LCMS及制备HPLC使用教程-课件

1、LCMS及制备HPLC操作教程Zewei WangLCMS及制备HPLC操作教程Zewei Wang流动相的准备样品的准备日常维护常规LCMS操作数据分析注意事项流动相的准备样品的准备日常维护常规LCMS操作数据分析注意事流动相的准备常用流动相：水、乙腈、甲醇常用添加剂：甲酸、乙酸、三氟乙酸；醋酸铵；氨水溶剂必须为HPLC级，超纯水（18 .m）；普通有机溶剂须过滤添加剂须为HPLC级，一般添加0.1%抽滤、超声除气泡滤膜： cancel Instrument turn off spray chamber清洗喷雾室前先关闭喷雾室，待温度降下来后再操作MSD Tun清洗喷雾室，使用Agilent

2、提供的无纺布或棉签擦洗擦洗时请勿碰到喷雾针针尖清洗喷雾室，使用Agilent提供的无纺布或棉签擦洗擦洗时请为节约无纺布，每次擦洗时裁剪一小块使用为节约无纺布，每次擦洗时裁剪一小块使用Checktune前先更改打印机设置，File printer setup Checktune前先更改打印机设置，File prchecktune: MSD Tune OK Tune checktunechecktune: 常规LCMS操作单个样品时，选方法 5-100% Common.M RunControl Sample Info，填好后待压力平稳再点击开始。初始压力100Bar左右，当100% MeCN时，压

3、力50Bar左右。常规LCMS操作单个样品时，选方法 5-100% CommoLCMS及制备HPLC使用教程-课件多个样品连续进样选sequence：AAA.SSequence sequence parameters多个样品连续进样Sequence sequence Table无论是单个样品还是多个，请估算好时间，做完后及时调回Flush模式以节约溶剂和氮气！Sequence sequence Table无论是数据分析数据分析LCMS及制备HPLC使用教程-课件LCMS及制备HPLC使用教程-课件LCMS及制备HPLC使用教程-课件File Extract IonsFile Extract I

4、onsEICEICMS中常见的加合离子Positive：M+H 1M+Na 23M+NH4 18M+K 39Dimer2M+H 12M+Na 232M+NH4 182M+K 39Negative:M-H -1M+Cl- 35.37M+HCOO- 45M+TFA- 113Dimer2M-H -12M+Cl- 35.372M+HCOO- 452M+TFA- 113MS中常见的加合离子Negative:注意事项样品一定要用滤膜过滤，此外样品中最好不要有三乙胺！（三乙胺在LCMS中残留严重），如果含有三乙胺，请先用酸处理下样品再送样。LCMS中的方法请不要随意更改！液相小瓶盖用过2-3次后及时更换新的

5、。样品瓶请勿用洗衣粉、洗洁精等表面活性剂洗涤！清洗用乙醇或甲醇超声清洗。请估算好做样时间，做完样后及时调回Flush的方法以节约溶剂和氮气。若有人排队等待做样就通知下一个人来做样。注意事项样品一定要用滤膜过滤，此外样品中最好不要有三乙胺！（制备HPLC使用教程流动相（水和乙腈）最好抽滤除气泡，再超声和LCMS不同，流动相中可添加非挥发性缓冲盐如磷酸盐、硼酸盐，但用完后一定要用纯水、纯乙腈冲洗体系，防止盐析出造成管路堵塞！（冲洗先用50-50的比例冲洗3 CV，再用5-95冲洗2 CV）样品最好用初始比例的流动相溶解，如不能溶可加入DMSO促溶，不要用纯甲醇或纯乙腈溶解样品！样品浓度一般在20-

6、30 mg/ml由于制备HPLC没有脱气机，使用前一定要purge除去管路气泡制备HPLC使用教程流动相（水和乙腈）最好抽滤除气泡，再超声LCMS及制备HPLC使用教程-课件色谱柱的选择Prep HPLC Column: Waters XTerra Prep MS C18 column, 10 m, 19x 250 mm, CV: 71 mL最好选择与制备HPLC色谱柱相同孔径的分析型色谱柱来摸索分离条件！色谱柱的选择Prep HPLC Column: Waters制备HPLC方法的建立最好先用分析HPLC摸索一下流动相条件最佳：优化出单一恒定的比例（省去平衡时间，样品量大时可节省流动相，缩短时间）其次：直接建立一个梯度，确保冲洗体积有1 CV以上（样品分的很开如两个峰大于1 CV ）如何优化：先走梯度，若A、B两峰在流动相比例为60% B左右分开，则直接选择60% B走。若此时两峰分得更不开，就降低比例如55%、50%直到摸索出最优条件，此条件可以作为分离条件。制备HPLC方法的建立最好先用分析HPLC摸索一下流动相条件Sample： 20mg/mLMobile phase：A, H2O + 0.1% HCOOH; B, ACN. 70%B, 10ml/minColumn: Waters XTerra Prep MS C18 column