DB37-T 3690.4 -2020液体菌种制备技术规程 第4部分：灵芝

ICS65.020.20CCSICS65.020.20CCSB05山 东 省 地 方 标 准DB37/T3690.4—2020液体菌种制备技术规程第4部分：灵芝Technicalspecificationsforthepreparationofliquidspawn—Part4：Ganodermalingzhi2020-12-042020-12-042021-01-01山东省市场监督管理局发布目 次前言 II112范引文件 13语定义 14本求 24.1工人卫要求 24.2场要求 24.3生车要求 25施备 25.1基设施 25.2基设与具 26产术 36.1工流程 36.2培基 36.3母制作 3摇菌制作 3发罐体种作 4768产案 6附录A（范）灵液体种产录项 7前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件是DB37/T3690《液体菌种制备技术规程》的第4部分。DB37/T3690已经发布了以下部分：——第1部分：香菇；——第2部分：黑木耳；34本文件主要起草人：高霞、王庆武、赵淑芳、崔晓、高中强、高瑞杰、孙振福、丛倩倩、马化彬、李秀梅、司元明、唐丽娜、张燕、兰玉菲、安秀荣。液体菌种制备技术规程第4部分：灵芝范围本文件适用于灵芝液体菌种的制备。（GB150.1压力容器第1部分：通用要求GB4789.28食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求GB5749生活饮用水卫生标准GB50073洁净厂房设计规范NY/T528食用菌菌种生产技术规程NY/T1742食用菌菌种通用技术要求3术语和定义GB50073洁净厂房设计规范NY/T528食用菌菌种生产技术规程NY/T1742食用菌菌种通用技术要求3术语和定义GB/T12728界定的术语和定义适用于本文件。3.1食用菌液体菌种发酵罐ediblemushroomliquidspawnfermenter3.2罐压jarpressure在液体菌种发酵制备过程中发酵罐内保持的空气压力（表压）。注：单位为MPa。3.3通气量ventilationvolume在液体菌种培养过程中发酵罐体积与每分钟通入发酵罐中无菌空气体积的比例。注：用V/V（发酵罐体积/通入空气体积）表示。3.4接种量inoculationamount液体菌种体积与培养基体积的比例。注：用百分数表示。3.5液体菌种菌龄periodofliquidspawnrunning液体菌种接入培养基开始计算的液体菌种培养时间。3.6发酵罐空消emptyfermentersterilization对尚未加水投料的空发酵罐进行高压灭菌。3.7发酵罐实消fermentersterilization对投料后的发酵罐进行高压蒸汽灭菌。3.8空气过滤器airfilter能对食用菌液体菌种发酵罐所用空气进行滤除杂菌和其他杂质，达到无菌洁净要求的设备。3.9摇瓶液体菌种liquidspawninshakeflask装至玻璃菌种瓶内在磁力搅拌器或恒温摇床上培养的液体菌种。3.10终止pHinitialpHvalueofmedium液体菌种达到放灌指标时的培养基pH。4基本要求工作人员应保持个人卫生，进生产车间前须洗手、消毒，应穿戴经消毒处理的工作服、口罩、鞋、帽等。应符合NY/T528的环境卫生要求，场地开阔、路面硬化。NY/T528GB500735设施设备（或GB150.1工艺流程见图1。图1灵芝液体菌种生产工艺流程培养基马铃薯20040煮汁20g/L3g/L1g/L、硫酸镁0.5g/L、琼脂20g/L，pH液体菌种培养基摇瓶菌种培养基葡萄糖20g/L、蛋白胨3g/L、牛肉膏3g/L1g/L0.5g/L、维生素B15mg/L，pH发酵菌种培养基宜选用以下配方，且生产用水应符合GB5749的要求：20g/L3g/L1g/L0.5g/LB15mg/L、0.3g/L，pH15g/L20g/L2g/L2g/L1g/L0.3g/L，pH10g/L10g/L3g/L3g/L2g/L、硫酸1g/L0.3g/L，pH6.3母种制作母种制作应符合NY/T528的要求，母种质量应符合NY/T1742的要求。6.4摇瓶菌种制作按液体培养基配方，称取原料，加水搅拌至完全溶解，定容。50%～60MPa～0.13MPa20min～30min液体培养基冷却至室温，无菌条件下，挑取7～8块（2～3）mm×（2～3）mm的母种菌块接入摇瓶2425℃～840rmi～10r/mn4～650mg/mL发酵罐初次使用、出现杂菌、长期置放、更换品种等情况出现其一时，应进行空消。蒸汽压力0.14MPa40min按液体培养基配方，称取原料，加水搅拌至完全溶解，定容。上罐70～801min～2min，200.05MPa开排气阀降压至0MPa，关闭排气阀继续升压至0.13MPa～0.14MPa；同时，待发酵罐罐内压力达到0.05MPa0MPa0.11MPa～0.12MPa50min～60min冷却灭菌结束，关闭加热棒电源、空气过滤器灭菌阀门，缓慢打开夹套排气阀降压至0MPa0.05MPa750.03MPa～0.0528接种6.5.8.2理化性状理化指标应符合表2的规定。6.5.8.2理化性状理化指标应符合表2的规定。表2发酵罐液体菌种理化指标通过肉眼及显微镜观察菌丝体形态。GB4789.28PDA28℃～30hGB4789.2830～3724h～48h950.010.5～1.0750.02MPa～0.03MPa25℃～285d～7感官指标要求应符合表1的规定。表1发酵罐液体菌种感官要求项目要求菌液色泽菌丝体呈白色，滤液呈淡黄色菌液气味有灵芝液体菌种培养时特有的气味，无异味菌液形态菌液澄清透明不浑浊，稍粘稠；菌丝体密集、均匀悬浮于液体中不分层菌种微观菌丝粗壮、分枝密度高、有隔膜，可见锁状联合，无杂菌项目要求终止pH3.6～5.5（m/L≥50pH取样用pH计或pH试纸测定菌液酸碱度。/