2020届 二轮复习 基因工程和PCR技术课件 (江苏专用)

专题九现代生物科技专题专题九2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)核心1基因工程和PCR技术核心1高考回眸栏目导航核心突破举题固法高考回眸栏目导航核心突破举题固法高考回眸高考回眸平

平胸腺嘧啶(T)

DNA连接

B

A类菌落含有P0

C类菌落未转入质粒

胸腺嘧啶(T)DNA连接BA类菌落含有P0C类菌落未乙、丙

目的基因反向连接

乙、丙目的基因反向连接2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)BclⅠ和HindⅢ

DNA连接

感受

BclⅠ和HindⅢDNA连接感受四环素

引物甲和引物丙

四环素引物甲和引物丙都不能

都不能7

72020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)D

D2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)基因组DNA

5′

使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连

②

⑥

基因组DNA5′使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连

8

13

813pH为8.5，缓冲液为50mmol·L－1Tris－HCl

pH为8.5，缓冲液为50mmol·L－1Tris－H2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)逆转录

cDNA

限制性核酸内切酶

碱基互补配对

变性

引物与模板

GC含量高

②③

逆转录cDNA限制性核酸内切酶碱基互补配对变性引物2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)核心突破核心突破2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)能专一性识别

特定的核苷酸序列

磷酸二酯键断开

恢复

磷酸二酯键

单个脱氧核苷酸

形成新的磷酸二酯键

氢键

黏性末端或平末端

能专一性识别特定的核苷酸序列磷酸二酯键断开恢复磷酸二选择切割位点位于目的基因两端的限制酶

选择切割位点位于目的基因两端的限制酶限制酶一定不能破坏启动子、终止子和复制原点

重组的质粒至少有一个标记基因

限制酶一定不能破坏启动子、终止子和复制原点重组的质粒至少有2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)举题固法举题固法2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)农杆菌转化法

植物组织培养

感受态细胞

含有中间载体②­PrbcS­*T的微生物能在含有卡那霉素的培养基中生长，而不能在含有氨苄青霉素的培养基中生长(或含有中间载体①­PrbcS­*T的微生物能在含有氨苄青霉素的培养基中生长，而不能在含有卡那霉素的培养基中生长)

1.7kb

SphⅠ、BamHⅠ、EcoRⅠ、NotⅠ、XhoⅠ、EcoRⅤ

设计包含NcoⅠ识别序列的引物，然后用PCR技术扩增

农杆菌转化法植物组织培养感受态细胞含2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)启动子

茎尖(或根尖)

农杆

tms、tmr

染色体DNA

SmaⅠ、HindⅢ

放射性同位素标记的tms基因

(DNA－RNA)杂交带

启动子茎尖(或根尖)农杆tms、tmr染色体DNA2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)1

逆转录

便于设计引物

TTT(T)n

1逆转录便于设计引物TTT(T)n含核糖和尿嘧啶(U)(其他合理答案也行)

U—A

限制酶识别

(冰冻的)Ca2＋

含核糖和尿嘧啶(U)(其他合理答案也行)U—A限制酶识别2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)启动子

RNA聚合

PCR

热稳定性DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶或耐高温的DNA聚合酶)

两

15/16

三

加热至90～95℃

TaqDNA聚合酶热稳定性高，而陆地棉DNA聚合酶在高温下会失活

启动子RNA聚合PCR热稳定性DNA聚合酶(TaqDNClaⅠ

DNA连接

A

D

目的基因或质粒自身连接，并确保目的基因和质粒的正向连接

T－DNA

目的基因(融合基因)、终止子、标记基因(四环素抗性基因)

四环素

ClaⅠDNA连接AD目的基因或质粒自身连接，并确利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞

染色体的DNA

植物组织培养

抗原—抗体杂交

利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞染色体的DNA植物组织培2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)Thankyouforwatching

Thankyouforwatching专题九现代生物科技专题专题九2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)核心1基因工程和PCR技术核心1高考回眸栏目导航核心突破举题固法高考回眸栏目导航核心突破举题固法高考回眸高考回眸平

平胸腺嘧啶(T)

DNA连接

B

A类菌落含有P0

C类菌落未转入质粒

胸腺嘧啶(T)DNA连接BA类菌落含有P0C类菌落未乙、丙

目的基因反向连接

乙、丙目的基因反向连接2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)BclⅠ和HindⅢ

DNA连接

感受

BclⅠ和HindⅢDNA连接感受四环素

引物甲和引物丙

四环素引物甲和引物丙都不能

都不能7

72020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)D

D2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)基因组DNA

5′

使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连

②

⑥

基因组DNA5′使DNA片段能定向插入表达载体，减少自连

8

13

813pH为8.5，缓冲液为50mmol·L－1Tris－HCl

pH为8.5，缓冲液为50mmol·L－1Tris－H2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)逆转录

cDNA

限制性核酸内切酶

碱基互补配对

变性

引物与模板

GC含量高

②③

逆转录cDNA限制性核酸内切酶碱基互补配对变性引物2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)核心突破核心突破2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)能专一性识别

特定的核苷酸序列

磷酸二酯键断开

恢复

磷酸二酯键

单个脱氧核苷酸

形成新的磷酸二酯键

氢键

黏性末端或平末端

能专一性识别特定的核苷酸序列磷酸二酯键断开恢复磷酸二选择切割位点位于目的基因两端的限制酶

选择切割位点位于目的基因两端的限制酶限制酶一定不能破坏启动子、终止子和复制原点

重组的质粒至少有一个标记基因

限制酶一定不能破坏启动子、终止子和复制原点重组的质粒至少有2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)举题固法举题固法2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)农杆菌转化法

植物组织培养

感受态细胞

含有中间载体②­PrbcS­*T的微生物能在含有卡那霉素的培养基中生长，而不能在含有氨苄青霉素的培养基中生长(或含有中间载体①­PrbcS­*T的微生物能在含有氨苄青霉素的培养基中生长，而不能在含有卡那霉素的培养基中生长)

1.7kb

SphⅠ、BamHⅠ、EcoRⅠ、NotⅠ、XhoⅠ、EcoRⅤ

设计包含NcoⅠ识别序列的引物，然后用PCR技术扩增

农杆菌转化法植物组织培养感受态细胞含2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)启动子

茎尖(或根尖)

农杆

tms、tmr

染色体DNA

SmaⅠ、HindⅢ

放射性同位素标记的tms基因

(DNA－RNA)杂交带

启动子茎尖(或根尖)农杆tms、tmr染色体DNA2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)1

逆转录

便于设计引物

TTT(T)n

1逆转录便于设计引物TTT(T)n含核糖和尿嘧啶(U)(其他合理答案也行)

U—A

限制酶识别

(冰冻的)Ca2＋

含核糖和尿嘧啶(U)(其他合理答案也行)U—A限制酶识别2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)2020届二轮复习基因工程和PCR技术课件(江苏专用)启动子

RNA聚合

PCR

热稳定性DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶或耐高温的DNA聚合酶)

两

15/16

三

加热至90～95℃

TaqDNA聚合酶热稳定性高，而陆地棉DNA聚合酶在高温下会失活

启动子RNA聚合PCR热稳定性DNA聚合酶(TaqDNClaⅠ

DNA连接

A

D