药物分析 实验2 药物中特殊杂质的检查

【实验题目】药物中特殊杂质的检查【实验目的】掌握阿司匹林肠溶片、贝诺酯中特殊杂质检查的基本原理和方法。掌握薄层色谱法在药物杂质检查中的应用。掌握薄层色谱法的基本操作。【实验原理】一阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查生产过程中乙酰化不完全或储藏过程中水解均可引入游离水杨酸，检查的原理是利用水杨酸可在弱酸性溶液中与高铁盐反应呈紫堇色（课本上的公式），而阿司匹林结构中无游离酚羟基，不发生该反应，因而对杂质的检出无干扰。通过与一定量水杨酸对照液生成的色泽比较，从而控制游离水杨酸的限量。二贝诺酯中有关物质的检查薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法，它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同，使在流动相（溶剂）流过固定相（吸附剂）的过程中，连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附，从而达到各成分的互相分离的目的。例如用硅胶和氧化铝作支持剂，其主要原理是吸附力与分配系数的不同，使混合物得以分离当溶剂沿着吸附剂移动时，带着样品中的各组分一起移动，同时发生连续吸附与解吸作用以及反复分配作用。由于各组分在溶剂中的溶解度不同，以及吸附剂对它们的吸附能力的差异，最终将混合物分离成一系列斑点。如作为标准的化合物在层析薄板上一起展开，则可以根据这些已知化合物的比移值对各斑点的组分进行鉴定，同时也可以进一步采用某些方法加以定量。【实验仪器】50ml纳氏比色管、50ml量瓶、移液管、点样毛细管、玻璃板、研钵、研杵、量筒、胶头滴管、吹风机、展开槽、紫外灯、毛细点样管等。【实验试药】一阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查阿司匹林肠溶片（厂家、批号）、稀硫酸铁铵溶液、0.01％水杨酸溶液、0.05％酒石酸溶液、乙醇（浓度？）、纯化水等。二贝诺酯中有关物质的检查硅胶GF25、0.5%羧甲基纤维素钠水溶液、40.0mg/ml贝诺酯溶液、0.4mg/m1贝诺酯溶液、80^g/m1对乙酰氨基酚、无水乙醇、展开剂（二氯甲烷-乙醚-冰醋酸=80：15：4）、纯化水等。【实验操作和现象】一阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查取本品5片，研细，用乙醇15ml分次研磨，并移入50ml量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻度，摇匀，立即过滤，精密量取滤液3ml,置50ml纳氏比色管中，用水稀释至50ml,立即加新制的稀硫酸铁铵溶液（取1mol/L盐酸溶液1ml,加硫酸铁铵指示液2ml后再加水适量使成100ml）3ml,摇匀，30秒钟内如显色，与对照液（精密量取0.01%水杨酸溶液4.5ml,加乙醇3ml，0.05%酒石酸溶液1ml,用水稀释至50ml,再加上述新制的稀硫酸铁铵溶液3ml,摇匀）比较，不得更深。实验现象：供试品所呈紫堇色比对照品浅。二贝诺酯中有关物质的检查薄层板的制备：取硅胶GF2g,加0.5%羧甲基纤维素钠水溶液6〜7ml调成糊状，均匀涂布于光滑、平254整、洁净的玻璃板（5X15cm）上，置水平台上晾干，在110^烘0.5小时，置干燥器中备用。操作：取贝诺酯原料药，加氯仿-甲醇（9:1）制成每1ml中含40.0mg的溶液，作为供试品溶液；精密称取本品与对乙酰氨基酚适量，备加氯仿-甲醇（9：1）制成每1ml中含本品0.4mg，与对乙酰氨基酚80丛g的溶液，作为对照溶液（1）、（2）。吸取上述三种溶液各10|±l,分别点同一硅胶GF薄层板上，以254二氯甲烷-乙醚-冰醋酸（80：15：4）为展开剂，展开后，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品溶液如显杂质斑点不得多于4个，与对照溶液（2）相同位置上所显的斑点比较，不得更深；如显其他杂质斑点，比主斑点位置稍高的杂质斑点，与对照溶液（1）所显的主斑点比较，不得更深。实验现象：（画个图或者搜个图）【实验结论】？厂家生产的批号为？的阿司匹林肠溶片中的游离水杨酸杂质检查合格。贝诺酯中有关物质（对乙酰氨基酚）的检查合格。（不确定是不是这样写）【注意事项】在阿司匹林中游离水杨酸的检查中，制备供试品溶液所用的比色管须经干燥后使用，且供试品须用乙醇溶解后才可加水稀释至刻度，否则供试品难以溶解。游离水杨酸检查时，供试品溶液要临用现配，避免阿司匹林水解造成的误差。进行水杨酸检查时，应在中性或弱酸性溶液（pH4~6）中进行。若在强酸性溶液中，生成的紫堇色配合物会分解褪色。点样时宜分次点加，每次点加后，待其自然干燥。点样基线距底边2.0cm,样点一般为圆点，直径2~4mm,点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般约为1.5cm〜2.0cm。不要划线，以免破坏硅胶表面，毛细管轻触表面，不要捅破硅胶。思考题】简要说明以上杂质检查项目的原理和方法。见实验原理。简要说明薄层色谱法在药物杂质检查中的应用。有关物质检查通常采用色谱法，可根据有关物质的性质选用专属性好，灵敏度高的薄层色谱，高效液相色谱（HPLC）及气相色谱（GC）法。薄层色谱法设备简单，操作简便，但因影响重现性和精密度的因素较多，可用作一般有关物质检查，而对于要求高的杂质，则无法满足要求。对于此种情况，则可以采用反相薄层色谱法进行测定。计算杂质限量。阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的限量=0-01^/100mLx4-5mLX100%=1.5%5X1OOX1O-39X^贝诺酯中对乙酰氨基酚杂质限量=8°X1°-3"9/问X1°竝X100%=0.2%40卩9/卩5X10“厶【讨论】什么是杂质：①有毒副作用的物质（如砷盐）；②本身无毒副作用，但影响药物的稳定性和疗效的物质（如铁盐、硒化物）；③本身无毒副作用，也不影响药物的稳定性和疗效，但影响药物的科学管理的物质（信号杂质硫酸盐、氯化物）。杂质的来源：①生产中引入：未反应原料、中间体、副产物、降解产物、催化剂、金属器皿；②贮藏过程中产生：水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解、发霉。杂质的分类：①一般杂质：氯化物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、水分、易炭化物、炽灼残渣、有机溶剂残留等（收载在15药典四部通则0800）;②特殊杂质：某一个或某一类药物生产或贮藏过程引入的杂质（收载在正文项下）。5.展开剂中冰醋酸的作用薄层色谱是样品与硅胶之间的吸附/解吸附的过程，如果硅胶对样品组分的吸附过于强烈或者过载，就会使得样品在硅胶中的停留时间分布范围较宽，从而造成拖尾。吸附主要是硅胶中的羟基与样品中的强极性基团之间的作用。例如分离羧酸类样品时拖尾是由于硅胶羟基和样品羧基之间较强的氢键作用使其吸附过强；分离碱性物质如生物碱时拖尾则是由于硅胶本身的硅羟基具有微酸性，可以与碱性化合物发生作用。因此需要更强的溶剂系统来解吸附，因此对于羧酸类化合物，需要醋酸或者甲酸来加强洗脱极性；另外，羧酸的电离也会造成拖尾，因此加入醋酸或者甲酸抑制电离，使得薄层点比较圆。同理，对于碱性物质，也需要加碱（通常是三乙胺、二乙胺或者氨水）来加强洗脱极性和抑制电离。也可以制成碱性板（铺板时用NaOH代替水）或酸性板。产生拖尾最主要的原因是板的酸碱性与所要分离物质的性质，另外硅胶板的质量、水分、电样量、展开剂的适用性、板的预处理如预饱和等因素都会产生一定影响。解决方法分别为抑制解离（在展开剂中加入二乙胺，氨蒸气饱或加入1％的乙酸（蒸汽饱和）；适当活化；电样量不过大，展开剂兼容性好等。/r/