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1、等电聚焦（Isoelectric focusing，简称 IEF）是六十年代中期出现的新技术。近年蛋白质分子是典型的两性电解质分子。它在大于其等电点的 pH 环境中解离成带负电荷的阴离子，向电场的正极泳动，在小于其等电点的 pH 环境中解离成带正由荷的阳离子，向电场的负极泳动。这种泳动只有在等于其等电点的 pH 环境中，即蛋白质所带的净电荷为零时才能停止。如果在一个有 pH 梯度的环境中，对各种不同等电点的蛋白白质分子将按照它们各自的等电点大小在 pH 梯度中相对应的位置处进行聚焦，经过一电聚焦的特点就在于它利用了一种称为两性电解质载体的物质在电场中构成连续的 pH基脂肪族化合物， 分子量在

2、3001000 之间。常用的进口两性电解质为瑞典 Pharmacia-LKB 公司生产的Ampholine 和Pharmalyte，价格昂贵。国产的有中国军pHpHpHpIpH的线性就越好。对 Ampholine 两性电解质的要求是缓冲能力强，有良好的导电性，分pH产生pH梯度，当蛋白质样品电泳到凝内某一部位，而此部位的pH值正好等于该电极液的电渗作用而引起正负两极 pH 梯度的漂变。将胶条于701mm0.5ml 0.01M KCl，用微电极测其 pH。 %3班公用）（29.1g 丙烯酰胺和 0.9g 甲叉双丙烯酰胺溶于 H2O，定容至 100ml，交联度为 30 %。入量为 0.5mg/ml

3、 胶液。3.4ml（85%）加H2O500ml500ml2gNaOHH2O500ml500ml456 交联度C 交联度C 100%许H2O，进行水封，以消除弯月面使顶端平坦。胶管垂直聚合约30分钟，聚合完1/32/3加入 500ml 0.1M H3PO4，下槽加入 500ml 0.1M NaOH，淹没各管口和电极，用注射器或滴管吸去管口的气泡。上槽接正极，下槽接负极，开启电泳仪，恒压 160V，聚焦 2 至 3 小时，至电流近于零不再降低时，停止电泳。取下胶管，用H2O 将胶管和两端洗2次，用注射器沿管壁轻轻针头，在转动胶管和内插针头的同时分别向胶管两端注入 H2O 少许，胶条即自行滑出，若不滑出可不清时，可用 pH 试纸鉴定，酸性端为正，碱性端为负。固定后的胶条可在 860 紫外/可见分光光度计上用 280nm 或 238nm 波长作凝胶照由正极至负极的顺序，用镊子和小刀依次将胶条切成 10mm 长的小段，分别置于小

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