动物急性毒性实验报告

生物工程综合实验动物急性毒性实验实验报告集班级 生工1411学号姓名苏州科技大学化学生物与材料工程学院2017年。。精选资料，欢迎下载精选资料，欢迎下载实验室学生守则一、严格遵守实验室各项规章制度和管理措施，服从教师及实验技术人员的指导。5准确地完成实验任务，实事求是地完成实验报告，杜绝弄虚作假。三、严格执行操作规定，爱护仪器设备及工具。凡不按教师的指导擅自操作引起仪器、设备损坏者，应予赔偿。四、爱护实验室公共财物，节约水电、材料和试剂。未经允许不得随便挪动非实验需用的其他仪器，不得随便拆装仪器或将仪器、工具带至室外。五、持实验室的严肃安静，不得大声喧哗、嘻闹，严禁在实验室内抽烟和吃东西。六、严防事故，确保实验室安全，发现异常情况，应及时向有关教师和管理人员报告。七、每次实验结束后，主动整理好仪器设备，归还所借器材，关闭电源、经指导老师许可后，方可离开。预习报告名称名称动物急性毒性实验日期2017.11.27-2017-12.1实验目的和要求：使学生了解毒理学研究中动物实验的常规操作方法和技术；了解和掌握为了测定一如半数致死剂量，生长抑制效应等所需要的方法和步骤。实验材料：活环毛蚓13精选资料，欢迎下载精选资料，欢迎下载。主要步骤：20±275%24h。18cm1000mL备实验确定的剂量，配制系列浓度，取适量倒入培养皿中，以刚好浸没滤纸为宜滤纸实验将清肠后的蚯蚓用去离子水冲洗干净，滤纸吸干体表水分1010保鲜膜封口，解剖针扎孔。培养与观察75±7%;1333lx（12h12hCd2+18hLC50、24hLC50。Cd2+急性毒性试验(l).24hLC50

后，进行蚯蚓急性毒性实验。设置空白对照组，空白对照组用去离子水代替受试物；染毒实验前重复上述（1）步骤的清肠。4（0、

、1/3LC、1/2LC

）进行蚯蚓急性毒性试8

50 50 5024h3条做平行试验，洗净剪取其环带前部分，用磷酸缓冲液洗掉2mL磷酸缓冲液进行研磨，再进行离心（9，00010min，上清液即为粗酶液。SOD4.5mL0.1mol·L-1Tris-HCl（pH=8.2）缓冲液，4.2mL25℃20min25℃3mmolL-10.3m（10-1HCl10mmol·L-1HClHCl溶液25℃速摇匀倒入比色皿（1cm30s325nmA13minA的增值，此即为邻苯三酚的自氧化速率。SODSOD粗酶液（0.2mL，需稀释，蒸馏水减少相应体积（4.2mL3min1。50%算公式如下：精选资料，欢迎下载精选资料，欢迎下载。教师签名：。。精选资料，欢迎下载精选资料，欢迎下载实验报告动物急性毒性实验一、实验目的：使学生了解毒理学研究中动物实验的常规操作方法和技术；了解和掌握为了测定一种未知的环境化学物对有机体是否是安全的，必须进行哪些试验，获得哪些必要的数据；这些试验的基本步骤是什么，试验数据应该如何处理。二、实验原理滤纸接触法毒性实验简单易行，实验时间短，实验成本较低，可对受试物毒性进行初筛。将蚯蚓与湿润的滤纸上的受试物接触，可测定土壤中受试物对蚯蚓的潜在影响。动物机体中有一套有效的抗氧化防御系统（Antioxidantdefense，包括过氧化物歧化酶（Superoxidedismutase,SOD、谷胱甘肽过氧化物酶（Glutathioneperoxidase,GPx、过氧化氢酶（Catalase,CAT）等，它们可分解进入生物体有伤害作用的异源氧化物。由于能反映多种污染物的物标志物的研究热点之一。三、实验材料与方法1活环毛蚓氯化镉，Tris-HCl溶液，邻苯三酚，磷酸缓冲液2、实验仪器：人工气候箱，分光光度计，冷冻离心机，试管13支，移液器，振荡水浴锅，烧杯，研钵。3、实验方法：清肠11cm1000mL（或培养皿，加少量水，以刚浸没滤纸为宜。挑选一定20±275%24h。溶液配制18cm1000mL的剂量，配制系列浓度，取适量倒入培养皿中，以刚好浸没滤纸为宜。滤纸实验将清肠后的蚯蚓用去离子水冲洗干净，滤纸吸干体表水分。1010保鲜膜封口，解剖针扎孔。培养与观察(l).将培养皿置于人工气候箱中培养，设置标准实验条件：温度为20±2℃，75±7%;1333lx（12h12h。20±2℃环境培养。18h、24h1判为死亡。24h24hCd2+18hLC50、24hLC50。Cd2+急性毒性试验(l).在确定蚯蚓的24hLC50后，进行蚯蚓急性毒性实验。设置空白对照组，空白对照组用去离子水代替受试物；染毒实验前重复上述（1）步骤的清肠。(2).在蚯蚓的致死范围内设置4个浓度梯度（0、1/5LC50、1/3LC50、1/2LC50）进行蚯蚓急性毒性试验。每组8条。(3).24h3条做平行试验，洗净剪取其环带前部分，用磷酸缓冲液2mLr•min-1）10min，上清液即为粗酶液。(4).采用改进邻苯三酚自氧化法测定SOD活性。4.5mL0.1mol•L-1Tris-HCl（pH缓冲液，4.2mL25℃20min，25℃3mmolL-10.3mL（10mmol•L-1HCl10mmol•L-1HClHCl溶液2℃恒温水浴锅中水浴，迅速摇匀倒入比色皿（1cm30s325nmA13minA的增值，此即为邻苯三酚的自氧化速率。SODSOD粗酶液（0.2mL，需稀释，蒸馏水减少相应体积（4.2mL3min1。四、实验结果与分析：1、受试物的基本物化性质；实验动物的饲养条件（包括温度、湿度、光照条件等。氯化镉：外观与性状：无色单斜晶体熔点(℃)：568相对密度（水=1：4.05沸点(℃)：96018-22℃，光照，保证湿度2、染毒处理前后蚯蚓外观生长发育变化表（体重、体长、行为等。项目数量（条）总体重（g）(cm)行为

表1Cd2+染毒处理前蚯蚓外观生长发育变化表0(CK)12345110(CK)123451111111113126.106.215.935.826.165.770.550.560.540.530.470.486.747.126.956.687.36.22正常蠕动正常蠕动正常蠕动正常蠕动正常蠕动正常蠕动 Cd2+处理浓度（mgL-1Cd2+处理浓度（mgL-1）项目数量（条）总体重（g）平均体长(cm)行为0(CK)1234511111110405.726.214.474.111.1600.510.560.410.410.2906.436.656.295.364.50正常蠕动蠕动减弱蠕动减弱蠕动减弱蠕动减弱无分析：由表1，2可见除了全部死亡的蚯蚓之外，在体重和体长方面，其余各组的蚯蚓总体重和平均体力旺盛，正常蠕动，Cd2+处理24小时之后，除对照组里的蚯蚓正常蠕动之外，其余各组的蚯蚓的行为活动均受到不同程度的影响，蠕动速度随着Cd2+的浓度升高而逐渐减弱3、致死时各组蚯蚓个体的形态和解剖观察：观察结果主要部位（环状带。精选资料，欢迎下载精选资料，欢迎下载 。。解剖后蚯蚓的形态观察：1213。。精选资料，欢迎下载精选资料，欢迎下载 18常，蠕动正常之外，2-462411862-5加，对照组体表正常，但由于缺乏养分，蠕动速度减慢，成团聚集在一起，2-3状更加明显，且成团聚集，4-5几乎不蠕动，同样成团聚集。4、记录不同受试物浓度对应的死亡情况，以剂量对数为横坐标，死亡百分率为纵坐标作图并求得半数致死浓度LC。50Cd2+处理浓度（mgL-1Cd2+处理浓度（mgL-1）项目0(CK)12345数量（条）111111111312死亡数（条）0000712死亡率（%）000053.8%100%平均死亡数（条）0.275平均死亡率（%）25.6%18hLC=1557.90850Cd2+处理浓度（mgL-1Cd2+处理浓度（mgL-1）项目0(CK)12345数量（条）111111111312死亡数（条）0001912死亡率（%）0009.1%33.3%100%平均死亡数（条）0.318平均死亡率（%）29.7%24hLC=1314.811505、计算并分析Cd2+处理对环毛蚓SOD酶活的影响。邻苯三酚的自氧化速率计算可得A=0.053Cd2+SODSOD酶活

Cd2+处理对环毛蚓SOD酶活的影响Cd2+处理浓度（mgL-1）0(CK)

1/5LC50

1/3LC50

1/2LC5010.0500.1130.1500.19720.0750.0960.1380.18430.0620.1050.1420.201平均酶活性0.0620.1050.1430.194分析：随着Cd2+处理浓度增加，环毛蚓SOD的平均酶活性增加。因为SOD（超氧化物歧化酶）是生物体内重要的抗氧化酶，具有特殊的生理活性，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质，所以随着Cd2+浓度升高，环毛蚓体内代谢有毒物质的速度也越来越快，因此SOD酶活性越来越高。6、蛋白质的测定Cd2+处理浓度（mgL-1）0(CK)1/5LC50 1/3LC501/2LC50体重（g） 0.440.42 0.360.47蛋白浓度(g/L) 1.1581.657 2.1552.654五、结论本次实验的目的在于解毒理学研究中动物实验的常规操作方法和技术，了解测定一种未知的环境化学物对生物体是否是安全的，必须进行哪些试验，获得哪些必要的数据；这些试验的基本步骤是什么，试验数据应该如何处理等等。同时我们也了解了实验动物蚯蚓的生活习性和受试物氯化镉的理化性质，和掌握了急性毒性试验以及测定相关的参数，如半数致死剂量，生长抑制效应等所需要的方法和步骤。通过对蚯蚓染毒前后的性状比较可从表观上观察到重金属对有机体的巨大毒害作用，而通过计算蚯蚓体内消除有毒物质的SOD酶活性，可充分认识到生物体对外来有毒物质的侵害做出的一系列应对措施。近年来，随着人口增加及经济发展，我国面临的土壤环境安全问题越加突出。重金属和石油类的污染，致使生态环境和农业生产受到极大破坏，作为土壤中大型动物蚯蚓的种群与数量同样发生了明显的改变，这次蚯蚓的实验也更加让我们意识到土壤重金属防治迫在眉睫。参考文献[1],[1],周超,刘扣.应用滤纸接触法甄别[BMIM]PF6对赤子爱胜蚓的急性毒性效应[J].广东化工.2009,39(3):39-40武贤莉,黄红琼,杨毅等.除草剂对蚯蚓CAT和SOD活性的影响[J].内江师范学院学报,2011,26(6):39-42.DOI:10.3969/j.issn.1671-1785.2011.06.011.[J].上海交通大学学报(农业科学版),2004,22(2):115-119.DOI:10.3969/j.issn.1671-9964.2004.02.002.[J].境,2006,15(6):1185-1187.DOI:10.3969/j.issn.1674-5906.2006.06.012.赵丽,邱江平,李凤等.铜