生物化学实验1课件

生物化学实验湖北省生物基础课实验示范中心湖北民族学院生物科学与技术学院

田国政

（多媒体课件）实验基本知识与基本操作实验一实验类型基础知识讲授实验学时2学时一实验目的掌握实验室的基本操作技能，包括玻璃器皿、天平、分光光度计、离心机、移液器等仪器的使用，熟悉实验室规则，实验室安全和防护知识，怎样做好实验和实验报告撰写。4．随时保持实验台整洁，仪器、药品摆放整齐。公用试剂用完后，应立即盖严放回原处。勿使试剂、药品洒在实验台面和地上。实验完毕后，将玻璃器皿洗净放好，实验台面打扫干净，填写实验记录本，老师签字后才能离开实验室。5．使用药品、试剂注意节约，仪器使用时，小心仔细，防止损坏，发现故障须及时报告教师，并填写仪器故障登记表后补领。6.离开实验室前应认真检查水、电是否关好，严防发生安全事故。7．强酸、强碱溶液必须倒入指定的废液缸内,用水稀释后排放。废纸屑及其他固体废物倒入指定容器内,不能随意倒入水槽或到处乱扔。8．实验室内一切物品，未经允许，严禁带出室外，借物必须办理登记手续。

9．值日生职责：每次实验课由班长或学习委员负责安排值日生，负责当天实验室的卫生、安全和一切服务性的工作。10.按要求认真完成实验报告。三实验记录与实验报告1实验记录：从实验课开始就要培养严谨科学作风，养成良好习惯。实验条件下观察到的现象应仔细地记录下来，实验中观测的每个结果和数据都应及时如实地直接记在记录本上，记录清楚，以便总结实验完成报告时进行核对和作为查找成败原因的参考依据。如果发现记录的结果有怀疑、遗漏、丢失等，都必须重做实验。2实验报告内容实验结束后，应及时整理和总结实验结果，写出实验报告。实验报告的格式：实验序号，实验名称；（1）目的和要求（2）内容与原理（3）主要仪器及试剂配制（4）操作方法与实验步骤（5）结果与讨论9基本的应急措施（1）吞食时的应急处理方法a为了降低胃中药品的浓度，缓延毒物被人体吸收的速度并保护胃粘膜，可饮食下述任一种东西：如牛奶；打溶的蛋；面粉；淀粉；或土豆泥的悬浮液以及水等。b如果一时弄不到上述东西，可于500mL蒸馏水中，加入约50g活性炭。用前再添加400mL蒸馏水，并把它充分摇动润湿，然后，给患者分次少量吞服。一般10～15g活性炭，大约可吸收1g毒物。（2）吸入时的应急处理方法立刻将患者转移到空气新鲜的地方，解开衣服，放松身体。呼吸能力减弱时，要马上进行人工呼吸（3）沾着皮肤时的应急处理方法用自来水不断淋湿皮肤。一面脱去衣服，一面在皮肤上浇水。不要使用化学解毒剂。（4）进入眼睛时的应急处理方法撑开眼睑，用水洗涤5分钟。不要使用化学解毒剂。2．毛刷的种类（1）试管类：（4）烧杯类（2）量筒类：（5）移液管类（3）三角瓶类：3．玻璃器皿的洗涤（1）能用毛刷刷洗的玻璃器皿的清洗方法（2）不能用毛刷刷洗的玻璃器皿的清洗方法（3）新玻璃器皿的清洗

新购买的玻璃仪器表面常附着有游离的碱性物质，可先用肥皂水（或去污粉）洗刷再用自来水洗净，然后浸泡在l％～2％盐酸溶液中过夜（不少于4h），再用自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2～3次，在100℃～130℃烘箱内烤干备用。（4）量器类玻璃仪器的清洗使用后应立即浸泡于凉水中，勿使物质干涸；然后用流水冲洗，除去附着的试剂、蛋白质等物质。晾干后浸泡在铬酸洗液中4～6h（或过夜），再用自来水充分冲洗，最后用蒸馏水冲洗2～4次，晾干备用。（5）具有传染性标本的容器的清洗如病毒、传染病患者的血清等动污过的容器。应浸泡在杀菌剂（5％煤酚皂溶液）中过夜，进行消毒后再清洗。（6）油污玻璃器皿的清洗4．洗涤液的种类和配制方法（1）铬酸洗液（重铬酸钾-硫酸洗液，简称为洗液）广泛用于玻璃仪器的洗涤。常用的配制方法有下述四种：①取100mL工业浓硫酸置于烧杯内，小心加热，然后小心慢慢加入5g重铬酸钾粉末，边加边搅拌，待全部溶解后冷却，贮于具玻璃塞的细口瓶内。②称取5g重铬酸钾粉末置于250mL烧杯中，加水5mL，尽量使其溶解。慢慢加入浓硫酸100mL，随加随搅拌。冷却后贮存备用。③称取80g重铬酸钾，溶于1000mL自来水中，慢慢加入工业硫酸100mL（边加边用玻璃棒搅动）。④称取200g重铬酸钾，溶于500mL自来水中，慢慢加入工业硫酸500mL（边加边搅拌）。（2）浓盐酸（工业用）：可洗去水垢或某些无机盐沉淀。（3）5％草酸溶液：用数滴硫酸酸化，可洗去高猛酸钾的痕迹。（4）5％～10％磷酸三钠（Na3PO4·12H2O）溶液：可洗涤油污物。（5）30％硝酸溶液：洗涤CO2测定仪器及微量滴管。（6）5％～10％乙二胺四乙酸二钠（EDTA－Na2）溶液：加热煮沸可洗脱玻璃仪器内壁的白色沉淀物。（7）尿素洗涤液：为蛋白质的良好溶剂，适用于洗涤盛蛋白质制剂及血样的容器。（8）酒精与浓硝酸混合液：最适合于洗净滴定管，在滴定管中加入3mL酒精，然后沿管壁慢慢加入4mL浓硝酸（比重1.4），盖住滴定管管口，利用所产生的氧化氮洗净滴定管。5溶液的混匀（P7）玻棒搅拌混匀旋转混匀(3)弹打混匀(4)倒转混匀(5)吸量管混匀（6）转动混匀（7）倾倒混匀（8）甩动混匀（10）电磁搅拌混匀（9）震荡器混匀6过滤（P8）(1)常压过滤（2）减压过滤8普通离心机的使用（P9）高速离心机3500-50000r/min常速离心机3500r/min超速离心机50000r/min以上（1）将离心机置于平稳地面或平稳台面上（2）负荷配重，各对称放置的被分离物之间的重量误差不大于1g（1）检查手柄是否置于慢速位置，开关应拨向“关”的位置，盖与容器室锁紧（2）接通电源，开关拨向“开”位置（3）平稳移动手柄，视转速表指示到达所需转速，一、二分钟后转速稳定开始记时。分离完毕将受柄调回原位，开关拨向“关”。（4）关闭电源。9电子天平的使用（P11）（1）置于稳定的工作台上。（2）调整水平，插好电源，打开开关，预热30min。（3）待天平稳定后，显示“0.00”称量模式。（4）将被称物置秤盘上，即显示该物的质量，待显示器左边“.”熄灭后，即表示称量已稳定。注：去皮重操作即先将容器于秤盘上，天平显示容器质量，按“TARE”键后，显示“0.00¡±，即已去重。置物于容器中，即显示物的重量。（5）关闭电源。称重前必须预热皮和物之和不超过称量范围，否则显示“┈”，表示超重。不要将药品洒到秤盘上，会腐蚀天平。操作时不要用力过大，会影响平衡。注意事项10分光光度计的使用和标准曲线的制作分光光度计的基本依据是朗伯—比耳定律，它是根据相对测量原理工作的，即先选定某一溶剂作为标准溶液，设定其透光率为100%，被测试样的透光率是相对于标准溶液而言的，即让单色光分别通过被测试样和标准溶液，二者能量的比值就是在一定波长下对于被测试样的透光率。白色光源经入射狭缝、反射镜和透光镜后，变成平行光进入棱镜，色散后的单色光经镀铝的反射镜反射后，再经过透镜并聚光于出射狭缝上，狭缝宽度为0.32nm。反射镜和棱镜组装在一可旋转的转盘上并由波长调节器的凸轮所带动，转动波长调节器便可以在出光狭缝后面选择到任一波长的单色光。单色光透过样品吸收池后由一光量调节器调节为适度的光通量，最后被光电电池吸收，转换成电流后由微电计指示，直接读出透光率的值。具体操作1、开机前的检查(/programs/view/-r74bOVWzgI/)

开机前打开样品室盖，检查样品室内是否有物品挡在光路上。光路上有阻挡物将影响仪器的自检，甚至造成仪器故障。

2、接通仪器电源，使仪器预热20分钟.3、用波长选择旋钮设置测试所需的波长(325nm～1000nm)。

4、用〈MODE〉键选择“T”测试方式，将黑体置于光路，按“%T”键，此时显示器显示“000.0”（此步骤可省略）5、比色皿的配对测试

在多个相同型号的洁净的比色皿中加入纯水，将比色皿置于吸收池架中，依次将各比色皿推或拉入光路中，在其中选择“T”值或“A”值相等或相近的几个比色皿以待测试时使用。6、用〈MODE〉键选择合适的测试方式。

7、调零(每变换一次波长都要重新进行调零)

将参比溶液与待测溶液分别倒入比色皿中，把盛有溶液的比色皿放入吸收池架中，盖上样品室盖。将参比溶液拉入光路中，按“0A/100%T”键调0A/100%T，此时显示器显示“BLA”直至显示“100.0”%T（T方式）或“0.000”A（A方式）为止8、测试

调零后，将待测样品推（拉）入光路，这时显示器上显示的值即为待测样品的T值或A值9、测试完毕

关机，切断电源，将比色皿取出洗净，并将比色皿座架及暗箱用软纸擦净。注意事项：

1、必须在开机前检查光路的通畅情况。

2、为了防止光电管疲劳。不测定时必须将比色皿暗箱盖打开，使光路切断，以延长光电管使用寿命。3、拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，不要碰比色皿的透光面，以免沾污。4、比色皿外壁的水用吸水纸吸干，再用擦镜纸擦干净，以保护透光面。5、溶液的吸光度控制在0.2～0.7(吸光度与液层厚度呈正比)。

1．挪动干净玻璃仪器时，勿使手指接触仪器内部。2．量瓶是量器，不要用量瓶作盛器。带有磨口玻璃塞的量瓶等仪器的塞子，不要盖错。带玻璃塞的仪器和玻璃瓶等，如果暂时不使用，要用纸条把瓶塞和瓶口隔开。3．洗净的仪器要放在架上或干净纱布上晾干，不能用抹布擦拭；更不能用抹布擦拭仪器内壁。4．除微生物实验操作要求外，不要用棉花代替橡皮塞或木塞堵瓶口或试管口。5．不要用纸片覆盖烧杯和锥形瓶等。11实验室常识6．不要用滤纸称量药品，更不能用滤纸作记录。7．不要用石蜡封闭精细药品的瓶口，以免掺混。8．标签纸的大小应与容器相称，或用大小相当的白纸，绝对不能用滤纸。标签上要写明物质的名称、规格和浓度、配制的日期及配制人。标签应贴在试剂瓶或烧杯的2／3处，试管等细长形容器则贴在上部。9．使用铅笔写标记时，要在玻璃仪器的磨砂玻璃处。如用玻璃蜡笔或水不溶性油漆笔，则写在玻璃容器的光滑面上。10．取用试剂和标准溶液后，需立即将瓶塞严，放回原处。取出的试剂和标准溶液，如未用尽，切勿倒回瓶内，以免带入杂质。11．凡是发生烟雾、有毒气体和有臭味气体的实验，均应在通风橱内进行。橱门应紧闭，非必要时不能打开。12．用实验动物进行实验时，不许戏弄动物。进行杀死或解