受其他药物或经其他药物治疗无效者，如

12、足放线病菌属、镰刀菌属等感染。 临床常用抗真菌药物 抗真菌药物药敏试验原则1.提供两种以上有相当活性的抗真菌药物的可信测量方法2.和体内的活性具有相关性，可预测治疗的效果3.可用来监控敏感群体菌株的耐药性发生4.可预期研究新药的潜在治疗效能。真菌药物敏感试验过程方法:肉汤稀释法，包括常量稀释法和微量稀释法。 培养基:含谷氨酰胺和pH指示剂，不含碳酸氢钠RPMI 1640培养基。程序:药物原液配制 接种菌液制备 药液稀释 常量稀法 微量稀释法 结果判断 质量控制 真菌非培养检测技术动物试验:分离病原性真菌、确定真菌菌种的致病性、研究药物对真菌的作用等。 核酸检测:操作简便、省时省工、敏感性和特异性高的优点，但要一定的实验条件，并大多仍处于实验研究阶段，故目前不可能完全替代常规鉴定方法 。真菌毒素的检测:生物学方法、薄层层析法、高效液相色谱法和间接竞争ELISA法等。 常见深部真菌病动物试验鉴别要点 取材 接种动物接种途径潜伏期 动物病变白假丝 痰、尿 家兔、耳静脉、 35d肾脏明显肿胀，肾酵母菌病 便、血 小白兔腹腔 皮质部位有白色脓疡新生隐球 脑脊液、 小白鼠颅内、 28周 死亡。取标本涂片、菌病 脓、痰、 腹腔 墨汁负染色见带荚膜 尿 的菌体孢子丝 脓汁、痰液 大、小腹腔、 13周 肠系膜、腹膜有肉芽菌病 活体组织、白鼠睾丸 组织形成，睾丸肿大 （涂片见G+圆