两种不同提取方法对赤芍中丹皮酚含量

1、两种不同提取方法对赤芍中丹皮酚含量【摘要】目的建立以高效液相色谱法测定赤芍中丹皮酚含量的方法。方法采用超声和回流两种方法提取赤芍药材中的丹皮酚,采用高效液相色谱法测定其含量。色谱柱为agilentzrbaxsb-18(stablebndanalytial4.6250,5),流动相为甲醇-水(4555),流速为1l/in,柱温25,检测波长274n。结果线性回归方程为：y=1.01105x-9.84102,r=0.9999(n=5),在0.1040.52g范围内丹皮酚的峰面积与进样量有良好的线性关系。结论本法操作简便、准确、重复性好,可用于赤芍药材中丹皮酚含量的测定,同时可作为赤芍药材在炮制前后

2、的质量控制方法之一。【关键词】赤芍;丹皮酚;高效液相色谱法;含量测定effetftextratingethdsnntentfpaenlinpaenialatiflrapall.byhplpengxia-xia,zhangzhen-ei,hidng,etal(gansullegeft,lanzhu730000,hina)abstrat：bjetivetestablishahplethdfrdeteriningthententfpaenlinpaenialatiflrapall.ethdsultrasundandrefluxethdsereusedtextratpaenlinpaenialatif

3、lrapall.,andthenthententfpaenlasdeterinedbyhpl.itasperfrednagilentlunzrbaxsb-18(stablebndanalytial4.6250,5),bilephaseasethanl-ater(4555),flrateas1l/in,lunteperatureas25,anddetetinavelengthas274n.resultstheregressinequatinasy=1.01105x-9.84102,r=0.9999(n=5).thestandardurveaslinearithintherangef0.1040.

4、52gfrpaenl.nlusintheethdissipleandaurateithgdreprduibility.itissuitablefrdeteriningthententfpaenlinpaenialatiflrapall.andntrlthequalityntrlfpaenialatiflrapall.inpress.keyrds：paenialatiflrapall.;paenl;hpl;ntentdeterinatin赤芍为毛茛科芍药属植物芍药(paenialatiflrapall.)或川赤芍(paeniaveithiilynh)的枯燥根,其有效成分中含有丹皮酚1。丹皮酚易溶

5、于乙醇和甲醇,可溶于乙醚、丙酮、苯、氯仿及二硫化碳,稍溶于水,在热水中溶解,不溶于冷水,能随水蒸气挥发,呈白色针状结晶,具有熔点低、易挥发及水溶性差的特性2。研究说明,丹皮酚具有镇静、镇痛、解热、解痉、抗炎等作用,并具有抗心律失常、抗动脉粥样硬化、改善微循环、保护缺血组织、抗菌和抑制皮肤色素合成等作用。近年来还发现丹皮酚具有抗肿瘤作用,同时能进步机体免疫力且无明显不良反响。丹皮酚的提取方法主要有醇提法、水蒸气蒸馏法、2超临界流体萃取法等3。本试验根据2022年版?中华人民共和国药典?牡丹皮和徐长卿中丹皮酚的测定方法,采用超声提取,根据有关报道采用乙醇回流提取4-5,以高效液相色谱法(hpl)测

6、定其含量,并比照两种不同方法提取对其含量的影响,通过建立赤芍中丹皮酚的含量测定方法,多角度控制赤芍药材的质量。1仪器与试药aters600高效液相色谱仪(aters600泵,aters2487双波长检测器,aterseper色谱工作站);超声清洗仪(200,50hz,天津奥特赛恩斯仪器as7240b);混合纤维素酯微孔滤膜(孔径：0.45);聚偏氟乙烯微孔滤膜(f型,孔径：0.45);电子分析天平(sartriusbs224s);超级恒温水浴(dkb-50常州荣冠实验分析仪器厂)。丹皮酚对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号110708-202205,供含量测定使用);药材赤芍(购于甘肃中医

7、学院附属医院)经中药鉴定教研室主任杨扶德教授鉴定为毛茛科植物芍药paenialatiflrapall.的枯燥根。甲醇(色谱纯,山东禹王,批号20220315112),乙醇(分析纯,批号20220827093),水为娃哈哈纯洁水。2方法与结果2.1色谱条件与系统适用性agilentzrbaxsb-18(stablebndanalytial4.6250,5)色谱柱;流动相：甲醇-水(4555);流速：1l/in;柱温25;检测波长274n。在此色谱条件下,理论塔板数大于13000,别离度大于1.5。2.2对照品溶液的制备精细称取丹皮酚对照品2.6g置25l量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得

8、每1l对照品溶液含丹皮酚104g。2.3供试品溶液的制备取样品粗粉(过40目)约1.0g,精细称定,置具塞锥形瓶中,精细参加甲醇50l,密塞,摇匀,称定重量,超声处理(功率200,频率50hz)30in,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀滤过。精细取续滤液1l,置10l量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀即得,备用。取样品粗粉(过40目)约1.0g,精细称定,置圆底烧瓶中,参加8倍量75%乙醇,于80回流30in,低温挥干乙醇,加甲醇溶解,精细取续滤液1l,置10l量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀即得,备用。2.4线性关系考察分别精细吸劝2.2项下的丹皮酚对照品溶液0.5、1.0、1.5、2

9、.0、2.5l置10l量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀即得,制成一系列浓度的对照品标准溶液。分别精细汲取20l进样,注入液相色谱仪,记录色谱,以峰面积为纵坐标,丹皮酚浓度为横坐标进展回归计算,得线性回归方程为：y=1.01105x-9.84102,r=0.9999(n=5),结果说明,在0.1040.52g范围内丹皮酚的峰面积与进样量呈良好的线性关系。2.5精细度试验精细汲取对照品溶液(104g/l)20l,重复进样5次,并进展测定,测定其rsd=0.75%,说明精细度良好。2.6稳定性试验按“2.3项下方法制备供试品溶液,精细汲取供试品溶液20l,分别于0、4、8、16、24h进样,测定其rs

10、d=0.83%(n=5),结果说明,供试品溶液在24h内稳定性良好。2.7重复性试验按“2.3项下方法制备供试品溶液5份,精细汲取供试品溶液20l进展测定,丹皮酚平均含量为6.705g/g,rsd=0.91%(n=5),说明供试品溶液重复性良好。2.8加样回收率试验精细称取丹皮酚含量的供试品1g,每3份为一组,参加对照品溶液,分别精细参加5.2g/l对照品溶液0.5、1.0l,按“2.3项下方法制备供试品溶液,并进展测定,记录色谱,计算其rsd=0.81%,说明回收率符合规定。结果见表1。表1加样回收率试验结果(n=6)2.9丹皮酚的含量测定按“2.3项下方法制备供试品溶液,分别进样20l,测

11、定(n=3),取3次测定平均值。结果见表2,色谱图见图1。由表2可知,采用甲醇超声提获得到丹皮酚的含量普遍偏高,采用75%乙醇回流得到的含量较低。由于采用回流提取时用到的乙醇溶剂较少,在回流时随着时间延长,乙醇不断挥发,故给药材成分提取带来损失,有可能使提取量较少。表2不同提取方法的赤芍中丹皮酚含量测定结果3讨论赤芍中主要有效成分为芍药苷,本试验选取其含量较低的丹皮酚作为参考指标,目的是对赤芍中丹皮酚做一定量,以到达综合控制赤芍药材质量的目的。本试验在进展乙醇回流提取的过程中,采用75%乙醇,只回流30in,目的在于尽量防止丹皮酚的损失。但由于丹皮酚为挥发性成分,在加热回流时难免对其造成损失,故测定结果显示,乙醇回流提取后成分的含量普遍低于甲醇超声提龋在2022年版?中华人民共和国药典?中,赤芍以所含成分芍药苷作为质量控制的指标,丹皮酚在药材中含量较低,在枯燥和加工等炮制过程中,受到温度的影响导致其含量降低,因此,在炮制的过程中应适当控制温度以防止丹皮酚的损失。【参考文献】1国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)s.北京：化学工业出版社,