铁细菌检测方法

1、工业循环冷却水中菌藩的测定方法第6部分：铁细菌的测定 MPN法1 JEfflGB/T M舸3的本部分规定工业据环冷却水申保切I甫的测定方it.掌部分iA阁于工业世环滞却水中地细。I的SH定.也通用于摩术、生活用水及牯泥中仗翊菌的测定.2地范性引用文件下列文件中的条就避过GB/T的本部分的引用而成为本部分的条款.凡是注日期的引用文件，11随所有的修赦单（不包牯勘湿胶内容）或博订寇均不活用于本部分，然鼓同.根据本部分送成 阱议的并方研究是否可磁用遮些文杵的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本 部分.Cili/T fl03化学民制试奥方法中所用制剂及物品的制备（GB/T抑3 200Z

2、.1SO C353-1,1982, NEQ）GB/T 6602 分折贫推室用水规格利成驰方ttGEVT 66S2 WOOL ISO %9如1涸了, MOD）3方法搓集.本法杲.用去试管发博技术,在能9土】）龙培养M d,如果试管内株色用笑而旦形或那色成黑色沅淀， 衰困阳姓艮成，栗用MPN技术.淋被厕试杵中的铁细馆进行计数.4试制和材料本部分所用试剂，除诈另有现定，应使用分析纯武荆.和符音GB/T柘M中二级水的规定.试魏中所带制剂及制而，在没.有注明其他要求时，均技GB/T &。3之期定制帮1 1酩睡榻*4一2琥酸被.4.3豪酸垣二棺.4.4麒化钙,5罚酸钠.4.6拧株酸快按.4-7藏化钠.4.

3、8也率;化钠溶液:如4.9总酸溶液：1十_10戴代虎酸械，4.11乙醉溶箴；75骑（样粗分数*A. 12 牛 J,4.13医用脱脱棉“5悦毒、渔番1 .无菌帮（室或超尚T梅白，5.2拂汽压力火俏器.&-3生化培养轴.5.4电热干燥箱：温度可控制在60 P280 *Cn5.5刻度吸管：1 mL&5.6刻度吸管：5 mL5. 7 试管：150 mnnX15 mm,5.8试管架。5,9 磨口三角瓶：100mL。5. 10 磨口试剂瓶：1 000 mL.5. 11 容量瓶000 mL.6试验前准备6培葬基的制备称取下列试剂：硫酸镁0.5小疏酸镂0.5小磷酸氢二钾0.5 gf氯化钙。.2 g;硝酸钠0.

4、5 g；柠檬酸铁佚10.0 g.将上述试剂溶解在1 000 mL水中，用氢氧化钠溶液或盐酸溶液调节pH至6.8士0. 2,并分装在试 管中，每管5 mL,塞上棉塞，数支一捆，每捆管口用牛皮纸包扎,用蒸汽压力灭菌器于（德11）亳灭菌 15 min.6.2无菌稀释水的制畚1生理盐水的配制:称取8.5 g氯化钠溶解在1。0。mL水中，混匀.6.2.2将生理盐水分装在100 mL磨口三角瓶中，每瓶45 mL.每个三角瓶塞子和瓶口问插入一小纸 片，塞紧瓶塞，每个瓶子的瓶口用牛皮纸包扎以防污染，用蒸汽压力灭菌器于（1211）黑灭菌15 min。6,3刻度吸管的灭菌1将洗净并烘干后的刻度吸管粗端塞上医用脱脂

5、棉，棉花量要适宜，长度大约10 mm15 mm,棉 花不宜露在口外，多余的棉花可以用火焰烧掉。6.3.2每支刻度吸管用一条约网mm5。mm宽的牛皮纸条，以45左右角度螺旋形卷起来，吸管的 尖端在头部,粗端用多余的纸条析叠打结，不使散开，标上度最，若干支扎成一束，置电热干燥箱中，于（160士2）C灭菌 2 h.6.4采样瓶的灭菌将洗净并烘干后的1 000 mL磨口试剂瓶瓶口和瓶颈用牛皮纸裹好，扎紧，置电热干燥箱中，于 （160土2）写灭菌 2 h.6.5硫代硫酸钠灭菌将硫代硫酸钠放入无菌箱（室）内，并均勾地摊在离紫外线灯30 cm处，灭前30 min。7测定步骤7水样的采集-L 1用无菌采样瓶采

6、集被浏样品，在采样过程中，要保护瓶口和颈部，防止这些部分受杂菌污染，瓶 内要留下足够的空间，以备洲定之前摇勾,7. 1.2若采集的水中有余氯，应在采样前，在无菌操作下，于无随采样瓶中加人灭过菌的硫代硫酸钠, 加入的量为每升水样约0. 1 go7. 1.3水样采集后应立即进行测定，如果在2 h内不能进行测定，应把水祥放在冰箱中于4 P10 r；B/1 ldtid3,S2Q09保存,存放时问不宜超杜跃h,经冷床保存后的水祥需科定时，乱泳箱中取出,于龄心左tr活化4 h- 5也再苗行8M定.?2无由401幸）爪蕨把试验所用的无档培养基,芫前稀料水.无菊哽管等翊苗放大无曲箱t空内，打刑紫开蛾灯火前 3

7、0 min.7.3水样的帮鞋和槌种7一3一1亦拌放人灭过菊的无商箱室）中.空即用心呢乙醇询度陞泡的医用脱脂棉球很手，虫燃无菌箱 （室）内的港精灯对永拌的稀堆和接神的操作应在无蔺箝室）内的火甥区进行，7,3,2遣棒诸宜的稀再度.应使最后一-个稀辙度接神培昨后丸鼓州1葛生箕.在空白稚样木林粘上标上 稀料度数.7. 3. 3 JU N惜稀粹诚稀整水祥，即用S eL大菊吸管吸取Em L水梓注入到45mL空白祷麻水中充分 裾勾.此对稀募度为10-.7一3一 4另坝一支5侣I 一工茜般骨嗫取5 eL神释度为I。水样注人到第二个帮料水中，充分摇匀，此叶 稀释度肯】。，装推.直至需耍的耗雁度为止+7.3.5将

8、水样包括稀郭止样务别接神于装有坍非基的试管中，试骨筐试骨架上，排个稀葬度重St接 种5管根揖需凳也可重鬣接神3管装4管），却时接种I mL,每挟一个稀料魔更换一支无蔺吸管.7,3.6脂取一-取试管靖景基不技水样,作为空白.7.4培葬在生化培养箱中亍件9土 1）心培部14 L8的敷5报告B. 1乩产生揭色或黑色抓址旦原站葬茶中株色消失蜜为透削状者，表明有埃凯明存隹，以十飞即惟】 表示.其余说管以4一咔阴性）表示.BM如果空白出现阳炸反应，表明酒定过程中有籽染,本次测定无败。B.i算出1。进位稀祁笛中阳性试管妆，以印性in智将就记录下来一&4布1。进位禅啷中第丁 三个罹春度时.用性组令的指数队都耍

9、HI其中依次的二个稀鲜皮，财适二个 稀择度的决定是光茜出&管生悌舟憧位应的最大利释度，格柄选出共次相连的拘个夏高的稀桦度算出 阳性坦令指敝（见表1示阊L.w-S-&若按照&4所般定的臣回选出三个帏辑携后，有夏曲的稚祁仍然产生个阳性武骨，就应诙将这 -个阳性试潸井入所选择的最高牯样的叩性结果见表1序制S. 6 抵据阳性酣合的苗数，直表A. I博出最大可帷的丽数MPN）歌以阳性粗合摺担的斯一位数字的 稀秤度数，即为拆花升水拌中被细苗的酉数加果辞个稀鞘度重遗接种1管成3竹，根据附性坦台的揩 散查“附录驴去H.1成附录b表C.IJ.费1示 倒料歼rt,生忙就* urrt ii管奇旧性狙备 wfe搜告方

10、式中/mL10&0s10*| Jds10L十十+十十十十十十十十十一&5Z005加氏 fl/tD-1 -SO:H-+ +- 十+ 一一51/6054225/ld| P-|n|LT s- - s31&5524+ + + + + + + + +-I- + + 4- +S550HG3. Vtn-J.sxltf9精密度土 I由于微生物是不稳定的，精确的试验不能实现，精密度的表达值能按MPN程序.9.2在样品中细菌的分布是不规则的，有时细菌成倍地吸附到小颗粒上，MPN正确度随着平行管的 增加而增加，当使用5个平行管，每管加1 mL样品时，测定靖果的置信度为95%. 附录 A（规范性附录）五个平行管最大可

11、能的菌数五个平行管最大可能的曲数见表A. 1 表A, 1指数个/mJ,指数个/mL指数个/mL指教个/mL0000H0203L 2400L35138.50010.22100, 7401.7S205.0OQ20.42110, 94Q25217.00100.22121. 24032.55225.5Q110.4220D. 941。1-752312.00120,6221L 24112,052415.00200.42221. 4412Z 552517. 50210.62301.24202t053。H.0030U.S231】.4*212. 553111.0|1000.2240L 44223.0就14.01OJ小3000. 84302; 553317.01020.6301L I4313. 053420.01030.830Z1.4432土 053525.01100.4310L 14403. 55如13.01110.63111.44414. 9汛117.01120.8312L?4 SO4. 054225.0120O.B3132.0妁5. 054330.01210.83201.45002. 55