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文档简介

1、基因工程基本过程基因工程（geneticengineering），也叫基因操作、遗传工程，或重组体 DNA技术.它是一项将生物的某个基因通过基因载体运送到另一种生物的活性细胞 ”），从学的方法，在体外将各种来源的遗传物质(同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工合成的 DNA 片段)与载体系统（病毒、细菌质粒或噬菌体）的 DNA体系,使重组基因在细胞内表达，产生特定的基因产物。常用的工具酶DNADNADNARNA核酸末端修饰酶-用于 DNA 和 RNA 的末端修饰主要过程有为四步：一获得目的基因一获得目的基因过程：第一条链。DNAcDNA链。在甲基化酶作用下使 cDNA 甲基化.接头或衔接

2、子连接.cDNA。cDNAcDNA2。人工化学合成法磷酸三酯法、亚磷酸三酯法、固相合成法、自动化合成法等.过程:先用以上方法合成基因 DNA 不同部位的两条链的寡核苷短片段,再退火成DNA火连接起来形较长的片段，再用连接酶连接成完整的基因。PCR Reaction）PCRcDNA二载体的选择与制备1。载体的选择（以质粒为例）载体必须是复制子。具有合适的筛选标记，便于重组子的筛选。具备多克隆位点（MCS，便于外源基因插入。自身分子量较小，拷贝数高。在宿主细胞内稳定性高。应具有很强的启动子，能为大肠杆菌的 RNA 聚合酶所识别应具有阻遏子,使启动子受到控制，只有当诱导时才能进行转录.mRNA所产生

3、的 mRNA 必须具有翻译的起始信号.2.制备有多种分离质粒的方法，如碱裂解法、煮沸裂解法、层析柱过滤法等。目前一般使用碱变性法制备质粒 DNA.这个方法主要包括培育收集细菌菌体，裂解细胞，将质粒 DNA 与染色体 DNA 分开及除去蛋白质和 RNA。pHcccDNA的上清液,最后用乙醇沉淀，获得质粒 DNA。三构建基因表达载体三构建基因表达载体1.用一定的限制酶切割质粒,使其出现一个切口，露出粘性末端.2.用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端.1.用一定的限制酶切割质粒,使其出现一个切口，露出粘性末端.2.用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端.DNADNA（重组质粒）.四目的基因导入受体细胞将目的基因导入植物细胞农杆菌转化法将目的基因导入动物细胞显微注射法将目的基因导入微生物细胞（以大肠杆菌为例）(1）Ca2+DNADNADNA（3)目的基因在受体细胞内，随其繁殖而复制,由于细菌繁殖的速度非常快，在很短的时间内就能获得大量的目的基因。五目的基因的检测与鉴定DNADNA2mRNARNA3.检测目的基因是否翻译成蛋白质检测方法：提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原抗体杂交，若有杂交带,表明目的基因已形成蛋白质产品。基因工程制药实例及意义抗生素类抗生素类PBR322的质粒克隆化所形

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