方法学验证方案

1、方法学验证方案方法学验证方案方法学验证方案资料仅供参考文件编号：2022年4月方法学验证方案版本号： A修改号： 1页 次： 1.0 审 核： 批 准: 发布日期： *含量测定方法学确认方案日期：2016年1月验证方案审查与批准您下面的签字表明您已审阅此份验证方案并同意实施。姓 名职 务签 名日 期起草人姓 名职 务签 名日 期审核人审核人姓 名职 务签 名日 期批准人目 录 TOC o 1-3 1.目的 : 对照品进两针的平均峰面积； : 对照品第一针峰面积； : 对照品第二针峰面积。9 验证实施线性实验目的：在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度应符合规定。滴定法实

2、验过程同一人同时取同一批样品，各10片，剪碎，取一片重样品1、样品2、样品3、样品4、样品5，各精密称定，加氯仿25ml回流3次，每次1小时，合并提取液，置水浴上挥干，残渣用L盐酸液5ml使溶解，滤过，滤液置入分液漏斗中，用水10ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，加氯化钠约6g与1mol/L氢氧化钠液5ml,摇匀，用三氯甲烷振摇提取5次（25、20、10、10、10ml）,每次三氯甲烷提取液均用同一饱和氯化钠液5ml振摇洗涤，再依次分别通过同一装有无水硫酸钠1g的脱脂棉层滤过。合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（L）10ml及新沸过的冷水20ml，振摇提取后，分取酸层，氯仿层再用新沸过的冷水

3、洗涤3次，每次10ml，合并酸液与洗涤液，置水浴上加热，除去残留的三氯甲烷，放冷至室温，加甲基红指示液2滴，用氢氧化钠滴定液（L）滴定。每1ml的硫酸液（L）相当于的C15H24N2O2。本品每片含总生物碱以氧化苦参碱(C15H24N2O)计，应为标示量的%。相对偏差（dr%）不得超过%。 以样品滴定过程中消耗氢氧化钠的体积为横坐标，以样品含量为纵坐标，绘制回归方程。可接受标准（相关系数dr%）。 记录：将实验结果记录在*滴定含量测定线性实验记录内，见附录。高效液相 对照品配制：取*一瓶精密称取置25ml容量瓶中、*对照品两瓶精密称取置50ml量瓶中，加乙腈：无水乙醇（85:15）溶解至刻度。

4、分别精密量取氧化苦参碱、苦参碱5ml；氧化苦参碱1ml、苦参碱10ml；氧化苦参碱2ml、苦参碱20ml，分别置25ml容量瓶中，加乙腈：无水乙醇（85:15）至刻度。既得。样品制备：取已剪碎的样品约，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨水，精密加入三氯甲烷25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，加三氯甲烷补足损失重量，滤过，精密吸取续滤液5ml，水浴上挥干，用乙腈-无水乙醇（85:15）定溶至25ml量瓶中，摇匀，用m滤膜滤过，即得。测定法： 分别精密吸取对照品溶液5l与供试品溶液510l，注入高效液相色谱仪，测定，即得。本品每片*，不得少于 mg。 以对照品的吸取量（峰面积）为横坐标，以样

5、品含量（峰面积）为纵坐标，绘制回归方程可接受标准（相关系数RSD2%）。 记录：将实验结果记录在*高效含量测定线性实验记录内，见附录5。重复性实验目的：在规定范围内，取同一批次的样品品，用5个测定结果进行评价，得到的结果RSD应符合要求。滴定法：实验过程取同一批样品，10片，剪碎，取一片重样品1、样品2、样品3、样品4、样品5各精密称定，加氯仿25ml回流3次，每次1小时，合并提取液，置水浴上挥干，残渣用L盐酸液5ml使溶解，滤过，滤液置入分液漏斗中，用水10ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，加氯化钠约6g与1mol/L氢氧化钠液5ml,摇匀，用三氯甲烷振摇提取5次（25、20、10、10

6、、10ml）,每次三氯甲烷提取液均用同一饱和氯化钠液5ml振摇洗涤，再依次分别通过同一装有无水硫酸钠1g的脱脂棉层滤过。合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（L）10ml及新沸过的冷水20ml，振摇提取后，分取酸层，氯仿层再用新沸过的冷水洗涤3次，每次10ml，合并酸液与洗涤液，置水浴上加热，除去残留的三氯甲烷，放冷至室温，加甲基红指示液2滴，用氢氧化钠滴定液（L）滴定。每1ml的硫酸液（L）相当于的C15H24N2O2。本品每片含总生物碱以*%。相对偏差（dr%）不得超过%。可接受标准（相关系数dr%）。 记录：将实验结果记录在*滴定含量测定重复性实验记录内，见附录5。 高效 实验过程 对照品配

7、制：对照品溶液的制备： 取苦参碱、氧化苦参碱对照品母液适量，置同一量瓶中，加乙腈-无水乙醇（85:15）制成每1ml含苦参碱和氧化苦参碱35g的溶液，摇匀，即得。样品制备：取同一批样品10片，剪碎并分别取样品1、样品2、样品3、样品4、样品5约，精密称定，置具塞锥形瓶中，加浓氨水，精密加入三氯甲烷25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，加三氯甲烷补足损失重量，滤过，精密吸取续滤液5ml，水浴上挥干，用乙腈-无水乙醇（85:15）定溶至25ml量瓶中，摇匀，用m滤膜滤过，即得。测定法： 分别精密吸取对照品溶液5l与供试品溶液510l，注入高效液相色谱仪，测定，即得。本品每片含苦参总碱以苦参碱

8、(C15H24N2O)与氧化苦参碱（C15H24N2O2）的总量计，不得少于 mg。可接受标准（相关系数RSD2%）。 记录：将实验结果记录在*高效含量测定重复性实验记录内，见附录5。 中间精密度实验 目的：含量测定中，一个实验室内不同的人、在不同时间（通常是不同天）测定得到的结果RSD应符合要求。 滴定含量 实验过程 两名实验人员分别在不同时间（通常是不同天）各取同一批号苦参膜10片，精密称定，剪碎，各精密称取本品3份（每份约），加氯仿25ml回流3次，每次1小时，合并提取液，置水浴上挥干，残渣用L盐酸液5ml使溶解，滤过，滤液置入分液漏斗中，用水10ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，加

9、氯化钠约6g与1mol/L氢氧化钠液5ml,摇匀，用三氯甲烷振摇提取5次（25、20、10、10、10ml）,每次三氯甲烷提取液均用同一饱和氯化钠液5ml振摇洗涤，再依次分别通过同一装有无水硫酸钠1g的脱脂棉层滤过。合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（L）10ml及新沸过的冷水20ml，振摇提取后，分取酸层，氯仿层再用新沸过的冷水洗涤3次，每次10ml，合并酸液与洗涤液，置水浴上加热，除去残留的三氯甲烷，放冷至室温，加甲基红指示液2滴，用氢氧化钠滴定液（L）滴定。每1ml的硫酸液（L）相当于的C15H24N2O2。 可接受标准（同一人实验结果RSD%；两人间的RSD%）记录：将实验结果记录在*滴

10、定含量测定中间精密实验记录内，见附录5。高效两名实验人员用同一批对照品分别在不同时间（通常是不同天）各取同一批号苦参膜10片，精密称定，剪碎，各精密称取本品3份（每份约），置具塞锥形瓶中，加浓氨水，精密加入三氯甲烷25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，加三氯甲烷补足损失重量，滤过，精密吸取续滤液5ml，水浴上挥干，用乙腈-无水乙醇（85:15）定溶至25ml量瓶中，摇匀，用m滤膜滤过，即得。测定法： 分别精密吸取对照品溶液5l与供试品溶液510l，注入高效液相色谱仪，测定，即得。本品每片含苦参总碱以苦参碱(C15H24N2O)与氧化苦参碱（C15H24N2O2）的总量计，不得少于 mg。

11、可接受标准（同一人实验结果RSD%；两人间的RSD%）。记录：将实验结果记录在*高效含量测定中间精密度实验记录内，见附5。 含量测定准确度实验 目的：含量测定中，用已确定的方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般用回收率（%）表示，得到的结果RSD应符合要求。 实验过程精密称取同一已知含量的供试品9份（每份约），分别置于圆底烧瓶中，分成三组，分别向第一组的每一份供试品中加入浓度为（35g/ml）的氧化苦参碱对照品2 ml；向第二组的每一份供试品中加入浓度为（35g/ml）的氧化苦参碱对照品5ml；向第三组的每一份供试品中加入浓度为（35g/ml）的氧化苦参碱对照品7 ml。加氯仿25ml

12、回流3次，每次1小时，合并提取液，置水浴上挥干，残渣用L盐酸液5ml使溶解，滤过，滤液置入分液漏斗中，用水10ml分次洗涤容器，洗液并入分液漏斗中，加氯化钠约6g与1mol/L氢氧化钠液5ml,摇匀，用三氯甲烷振摇提取5次（25、20、10、10、10ml）,每次三氯甲烷提取液均用同一饱和氯化钠液5ml振摇洗涤，再依次分别通过同一装有无水硫酸钠1g的脱脂棉层滤过。合并三氯甲烷液，精密加硫酸滴定液（L）10ml及新沸过的冷水20ml，振摇提取后，分取酸层，氯仿层再用新沸过的冷水洗涤3次，每次10ml，合并酸液与洗涤液，置水浴上加热，除去残留的三氯甲烷，放冷至室温，加甲基红指示液2滴，用氢氧化钠滴

13、定液（L）滴定。每1ml的硫酸液（L）相当于的C15H24N2O2。 测定法 将测得的总含量减去供试品中已知含量，计算每组的回收率。 可接受标准（实验结果回收率%）。 记录：将实验结果记录在*滴定含量测定准确度实验记录内，见附录8。高效 对照品制备：对照品溶液的制备： 取苦参碱、氧化苦参碱对照品母液适量，置同一量瓶中，加乙腈-无水乙醇（85:15）制成每1ml含苦参碱和35g的溶液，摇匀，即得。 供试品制备：精密称取同一已知含量的供试品9份（每份约），置具塞锥形瓶中，加浓氨水，精密加入三氯甲烷25ml，称定重量，超声处理30分钟，放冷，加三氯甲烷补足损失重量，滤过，精密吸取续滤液5ml，水浴上

14、挥干，用乙腈-无水乙醇（85:15）定溶至25ml量瓶中，摇匀，用m滤膜滤过，即得。分成三组（每组3份样品），分别向第一组的每一份供试品中加入浓度为（每1ml含苦参碱和氧化苦参碱35g的溶液）的对照品2 ml；向第二组的每一份供试品中加入浓度为（每1ml含苦参碱和氧化苦参碱35g的溶液）的对照品5ml；向第三组的每一份供试品中加入浓度为（每1ml含苦参碱和氧化苦参碱35g的溶液）的对照品7 ml。分别精密吸取对照品溶液5l与供试品溶液510l，注入高效液相色谱仪，测定，即得。 测定法 将测得的总含量减去供试品中已知含量，计算每组的回收率。 可接受标准（实验结果回收率%）。 记录：将实验结果记录在*效含量测定准确度实验记录内，见附录8。10 偏差与变更 验证偏差当该方案的某一部分无法实施或实际情况无法达到可接受标准时，需要进行偏差报告。当偏差出现时，首先要进行全面调查以确定该偏差是由什么引起的，之后再确定相应的解决措施。将验证过程中产生的偏差记录在偏差处理单中，并作为验证记录附件。变更控制所有在验证过程中产生的变更都需记录，确保所有的变更得到评估和批准，验证的结果达到预定的目的和要求。将验证过程中产生的变更记录