神经通路追踪技术课件

1、神经通路追踪技术PPT制作人：舒洪玲材料查找与修改：杨君婵、李梦娴、舒洪玲、黄艳双班级：11级生物科学1班什么是神经通路？ 神经通路是从感受器到大脑皮质或从大脑皮质至效应器的神经元链，作为神经冲动传导的通路，称神经通路。神经传 感觉传导通路（上行传导通路）：从感受导通路 器到大脑皮质的神经元链。 运动传导道（下行传导通路）：从大脑皮 皮质到效应器的神经元链。 那么，传导速度这样快，科学家们是通过什么技术来研究的呢？研究一般思路给与神经元以某种物质，追踪它的输送及其输送后在神经元其它部分的定位。应用一些组织化学方法来显示中枢神经通路-如荧光法。Golgi染色法 方法:将动物灌注固定后取脑并将全脑

2、浸于Golgi染液中2周,然后浸于30%蔗糖中;经过蒸馏水洗涤、氨化、酸性坚膜定影液反应、蒸馏水再洗涤,然后切片，采用100微米厚的震动切片。经上升梯度酒精脱水、透明,裱片后观察。 目的：研究神经元之间的邻近关系以及树突、轴突的配布。HRP法的基本用法：识别突触传入冲动的来源 将HRP注入轴突终末某区，它即被摄取，并经轴突逆行送到神经胞体，从而追踪突触传入冲动的来源和去处。确定传出投射 注射HRP到灰质区，可使注射区的神经元胞体摄取示踪剂并经轴索顺行输送到突触终末。神经元的Golgi样染色。Methods rely on a substances incorporation into the

3、neuron, its transport, and its subsequent localization in other part of the neuron;Histochemical methods.注意事项给药 加压注射、离子投入和轴索损伤后标记。动物存活时间 逆行输送速度：50-120mm/天，胞体内活性：2-4天。 顺行输送速度：100-300mm/天。固定和切片 1%多聚甲醛于1.5戊二醛，一般为冰冻切片。HRP的选择 游离HRP; 结合HRP(氨基酸、凝集素、某些细菌毒素等可提高其灵敏度数十倍）。常见神经元被HRP标记程度 1977年Kuypers等利用轴浆流逆向输送，将荧

4、光素作为示踪剂，用不同的荧光素分别注入两个不同部位双标记神经元，可在不同波长的激发光照射下，使神经元胞体显示出两种不同颜色的荧光。常用的荧光素有：FITC(绿色), TRITC(红色)荧光素逆行标记法荧光逆行标记法简单、灵敏，可研究神经元的侧枝投射。但切片易褪色，不易控制注射范围和避免过路纤维的摄取。放射性核素示踪法 放射性核素示踪法是一种利用神经元轴浆运输现象进行放射性示踪剂标记，用自显影方法显示神经元与终末或神经元间联系的方法。 它的一个突出优点是过路神经纤维几乎无标记，而过路纤维问题正是辣根过氧化物酶轴突逆行追踪法所难以避免的。放射性核素示踪法的主要步骤放射性示踪溶液的配置（3H-氨基酸） 放射性示踪剂引入（注射法、电泳法） 存活期、固定（10%甲醛溶液）、切片、贴片 涂布原子核乳胶或感光材料 曝光（密闭的暗盒中进行） 显影、定影、染色（Nissl染液） 放射自显