微生物第八章病原学诊断与防治课件

1、第八章 病原学诊断与防治广州医学院病原生物学教研室 陈 晓 湘诊断病原学检测血清学检测防治特异性防治：人工主动免疫、人工被动免疫非特异性防治：抗生素、抗病毒药物、抗真菌药物第一节 细菌学诊断细菌学诊断检测病原菌及其抗原，产物或核酸血清学诊断检测患者血清中特异性抗体一、病原菌检测标本采集与送检原则：根据不同疾病和不同病期，采取不同标本。无菌操作，避免杂菌污染。应在使用抗菌药物前采集标本。尽可能采集病变明显部位的材料。标本必须新鲜，采集后尽快送检。送检过程中要采取适当的保存方式。做好标记，详细填写化验单，保证各环节准确无误。致病菌的检验程序标本形态结构检查分离培养与鉴定病原菌抗原检测 其它检测光镜

2、、电镜、染色法形态特征培养特征生化反应药敏试验血清学反应沉淀反应协同凝集免疫荧光对流免疫电泳酶免疫测定免疫印迹细菌代谢产物（气相色谱）PCR查细菌核酸噬菌体分型细菌素测定分子生物学技术动物试验第二节 病毒学诊断 一、标本的采集与送检早期（前驱期、急性期、发病前12天）根据不同病毒感染，采集不同部位标本病毒室温易失活，应低温保存，快速送检无菌采集与抗生素处理（防止细菌污染）血清学实验检查抗体应采集双份血清二、病毒的分离培养与鉴定（一）病毒的分离动物接种：选择易感动物及适宜接种部位，观察发病情况鸡胚培养：不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。细胞培养：

3、分离病毒最常用的方法（1）原代细胞来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。（2）二倍体细胞在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞，可用于病毒分离和疫苗生产。（3）传代细胞能在体外无限传代的细胞，多由癌细胞或二倍体细胞突变而来，不能用于疫苗生产。正常细胞病变细胞（二）病毒的数量与感染性测定滴定：测定单位体积中感染性病毒的数量 蚀斑测定法病毒感染单层细胞后，产生的局限性病灶，称蚀斑。蚀斑是由一个感染性病毒体复制形成的，称蚀斑形成单位，病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升的蚀斑形成单位来表示。 50%组织细胞感染量 鸡胚动物或细胞后，引起 50% 发生死亡或

4、病变的最小量。（三）新分离病毒的鉴定核酸类型的测定理化性状的检测形态学观察血清学鉴定基因测序和生物对比 四、 病毒感染的快速诊断 （一）形态学检查电镜和免疫电镜直接观察病毒普通光镜观察包涵体（二）检测病毒蛋白抗原 用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原（简便、敏感、特异）常用方法： 免疫荧光技术（IF） 固相放射免疫测定（SPRIT） 酶免疫技术（EIA）等。（三）检测病毒特异性IgM抗体检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染。（四） 检测病毒核酸 1 核酸杂交 斑点杂交（dot hybridization） 原位杂交（in site hybridization） DNA印迹杂交（Souther

5、n blot） RNA印迹杂交 （Northern blot）2 核酸扩增聚合酶链反应 （polymerase chain reaction，PCR）连接酶链反应（ligase chain reaction，LCR）反转录PCR（Reverse transcrptase PCR，RT-PCR） 3 基因芯片技术（gene chip） 第三节 真菌学诊断标本直接镜检深部标本染色标本 G染色G+圆形大小不均有芽生孢子 分离培养 沙氏培养基 菌落观察角质标本不染色10%KOH观察菌丝、孢子类型 大小 颜色 皱摺 鉴定动物实验（致病性真菌）接种观察发病情况死亡后取标本进一步鉴定皮肤超敏反应 快速诊断血

6、清学实验核酸检测真菌毒素检测新生隐球菌脑脊液涂片假菌丝疫苗死疫苗活疫苗新型活疫苗基因工程疫苗重组载体疫苗合成疫苗亚单位疫苗DNA疫苗转基因植物疫苗治疗性疫苗类毒素 外毒素 0.3%0.4%甲醛 类毒素用于人工主动免疫的生物制剂二、人工被动免疫(artificial passitive immunity) 注射含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白或细胞因子等免疫制剂，使机体立即获得特异性免疫。 人工被动免疫作用作用发挥迅速，但这些免疫物质不是病人自己产生，故维持时间短。主要用于治疗或紧急预防。抗毒素抗菌血清胎盘丙种球蛋白、血清丙种球蛋白其他免疫制剂用于人工被动免疫的生物制剂两种人工免疫的比较区别要点人工主动免疫人工被动免疫免疫物质抗原抗体或细胞因子等接种次数1-3次1次免疫出现时间慢（注射后2-4W）快（注射后立刻出现）免疫维持时间长（数月数年）短（2-3W）用途多用于预防多用于治疗或应急预防三、细菌感染的治疗抗菌药物人工合成化学药物微生物合成的抗生素（一）抗菌药物种类按生物来源分按化学结构和性质分（二）主要作用机制影响细胞壁合成影响细胞膜功能影响细菌蛋白合成影响细菌核酸代谢四、病毒感染的治疗抗病毒化学制剂核苷类药物抑制病毒基因复制 抑制病毒基因转录非核苷类反转录酶抑制剂蛋白酶抑制剂其他药物（金刚烷胺）干扰素及干扰素诱生