DB13-T1471-2011黄瓜耐盐性鉴定技术规程

1、ICS 65.020.01B 05DB13河北省地方标准DB13/T 14712011黄瓜耐盐性鉴定技术规程Rules for identifying salt tolerance of cucumber lines2011 - 11 - 15 发布2011 - 11 - 30 实施河北省质量技术监督局发 布DB13/T 14712011I前言本标准依据 GB/T 1.12009 的规定编写。本标准由沧州市质量技术监督局提出。本标准起草单位：天津市农业生物技术研究中心、沧州市农林科学院。本标准主要起草人：张越、刘仲齐、阎旭东。 PAGE 2黄瓜耐盐性鉴定技术规程范围本标准规定了利用叶表皮细胞进

2、行黄瓜耐盐性鉴定的方法及评价指标。本标准适用于黄瓜品种资源和育种材料的耐盐性鉴定及评价。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 4404.1粮食作物种子第 1 部分：禾谷类术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1叶片表皮细胞死亡率指从黄瓜叶片上剥离下来的表皮细胞，浸泡在一定浓度的 NaCl 溶液中胁迫一段时间后，表皮细胞死亡的数量占观察细胞总数的比率。耐盐性鉴定原理用叶表皮细胞的死亡率能快速鉴定黄瓜耐盐潜力。黄瓜的叶表皮细胞在高盐环境中，发生质壁分离，

3、最后导致细胞质膜的破裂。耐盐能力不同的细胞，在盐胁迫环境中发生质膜破裂的程度不同。以染料中性红为指示剂，对黄瓜的叶表皮细胞进行染色，质膜没有破裂的活细胞，其液泡内的微酸性环境使中性红变成樱桃红色。质膜破裂的死细胞不着色。根据着色细胞的多少可以区分耐盐能力不同的黄瓜品种。耐盐性鉴定方法鉴定准备培养器皿的选择选择 72 孔的育苗盘进行育苗，穴孔直径 2.5 cm、深度 3 cm。种子选择选取籽粒饱满、整齐一致的种子，种子的品质应符合 GB 4404.1 标准要求。培养基质的准备选择粒径为 1 mm 的蛭石和优质草炭作为培养基质，蛭石和草炭在试验前 100高温灭菌 2 h。盐溶液的配置将 175.5

4、 g 分析纯 NaCl 溶解在 1 000 ml 去离子水中，配制成 3.0 molL-1 NaCl 溶液。染色剂的配置将 0.3 g 中性红溶解在 1000 ml 去离子水中，配制成 0.03的中性红（3-氨基-6 甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐，分子式 C15H16N4HCl）溶液。鉴定步骤种子的催芽将准备好的种子置于培养箱内催芽，温度 251，催芽时间 16 h24 h。播种待种子发芽后播于装有蛭石：草炭（1:1）的育苗盘中育苗。培养培养温度为昼温 251、夜温 181，培养湿度为 60。盐胁迫及染色处理当黄瓜幼苗长出 2 片真叶时，选取黄瓜幼苗的第一片真叶，剥离叶片下表皮，放在 0.03中性红溶液中染色 10 min，置于浓度为 3.0 molL-1 的 NaCl 溶液中处理 10 min。耐盐性评价叶片表皮细胞死亡率的计算把染色后的叶表皮放在 1010 倍的光学显微镜下观察，用 C5 型 0.5 网形目镜尺在（55）mm2 范围内统计活细胞数量和细胞总数。叶片表皮细胞死亡率的计算公式如下：细胞死亡率（）=（单位面积细胞总数-单位面积活细胞数）/单位面积细胞总数100耐盐性评价根据单位面积叶片