1微生物的实验室培养课件-高二下学期生物人教版选修1

课题1

微生物的实验室培养微生物

指形体微小（小于0.1mm），结构简单，在适宜环境中能迅速生长繁殖，易变异，通常要借助显微镜才能看清楚的生物。大约有10万种。微生物病毒原核生物真菌（酵母菌、霉菌、大型真菌等）原生生物（草履虫、变形虫等）培养基1.按物理状态2.按功能3.按成分

人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质——培养基。固体培养基：琼脂固体培养基液体培养基半固体培养基选择培养基鉴别培养基天然培养基合成培养基

不同微生物的培养基配方不同，一般都含有水、碳源、氮源和无机盐等营养物质。另外还需要满足微生物生长对PH、特殊营养物质、氧气等要求。乳酸杆菌菌落添加维生素霉菌菌落PH为酸性大肠杆菌菌落PH为中性或微碱性皿底皿盖琼脂固体培养基

实验室最常用的培养基之一——琼脂固体培养基。

琼脂的特点：一种多糖，具有凝固性，稳定性等物理化学性质，可用作增稠剂，凝固剂，悬浮剂，乳化剂，保鲜剂和稳定剂。拓展鉴别培养基：加入某种指示剂，使培养后发生某种变化，区别不同种类的微生物。(P26页)选择培养基：加入某种化学物质，允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长。(P22页)选择培养基和鉴别培养基伊红美蓝培养基大肠杆菌菌落选择培养基①用的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌。②用的培养基:分离金黄色葡萄球菌。③用培养基:分离固氮菌。④用培养基:分离自养型微生物。加入青霉素加入高浓度食盐不加氮源的无氮不加含碳有机物的无碳酵母菌菌落加入青霉素金黄色葡萄球菌菌落加入高浓度食盐天然培养基：指利用动、植物或微生物体包括其提取物制成的培养基。合成培养基：准确称量的高纯度化学试剂与蒸馏水配制而成的，其所含的成分以及他们的量都是确切可知的。天然培养基和合成培养基菌落1.概念：由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。2.菌落特征因种而异

菌落特征：菌落形状、大小、隆起程度、颜色等(P24页)无菌技术获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。消毒：指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。灭菌：指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子。芽孢：有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。拓展孢子：细菌、真菌等低等植物产生的一种有繁殖作用的生殖细胞。能直接发育成新个体。①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min②巴氏消毒法：70-75℃煮30min或80℃煮15min③化学药剂消毒法：70%酒精消毒皮肤；氯气消毒水源④紫外线消毒法：破坏微生物细胞中的DNA为加强消毒效果，在照射前喷洒消毒液（石碳酸或煤酚皂溶液）。消毒方法①灼烧灭菌：酒精灯外焰灭菌方法②干热灭菌：160-170℃加热1-2h。③高压蒸汽灭菌：100kPa、121℃维持15-30min.

（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：准确称取各种成分牛肉膏、称量纸、少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl溶解→琼脂熔化→补水定容4.灭菌：5.倒平板：培养基（高压蒸汽灭菌）、培养皿（干热灭菌）实验操作冷却，在酒精灯火焰附近倒平板100ml牛肉膏蛋白胨固体培养基的营养成分组分用量提供的营养牛肉膏0.5g碳源、氮源、维生素、磷酸盐蛋白胨1g碳源、氮源、维生素、NaCl0.5g无机盐琼脂2g不能利用，凝固剂水定容100ml

（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：依配方计算各成分的用量2.称量：3.溶化：准确称取各种成分牛肉膏、称量纸和少量水加热溶解→取纸→蛋白胨、NaCl溶解→琼脂熔化→定容100ml4.灭菌：5.倒平板：培养基（高压蒸汽灭菌）、培养皿（干热灭菌）实验操作冷却，在酒精灯火焰附近倒平板1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？讨论

可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？（平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠）既可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染，又可以避免培养基表面的水分过快挥发。不能。空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。

（二）纯化大肠杆菌1.微生物的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法（斜面接种、穿刺接种）2.微生物的接种技术核心是防止杂菌的污染，保证培养物的纯度。烧环冷环管口过火沾取菌液管口过火

划线(平行线)烧环冷却重复划线

倒置培养(对照未接种培养基)平板划线操作检测在制备培养基的过程中是否被杂菌污染。12345平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。讨论1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？①第一步烧环：避免接种环上可能存在的微生物污染培养物。②每次划线前烧环：杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下次划线时接种环上的菌种来源于上次划线的末端，以便得到菌落。③结束烧环：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？末端细菌比线条起始处少，使细菌数目随着划线次数的增加而减少，最终得到菌落。系列稀释操作注意：移液管需要灭菌，在酒精灯火焰附近操作。酒精消毒滴加菌液燃烧冷却涂布菌液稀释涂布操作讨论涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？

酒精灯与培养皿的距离要合适，吸管头不要接触任何其他物体等。稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面进行