结核病实验室诊断课件

结核病实验室诊断结核病实验室诊断结核病基本情况：（1）结核病是一个古老的疾病，至今仍然严重威胁着人类健康。近十几年来，由于结核菌的耐药性、HIV/TB双重感染移民（流动人口）问题使全球结核病控制工作面临严重挑战。结核病基本情况：（1）结核病是一个古老的疾病2结核病实验室诊断课件3结核病实验室诊断课件4结核病实验室诊断课件5结核病实验室诊断课件6结核病细菌学检查的重要作用是结核病临床诊断和治疗的重要依据是直接发现病原菌的诊断方法，比影象学、免疫学等检查具有更高的特异性是确定、调整化疗方案的重要依据是国家结核病控制规划（NTP）的重要组成部分是发现传染源的最主要途径和手段是考核疗效、评价防治效果的可靠指标结核病细菌学检查的重要作用7分枝杆菌生物学基础分枝杆菌8概述结核分枝杆菌是1882年郭霍（RobertKoch）从肺结核病人痰标本中发现。是人类结核病的主要病原菌。概述结核分枝杆菌是1882年郭霍（RobertKoch9分类结核分枝杆菌属原核生物界、厚壁菌门、裂植菌纲、放线菌目、分枝杆菌科的分枝杆菌属，分枝杆菌属种类甚多，目前已命名的有200多种，一般可分为缓慢生长和快速生长两大类。分类结核分枝杆菌属原核生物界、厚壁菌门、裂植菌纲、放线菌目、10概述分枝杆菌呈分支状生长，营养要求比普通细菌高，是一种生长缓慢的革兰氏阳性杆菌。经石炭酸复红染液着色后，不被盐酸酒精脱色，故称此类细菌为抗酸菌。

概述分枝杆菌呈分支状生长，营养要求比普通细菌高，是一11分枝杆菌分类分枝杆菌分类12结核分枝杆菌结构结核分枝杆菌组成：细胞壁、细胞膜、细胞质、核物质结核分枝杆菌结构结核分枝杆菌组成：13细胞壁厚度为10~35nm，较一般细菌的细胞壁厚。含有大量脂类，具有坚韧性和疏水性。功能：保护细菌的固有形态抵抗酸碱物质及宿主细胞对细菌的破坏和杀伤如果细胞壁有缺陷，细菌只能在高渗环境下生存，则称此类细菌为L型细菌。细胞壁厚度为10~35nm，较一般细菌的细胞壁厚。14细胞膜细胞壁内层围绕于细胞质外的富于弹性的半透膜。主要成分是脂类（磷脂）和蛋白质。功能：细菌与外界环境进行物质交换在细胞内一系列代谢活动中起重要作用细胞膜细胞壁内层围绕于细胞质外的富于弹性的半透膜。15

菌体成分脂类多糖蛋白质核酸盐类菌体成分脂类16

脂类（1）结核菌体脂类含量比其他细菌高，占细胞壁干重的60％，是引起结核病特征性变化与表现的物质基础。脂质含量与细菌毒力相关，毒力强的Mtb含脂最高。脂质只要有磷脂、脂肪酸、蜡质等成分，多与蛋白质、多糖以结合形式存在。脂类（1）结核菌体脂类含量比其他细菌高，17脂类（2）磷脂：刺激机体单核细胞增生，增强菌体成分诱导机体致敏作用。索状因子：与Mtb毒力密切相关。硫脂蜡质：占脂质总量48％，分A、B、C、D。结核菌酸：促进机体形成结核结节。分支菌酸：为结核菌菌体的重要成分，与结核菌的抗酸性有关。脂类（2）磷脂：刺激机体单核细胞增生，增强菌体成分诱导机18多糖由阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖、甘露聚糖和葡聚糖等组成。多以脂类、蛋白质和核酸等结合形式存在。是免疫反应的重要抗原物质。多糖由阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖、甘露聚糖和葡聚糖等19蛋白质Mtb含多种蛋白质组分，由不同菌体蛋白及活菌在分泌过程中分泌于细胞外的多种蛋白组成。结核菌的主要抗原性物质。结核菌素、PPD为多种蛋白的复合抗原，可刺激机体免疫应答。

蛋白质Mtb含多种蛋白质组分，由不同菌体蛋白及活菌在分泌20核酸RNA含量比DNA高4－5倍。RNA分布于细胞质内，DNA存在于细胞核物质中。DNA是遗传物质，将遗传信息传给子代，并指导RNA的合成。RNA是蛋白质和其他细胞成分合成必须的物质。核酸RNA含量比DNA高4－5倍。21结核分枝杆菌基因组结核分枝杆菌DNA中约含4000个基因组。结核分枝杆菌为2.5×109道尔顿,卡介苗株为2.8×109道尔顿结核分枝杆菌H37Rv基因组全序列共含4.4×106碱基对，平均鸟嘌呤+胞嘧啶含量（G＋C）为65.6％。结核分枝杆菌基因组结核分枝杆菌DNA中约含4000个基因组。22盐类钙、钾、镁、铁、磷等，约占菌体成分的6％。盐类钙、钾、镁、铁、磷等，约占菌体成分的6％。23

营养与发育结核菌是需氧菌，但在含有比较低氧的环境下也能生存，比如骨结核，淋巴结核。在少量二氧化碳的环境中生长的也很好。结核菌生长的适宜温度和人体相近为370C结核菌生长所必需的元素有氧、碳、氮、氢、磷、钾、镁等。

营养与发育结核菌是需氧菌，但在含有比较低氧的环境24结核分枝杆菌形态结核菌是兼性需氧菌，无鞭毛、荚膜，无运动能力；形状：0.3-0.6×1-4微米的细长杆状，直或稍弯，镜下常堆积成团、成束、排列杂乱无章，也有呈串珠样、链状、索状者。革兰氏染色阳性，萋-尼氏染色镜下的抗酸杆菌为淡兰色背景下的红色或粉红色细长杆菌。荧光染色镜下的抗酸杆菌在暗色背景下呈黄绿色或橙色荧光。结核分枝杆菌形态结核菌是兼性需氧菌，无鞭毛、荚膜，无运动能力25抗酸性是分枝杆菌的重要特征。其化学基础是分枝菌属的细胞壁脂质含量较高，并含有大量分枝菌酸。抗酸性与细菌细胞壁的完整性关系密切，若菌体自溶（如标本保存时间过长、温度过高）、结核菌的异型相（如：L-型菌、干酪或脓液中的结核菌）可能失去抗酸性。抗酸性抗酸性是分枝杆菌的重要特征。其化学基础是分枝菌属的细胞壁脂质26生长特性生长适宜温度37C，PH6.8-7.2。营养要求较高。在常用的罗氏（Lowenstein-Jensen）培养基上生长的菌落粗糙、凸起、致密，有表面皱折，呈颗粒、结节或菜花样，乳白色或米色，不透明。结核菌生长缓慢，在一般培养基上分裂一代需要10多小时，根据接种菌量的多少，一般10-30天肉眼可见菌落生长。生长特性生长适宜温度37C，PH6.8-7.2。营养要27

结核病的诊断

诊断发展阶段：经验性、X线影像，細菌学诊断、免疫学（细胞、体液）诊断、分子生物学诊断。控制结核病的流行，诊断是所有措施中最为关键的一步。结核病的诊断28实验室检查结核病实验室检查包括细菌学检查以及近年来在分子生物学和免疫学等领域建立的检测新技术。细菌学检查是结核病确诊和治疗的主要依据。检测新技术为可疑结核病患者的早期诊断与合理治疗带来新的希望。实验室检查结核病实验室检查包括细菌学检查以及近年来在分子生物29结核病细菌学诊断结核病细菌学诊断30结核病细菌实验室布局原则1、结核病细菌学检查要有独立的实验室，不得与其他实验室混用，最好为P3级实验室；2、培养基制备、洗刷等相对洁净的操作与涂片镜检、培养前处理、药敏试验等污染操作要有独立分开的场所，最好分别在专用的房间进行；3、基层只从事涂片镜检的实验室只拥有一间独立房舍的情况下，相对洁净区（镜检区、登记区）与污染区（涂片、染色区）要有明显区分。结核病细菌实验室布局原则1、结核病细菌学检查要有独立的实验室31基层镜实验室布局范例染色池收集标本用的桌子工作台采光用窗户（固定）实验室门试剂柜显微镜记录用的桌子可以开关的窗户基层镜实验室布局范例染色池收集标本工作台采实验室门试显微镜记32废弃标本和污染物的处理废弃标本、痰盒和污染物均须经高压蒸汽灭菌后方能丢弃或清洗；如需焚烧处理，须置于焚烧炉内彻底焚化。焚化不彻底或暴露焚烧是危险的；专业化处理试验操作工作面应以3%石炭酸或其他可靠的消毒液擦拭，再用紫外线灭菌灯照射2小时废弃标本和污染物的处理33主要方法1、痰涂片抗酸染色、镜检技术2、分枝杆菌分离培养技术3、分枝杆菌快速培养技术4、药物敏感性实验技术5、分枝杆菌菌种鉴定技术主要方法1、痰涂片抗酸染色、镜检技术34痰标本采集(一)容器：采用WHO推荐的国际通用螺旋盖痰瓶，或可密封塑料盒、蜡纸盒收集痰标本（参考规格：直径4cm，高度2cm）。容器上应清晰标注患者姓名、病例号、检查项目。

痰标本采集(一)容器：采用WHO推荐的国际通用螺旋盖痰瓶，35痰标本采集(二)按采集的时间，可将标本分为三类即时痰：就诊时深呼吸后咳出的痰液；晨痰：患者晨起立即用清水漱口后，咳出的第2口、第3口痰液；夜间痰：送痰前一日，患者晚间咳出的痰液；

合格的痰标本：应是患者深呼吸后，由肺部深处咳出的分泌物。包括干酪痰、粘液痰和血痰。痰标本采集(二)按采集的时间，可将标本分为三类36

对疑似肺结核病者，临床医护人员应通过解释，使其充分了解标本性状、质量对相应检查项目的重要性，示范并指导其掌握从肺部深处咳痰的方法；如患者识字，可提供宣教材料。

痰标本采集(三)对疑似肺结核病者，临床医护人员应通过解释，使37如何正确留痰

查痰对于结核病的诊断是非常重要的，通过痰检可以知道您是否痰中带菌。如果痰中带有结核菌说明您患有肺结核，具有传染性，应该及时遵医嘱治疗。送检痰标本的质量直接影响检验结果的准确性。请您一定按照下列要求和方法留取合格的痰标本。每个痰盒应分别留取1～2口痰，请不要将1口痰分开放到2或3个痰盒中。正确的咳痰方法：1、咳嗽前应缓慢地深吸气，吸气后稍屏气片刻。2、躯干略向前倾，两侧手臂屈曲，平放在两侧胸壁下部，内收并稍加力。3、咳嗽时腹肌用力快速收缩，使腹壁内陷。一次深吸气，可连续咳嗽三声。4、停止咳嗽后，收缩腹肌将剩余的气体尽量呼尽。5、重复缓慢吸气动作或平静呼吸片刻，准备再次咳嗽的动作。*注意：部分人如果忽然深吸气容易诱发咳嗽，您可以尝试缓慢或分几次吸气，争取肺泡内充分充气，以增加咳嗽的效率。在这一过程中，要注意动作的连贯性，一气呵成。同时，也可以叩击前胸，或由家属协助叩击后背胸壁。这样震动支气管内的分泌物，能够增加咳嗽排痰的力度。如何正确留痰38

患者留取的痰标本，应由检验人员或经过培训的专人目视检查标本性状质量(特别是用于初次诊断的痰标本)：标本量一般在3～5ml，标本性状属于干酪痰、褐色血痰或含少量新鲜血液的血痰、粘液痰者为合格的标本；唾液为不合格标本。确定诊断检查时痰标本不合格者，医务人员应予以进一步指导并要求其重新送检。进行AFB涂片检查时应在登记本和检验报告单上注明标本性状，以供分析结果时参考。

痰标本采集(四)患者留取的痰标本，应由检验人员或经过培训的专人39痰标本采集(五)注意：由于当患者咳嗽、咳痰时，易产生含有结核菌的气溶胶，感染周边人群的机率较高，故采集痰标本时应在远离人群的开放空间进行，或在通风良好的室内进行。痰标本采集(五)注意：由于当患者咳嗽、咳痰时，易产生含有结401、干酪痰：标本外观以黄色(或奶酪色)、脓样、团块状的肺部分泌物为主，粘度较粘液痰低，制片时较易涂抹；涂片染色后镜检，可发现大量脓性炎症细胞、肺上皮脱落细胞。由于此类标本是由肺部深处咳出，对肺结核的诊断最有价值，故AFB的检出率较高。痰标本性状(一)1、干酪痰：标本外观以黄色(或奶酪色)、脓样、团块状的肺部分41痰标本性状(二)2、血痰：此类标本是因粘液痰或干酪痰标本中混有血液而形成，颜色为褐色或深褐色、鲜红色或伴有血丝；涂片染色后镜检除能够观察到粘液痰或干酪痰的细胞特征外，含新鲜血液的标本中可见到被染色的血细胞。由于含血标本易干扰AFB镜检的结果，故在制片时应尽量避免挑取含血标本。痰标本性状(二)2、血痰：此类标本是因粘液痰或干酪痰标本中42

3、粘液痰：标本外观以白色、粘稠度较高的肺部和支气管分泌物为主，制片时需仔细涂抹；涂片染色后镜检时，镜下可见支气管内膜纤毛柱状上皮细胞(细胞较长且形态不规则、细胞核和细胞质着色均较深，细胞一端可见着色较浅的纤毛)，伴有少量肺上皮脱落细胞(多数形态不规则、细胞核较小且着色较细胞质深，核质比大于1:3)、脓性炎症细胞(卵圆形、细胞核占细胞比例较大且着色较深，核质比低于1:1)、口腔脱落细胞及口腔寄生菌。此类标本的AFB检出率较唾液高。

痰标本性状(三)3、粘液痰：标本外观以白色、粘稠度较高的肺部43痰标本性状(四)4、唾液：目视观察标本整体外观，以透明或半透明水样、粘度较低的口腔分泌物为主，标本中有时伴有气泡；涂片染色镜检时，镜下可见少量口腔上皮脱落细胞(形态不规则、细胞核着色较细胞质深，核质比接近或大于1:2)和口腔内寄生菌，有时可见食物残渣。由于此类标本进行AFB检查时的检出率很低，用于对患者确定诊断时是不合格的标本。痰标本性状(四)4、唾液：目视观察标本整体外观，以透明或半44抗酸染色原理分枝杆菌等抗酸菌菌体成分含脂类物质较多(如：结核分枝杆菌，细菌菌体干重的≥60％是脂类成分)，且细胞壁结构较复杂。分枝杆菌细胞壁中的分枝菌酸在苯酚的渗透性助染作用下，与首染染料(如复红)结合牢固，能够耐受酸性酒精的脱色；因而抗酸菌可以保持首染染料的颜色。与之相反，非抗酸菌和绝大多数人体细胞由于细胞结构和菌体成分的限制，在首染染料染色后，容易被酸性酒精脱色，经复染后成为复染染料的颜色。抗酸染色原理分枝杆菌等抗酸菌菌体成分含脂类物质较多(如：结核45细菌学常规检查

—直接涂片法操作流程涂痰膜自然干燥复红加热初染5分钟自然干燥镜检流水冲洗美兰复染30秒盐酸酒精脱色流水冲洗流水冲洗细菌学常规检查

46细菌学常规检查

—直接涂片法显微镜检报告方式：0条/300视野：萋-尼氏抗酸杆菌阴性1-8条/300视野：实报菌数3-9条/100视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（+）1-9条/10视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（2+）1-9条/1视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（3+）10条/1视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（4+）细菌学常规检查

47（一）为防止抗酸杆菌的交叉污染，严禁油镜头直接接触玻片上的痰膜。（二）仔细观察300以上的视野。（三）每个工作日，一名镜检人员的玻片阅读量一般不应超过25张。（四）连续阅读10～12张玻片后，应休息20分钟左右。镜检读片（一）为防止抗酸杆菌的交叉污染，严禁油镜头直接接触玻片上的痰48

痰涂片抗酸菌浓度与阳性结果机率检出菌数每毫升标本估算菌数阳性结果机率0/100或更多视野＜1000＜10％1-2/300视野5000-1000050％1-9/100视野约3000080％1-9/10视野约5000090％（cv）1-9/每视野约10000096.2％（cv）10或更多/每视野约50000099.95％（cv）

痰涂片抗酸菌浓度与阳性结果机率49

查痰次数与阳性机率关系为什么诊断前强调三涂两培（3S2C）

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查痰次数与阳性机率关系50结核病实验室诊断课件51细菌学常规检查

—直接涂片法注意事项：选择痰标本中脓性、干酪样的部分涂片阳性率较高；一张玻片只涂一份标本，玻片一次性使用，防止交叉污染；打开痰盒、涂抹痰膜、烧灼接种环时容易产生气溶胶，应注意正确操作和自身防护；石炭酸复红初染时必须加温。细菌学常规检查

52细菌学常规检查

—直接涂片法优点：是直接发现原菌的检查方法，适用于痰、尿、便、体液、组织等几乎一切标本，有重要的临床诊断价值。是发现和确定传染源的重要途径，是考核和评价疗效的重要指标，有重要的流行病学意义；操作简便，价格低廉，适于各级实验室开展；快速，数小时可报告结果。细菌学常规检查

53细菌学常规检查

—直接涂片法缺点：敏感性低：通常每毫升含5000-10000条以上抗酸菌才可得到阳性结果；特异性较低：只能报告“抗酸菌阳性”，不能区分结核和非结核分支杆菌；镜下只能观察菌体形态，不能辨别死、活菌。细菌学常规检查

54涂片镜检质量保证系统—室内质控标本收集、染色液制备、涂片染色程序、显微镜镜检、显微镜的保养和维护、结果的报告和登记、痰片的分类保存等应按照国家参比实验室的统一标准严格进行操作。复查方式：自查：试验员当日对已查涂片抽样复查。互查：由本实验室其他试验员抽查当日10%涂片。涂片镜检质量保证系统—室内质控标本收集、染色液制备、55涂片镜检质量保证系统—室间质控全国质控系统：以参比实验室工作网为基础，以逐级督导为基本模式，以现场和非现场督导为主要方式。现场督导：上级实验室人员赴基层实验室就实验室布局、安全防护、污染物处理、涂片染色操作、显微镜维护状况、日常实验记录等进行考核和指导，并以盲法、按比例抽取涂片复查。非现场督导：防治人员依据盲法、按比例的原则抽取涂片交实验室复查。涂片镜检质量保证系统—室间质控全国质控系统：以参比实验室工作56一、实验室现场评估（一）目的：实验室现场评估是相应实验室各项条件的调查总结和质量提高的基本手段之一。建立相关实验室技术档案：由被督导实验室填写结核病实验室基本情况登记表，每次现场评价时需重新核实登记内容。调查相关实验室QA措施的制度和执行情况；调查相关实验室设备状态及安全防护情况；调查操作人员对相关检查程序的认知和掌握程度；调查相关实验室影响AFB检查质量的因素并提出相应质量提高措施、督导改正。一、实验室现场评估（一）目的：57结核病实验室基本情况登记表单位名称：

实验室名称：

主任姓名：

电话：

手机：

单位地址：

邮编：

传真：

E-mail：

1.结核病实验室技术人员登记姓名性别年龄学历专业职称工作年限专(兼)职备注2.上一年实验室工作量统计：玻片总张数阴性玻片数阳性玻片数玻片阳性率结核病实验室基本情况登记表单位名称：58现场评估调查程序

1.试剂检查的问题指标试剂名称试剂名称试剂名称现有的染色剂是否都可以使用？最近3个月是否试剂短缺？使用的试剂是否在有效期内？石碳酸复红是否是否亚甲蓝是否是否5%盐酸乙醇是否是否镜油是否是否如有填写“否”的项目，请简要说明原因：现场评估调查程序

1.试剂检查的问题指59

2.耗材保障指标原料可用性质量是否优良充分供应下列原料是否可以得到？痰盒规格是否标准？玻片盒是否符合规格标准？是否数量足够？近3个月是否供应短缺？有否有蒸馏水？水是否保存在无菌瓶子里？玻片是否

是否储片盒是否是否是否标准痰盒是否

是否玻片记号笔是否是否是否竹（木）签是否是否是否漏斗是否是否

滤纸是否

是否染色架是否是否是否灯或燃器是否是否

灯用燃料是否

是否擦镜纸是否

是否红笔是否

供水是否是否是否天平是否是否

2.耗材保障指标原料可用性质量是否优良603、实验室安全防护检查的问题指标结果痰涂片检查在哪里进行？在一个与其他实验室隔开的地方进行；有保证涂片和镜检独立操作的桌子，有充分的安全通风系统是否实验室是否通风？如果在打开的窗前玻片，技术员是否知道气流方向和潜在的危险？是否用哪种消毒剂？使用针对TB的消毒剂是否近3个月有消毒剂短缺吗？消毒剂供应充足是否实验室多长时间消毒一次？工作的地方应当每天清洁消毒是否用过的玻片怎样处理？是否重复使用？已经涂抹过标本的玻片不允许重复使用是否用过的痰容器怎样处理？是否重复使用？痰容器为一次性使用，用过的痰容器应销毁是否是否有生物危害废物桶？使用有盖的生物危害废物桶是否是否有实验室防护服？在实验室应穿穿好防护服是否离开实验室前是否应该脱掉实验服？实验服不能穿出实验室以外是否实验室是否使用手套？手套是否合格？应戴符合所从事安全工作要求的防护手套，是否试验结束后是否洗手？遵守正确的洗手程序是否实验室是否有上下水?实验室应当有上下水，并设独立洗手池是否实验室是否洁净有序?干净整洁，物品摆放有序是否下班后，是否关闭实验室门窗？是否例行安全检查？关闭好门窗，巡视检查，确保安全后离去是否实验室有否通风？如果在打开的窗前玻片，技术员是否知道气流方向和潜在的危险？操作人员应背对来风方向是否如有填写“否”的项目，请简要说明原因：所有痰检室仅一间，且做其它检验项目；操作时未戴防护手套；蔡甸区无上下水3、实验室安全防护检查的问题指标结果痰涂片检查在614、显微镜

检查的问题指标结果是否有显微镜？数量是否充分？至少有一台专用于分枝杆菌检查的显微镜，还有另外的显微镜备用。是否显微镜功能是否正常？随机镜检，通过显微镜能观察到清晰的视野，机械调节性能良好。是否显微镜工作场所合适吗？场所能够适当变更。是否是否有充足的光源？具备功能良好的灯泡和电源，或显微镜放置在适当的光源。是否是否常规维护显微镜？有油镜头,且功能完好整机干净清洁，有专人负责常规检查维护

是否如有填写“否”的项目，请简要说明原因：4、显微镜检查的问题指标结果是否有显微镜？625、用于EQA的玻片保存情况检查的问题指标结果所有保存的玻片，是否符合室间质量保证计划的要求？玻片保存符合室间质量保证规定，所有玻片保存与结核病实验室登记本一致。是否所有的玻片是否均保存在玻片盒内？玻片盒上是否有标记？玻片保存在玻片盒内，涂存盒上应按室内质控要求，标记实验序号和时间。是否所有玻片保存之前是否经二甲苯处理过？玻片盒内玻片有无交叉污染？玻片保存之前必须经二甲苯处理，玻片之间无重叠放置。是否如有填写“否”的项目，请简要说明原因：5、用于EQA的玻片保存情况检查的问题指标结果所有636、玻片、染色和镜检检查的问题指标结果痰盒上是否有病人标记？痰盒上标记有病人姓名及痰盒序号是否是否使用新的玻片进行抗酸杆菌痰涂片？所有的玻片，使用前是否清洁？使用新的玻片进行抗酸杆菌痰涂片，玻片使用前要清洁处理是否玻片上是否有标记？玻片按要求标记实验序号是否石碳酸复红多长时间过滤一次？石碳酸复红至少每周过滤一次。是否亚甲基蓝多长时间过滤一次？亚甲基蓝至少每月过滤一次，如果玻片上见到沉积物及时过滤。是否涂抹一张玻片是否使用一个新木签？每张玻片使用一个新木签。是否固定以前，玻片是否在空气中干燥？固定以前，玻片在空气中要干燥完全。是否玻片是否经过加热固定？经过火焰3~5次加热固定。是否通常一批染色多少张玻片？一批最多10~12张玻片。是否染色过程是如何进行的？用石碳酸复红和亚甲基蓝染色要多久？怎么脱色？石碳酸复红热染5分钟，染色剂不许在玻片上干燥，盐酸酒精脱色3分钟，仅必要时重复脱色，不要脱色过度，亚甲基蓝复染30秒钟是否染色试剂做质量检测吗？试剂必须用已知阳性玻片进行检验，至少每月一次是否显微镜多久用擦镜纸清理一次?检查完每张玻片之后，均擦干物镜是否报告一个阴性结果要观察多少个视野？300视野。是否报告一个阳性结果要观察多少个视野？应当检查足够多的视野以提供精确的数量等级。菌量少时至少100个视野。是否玻片镜检结果如何报告？结果要按国家结核病防治规划统一标准分级和报告。是否6、玻片、染色和镜检检查的问题指标结果痰盒上是否有病人标记？647、现场复检

A.现场评价时督导员至少要随机抽查3张阳性玻片

实验序号自检结果督导结果抗酸杆菌染色背景颜色痰或唾液玻片厚度和大小＋＋＋－－－7、现场复检

A.现场评价时督导员至少要随机抽查3张阳65AFB(＋)玻片质量评估图例(1)涂抹较厚

(AFB＋)AFB(＋)玻片质量评估图例(1)涂抹较厚(AFB＋)66复红染色不充分镜下表现

AFB菌体着色浅；AFB菌体异染颗粒不明显；较规范染色菌体细；AFB(＋)玻片质量评估图例(2)复红染色不充分镜下表现AFB菌体着色浅；AFB(＋)玻片质67脱色不充分镜下表现(1)AFB菌体异染颗粒不明显复染背景无法展现背景细胞复染后显色较深(呈棕/黑色)AFB(＋)玻片质量评估图例(3)脱色不充分镜下表现(1)AFB菌体异染颗粒不明显AFB(＋68脱色不充分镜下表现(2)菌体颜色不同；易造成非抗酸菌的“抗酸性”；AFB(＋)玻片质量评估图例(3)脱色不充分镜下表现(2)菌体颜色不同；AFB(＋)玻片质量评69脱色不充分镜下表现(3)血痰中白细胞核出现“抗酸性”；为避免假阳性结果，建议血痰标本必须进行重复脱色！AFB(＋)玻片质量评估图例(4)脱色不充分镜下表现(3)血痰中白细胞核出现“抗酸性”；AFB70脱色时间过长镜下表现AFB颜色呈桔黄色AFB菌体/细胞与背景界线不明显复染着色度下降AFB(＋)玻片质量评估图例(5)脱色时间过长镜下表现AFB颜色呈桔黄色AFB(＋)玻片质量71复染时间过长镜下表现背景着色较深AFB菌体颜色被遮盖AFB(＋)玻片质量评估图例(6)复染时间过长镜下表现背景着色较深AFB(＋)玻片质量评估图72复检样本量计算表上一年阴性玻片的总数

玻片阳性率2.5%5.0%7.5%10.0%13.0%15.0%18.0%30018512910180675950400217143108867061515002431541148971625270028116712192756554100031818012896766655200037619713510079685650004232081411038069571000044121314210480695720000450215143104826957复检样本量计算表73复检样本量计算表说明：

a、玻片阳性率：指所有检测的玻片中阳性玻片的比例（平均阳性率）。b、上一年阴性玻片总数：每年玻片的总数减去全年阳性玻片数。c、抽样时，当上一年阴性玻片数量和玻片阳性率不在选择点，阴性玻片数值采用区间上限，玻片阳性率采用区间下限。复检样本量计算表说明：a、玻片阳性率：指所有检测的玻片中阳74复检结果评价盲法复检的目的不是为了验证某个病人诊断正确与否,而是评价整个实验室操作水平。评价的内容除了玻片镜检结果存在的误差之外，还包括检查标本的质量（合格标本与不合格标本的比例）、涂抹的大小和厚度、染色质量如何等,以便采取纠正措施，提高实验室的工作质量。复检结果评价盲法复检的目的不是为了验证某个病人诊断正确与否,751.误差分类：分为定性误差和定量误差（1）定性误差包括高假阳性和高假阴性高假阳性（HighFalsePositiveHFP）：阴性片被错误地判读为2＋以上的阳性。高假阴性（HighFalseNegativeHFN）：2＋以上的阳性玻片被错误地判读为阴性。1.误差分类：分为定性误差和定量误差76（2）定量误差包括量化误差、低假阳性和低假阴性量化误差（QuantificationError，QE）：同一张阳性玻片初检者和复检者阳性判断级别的差异。低假阳性（LowFalsePositive，LFP）：阴性玻片被错误地判断为1＋及以下的阳性。低假阴性（LowFalseNegative，LFN）：1＋及以下玻片被错误地判断为阴性。（2）定量误差包括量化误差、低假阳性和低假阴性77常见“误差”原因误差类型可能原因建议假阳性（FP）1)例如染料沉渣或结晶等被误识为抗酸杆菌2)原始报告后着色的抗酸杆菌退色1）对技术人员复训。2）对假阳性玻片重新染色并复检。假阴性（FN）1）观察玻片的视野数量不足2）镜检技术能力差3）染色操作不规范（抗酸杆菌颜色暗淡、背景对比不足或过高）4）显微镜存在问题5）染液质量差1、2、3）对技术人员复训4）现场检查显微镜工作状态5）重新购置质量合格的染料并重新配制染液量化误差（QE）1）观察玻片视野数量不足2）阳性玻片的分级报告标准掌握差3）镜检技术能力差4）显微镜存在问题1.2.3）对技术人员复训4）现场检查显微镜工作状态常见“误差”原因误差类型可能原因建议假阳性1)例如染料78批量测试批量测试是指定期地由国家或省级参比室向外周实验室发送已经染色和(或)未染色的玻片，由外周实验室人员来读片并对读片结果进行评估。这种方法是检查实验室技术人员的染色能力和(或)读片能力，主要检测个人的操作技术，而不是检测实验室的整体操作水平，也不是检测实验室的常规操作。当没有其它质量评价方法存在时，批量测试可以作为部分评价当前操作技术的有价值的测量方法。批量测试批量测试是指定期地由国家或省级参比室向外周实验室发送79结核病的细菌学检验始终要细心、用心，强调标准化和规范化，要做好实验的每一个细节和每一张涂片。结核病的细菌学检验始终要细心、用心，强调标准化80

谢谢！

81Unit3LifeinthefutureUnit3Lifeinthefuture82KeywordsandExpressionsKeywordsandExpressions83impression

n.-----vt.

impress

make/leavea/an…impressiononsb.

给某人留下···的印象

Hisspeechleftadeepimpressiononus.

翻译：他的演讲给我们留下了深刻的印象。impressionn.-----vt.imp84结核病实验室诊断课件852.takeup拿起；接受；开始；继续Whendoesthenewmanagertakeup

hisjob?Sorry,Ihavetakenupyoutoomuchtime.Hewantstotakeupartincollege.Hedecidedtotakeupphotographyashiscareer.Doyouintendtotakeuphisofferofajob?开始某项工作占用(时间或空间)选修从事接受2.takeup拿起；接受；开始；继续Whendoes86take的短语还有takeoff起飞，脱掉takeover接管，接收，承袭takeon承担，接受，从事，呈现

takecare当心，注意takecareof照顾…takeplace发生takein接受，理解，欺骗，收进，吸收takeadvantageof

利用takeaway拿走

take的短语还有87takeiteasy

别着急，放轻松takeyourtime

从容做，不慌不忙takepartin

参加takedown

记下，写下，拿下,拆掉，拆台takeforgranted

想当然，认为理当如此takeiteasy别着急，放轻松883.constantadj.constantlyadv.

不断地Fashionisconstantlychanging.时尚总是日新月异。Heatthesauce,stirringconstantly.加热调味汁并不停地搅动。3.constantadj.894.previousadj.

在前的，早先的previousto

在……之前previouslyadv.

先前地，以前地Hispreviousattemptwassuccessful.

他以前的尝试成功了。

Previoustotheconferencewehaddiscussedthematter.

在会议召开之前,我们讨论了这个问题.4.previousadj.在前的，早先的prev905.guide

n.

指导;向导;导游;vt.指引；指导guidesb.along/through/to

带领某人……beguidedbysb.由某人引导/指导Alocalfarmerguidedusthroughtheforest.一个当地农民带我们穿过这片森林。Guidedbytheguide,

wehadatourtothesmalltown.

在导游的指引下，我们观光了这个小镇。5.guiden.指导;向导;导游;vt.指引；指导g916．toleratevt.忍受；宽容Hewon'ttolerateanyonequestioninghisdecisions.他不能容忍别人对他的决定提出质疑。toleratesth.宽容/忍受某事toleratesb.doingsth.容忍、忍受某人做某事6．toleratevt.忍受；宽容927.lackvi.&vt.缺乏；没有

n.缺乏；短缺的东西1.

Shelacksmoneytobuynewclothes.2.Heislackinginconfidence.3.Shedoesnotlackforfriends.【归纳总结】v.lacksth.=belackinginsth.某物不足

lackforsth.=needsth.需要···（否定）

7.lackvi.&vt.缺乏；没有

934.Ourtouriscancelledforlackofmoney.5.Youareexcellent,butwedohaveno

lackofteachers.6.Toomanyteachersaretreatedwithalackofrespect.n.

forlackof因为缺乏······nolackof不缺乏，很多

alackof缺乏······【归纳总结】4.Ourtouriscancelledforl948．pressvt.按；压；逼迫n.按；压；印刷；新闻Shepressedhergueststostayalittlelonger.她力劝客人们多呆一会儿。Tojudgefromthepress,theconcertwasagreatsuccess.据新闻报道来看，这次音乐会取得了巨大成功。o...把某物塞进……presssb.todosth.力劝某人做某事8．pressvt.按；压；逼迫n.按；压；印刷；新闻9.losesightof

看不见,忽视,失去联系1.SuddenlyIlostsightofmyfatherinthecrowd.看不见2.WemustnotlosesightofthefactthatlearningEnglishisveryimportant.

忽视

9.losesightof看不见,忽视,失去联96【拓展】catchsightof望见，看到insight在视线内outofsight看不见了at(the)sightof一看见······atfirstsight第一眼；初看起来loseone'ssight失明【拓展】9710.sweepup打扫；横扫Didyousweepupallthebrokenglass?你把打碎的玻璃全扫起来了吗？sweepup

意为“打扫；清扫”，经常引申为“横扫；掠过；拥向”。如:Thestrongwindsweptuptheleavesoffthestreet.大风把街上的树叶一扫而光。10.sweepup打扫；横扫Didyouswe9811.slideinto

移动；溜进···Exhausted,Islidintobedandfellasleep.Themanslidthemoneyquicklyintohispocket.

那人很快把钱塞进自己的口袋。11.slideinto移动；溜进···Exhau9912.optimisticadj.乐观（主义）的

beoptimisticaboutsth对…乐观optimistn.乐观主义者optimismn.乐观主义Hehasnoreasontobeoptimisticaboutthefuture,forhedoesn’tstudyhard.12.optimisticadj.乐观（主义）的beo10013.speedup加速反义词slowdownYouwillnevergetthereifyoudon’tspeedup.Thegirl’sheartoftenspeedupwhilesheistalkingtoastranger.ataspeedof…以······的速度athigh/low/full/topspeed

13.speedup加速反义词slowdownY10114.desert

n.

沙漠；荒原

vt.抛弃，遗弃，离弃

TheSaharadesert撒哈拉沙漠Shewasdesertedbyherhusband.她被丈夫遗弃了。Thevillageshadbeendeserted.这些村庄已经荒无人烟了。[提醒]

拼写相似的词:dessert(饭后的甜点心)14.desertn.沙漠；荒原

10213．instantn．瞬间；片刻adj.立即的；立刻的Shepausedforaninstantandthensteppedinside.她停了片刻，然后走了进去。Shewokeupinstantlythephonerang.电话一响她就醒了。foraninstant一会儿；片刻inaninstant一会儿之后atthatinstant当时；那一刻theinstant一……就(用作连词，引导时间状语从句)instantlyadv.立即；马上13．instantn．瞬间；片刻adj.立即的；立刻的n.(pron.)疑问词＋tododoingsth.wh-clause1.considerLanguagepointsn.(pron.)1.considerLanguage104Letmeconsider.让我仔细想想。Iamconsideringthepurchaseofcar.我在考虑买一辆车。Wemustconsider

givingitatry.我们应当考虑试一试。Weshouldconsider

whattodonext.我们应当考虑一下怎么办。Letmeconsider.让我仔细想想。1052.Inside,itisdividedintozoneswithextraordinarilydifferentatmospheresandgravities.这里面被分为有着特别不同的大气和引力的区域。▲bedividedinto“被分为….”其主动语态为divide…into…“把…分为…”。2.Inside,itisdividedinto106如:Let’sdivideourselvesintotwogroups.我们分成两个小组吧。

Dividethecakeintoquartersandshareitequally.把蛋糕分成4份,

大家平均享用。

如:Let’sdivideourselvesinto107辨析:divide与separate

divide往往指把某个整体划分为若干部分;

separate指把原来连在一起或靠近的事物分隔开来。如:Heseparatedthebigballsfromthesmallones.

他把大球和小球区分开来。辨析:divide与separate1083.Soyoucanimaginehowexcitingthatis!可以想像那是多么刺激！[开放思维]n./pronwhat-clausethat-clausedoingsth.sb.doingsth.imagine3.Soyoucanimaginehowexci109Icanimagine

thescenequiteclearly.我想很清楚地想像出那一情景。Youcanimagine

howsurpriseIwas.你能想像出我当时是多么惊奇。Trytoimagine

you’realoneonadesertisland.

试想一下你孤身一人在一个荒岛上的情形。Icanimaginethescenequite110Trytoimaginestayingaloneonadesertisland.Trytoimage

youstayingaloneonadesertisland.Trytoimaginestayingalone111imagine后接的宾语是否定意思的从句时,

通常要发生否定转移。在imagine后可用代词so(not)代替前面的名词,

动名词和从句,

而不用it.注意imagine后接的宾语是否定意思的从句时,112－Dosesheknowwhatkindoftablesshehastakentoday?她知道她今天取的是什么种类的桌子吗？－Iimagineso.

我想应该知道吧。－Doyouimaginetheywillhelpout?

你想他们会帮助我们吗？－Iimaginenot.

我想不会。－Dosesheknowwhatkindofta1134.TheyhaveassistedinthediscoveryofplanetsroundthefourthstarinthePleiadessystem.他们已发现了围绕昴宿系中的第四颗星旋转的行星。

assistv.tohelporsupportassist+n./pron

帮助assistsb.todosth.帮助某人干某事

4.Theyhaveassistedinthed114assistin在……上给予帮助assistwith帮助(照料,做);

在……上给予帮助Iamwillingtoassistyouwheneverthereisanopportunity.有机会我愿随时帮你。I’amafraidIcan’tassistyou,youhavetogoandseethemanager.我恐怕帮不上忙,你得去找经理。assistin在……上给予帮助115Ateamofnursesassisted(thedoctor)in

performingtheoperation.Sheemployedawomantoassistherwith

thehousework.Goodglasseswillassistyoutoread.Ateamofnursesassisted(the116Sheassistedthehostessattheparty.她在舞会中帮助女主人。Theywillhelpyou(to)attainthegoal.他们有助于你完成目标。Heisalwaysaidingthestudentswithmoney.他总是出钱帮助那些学生。Sheassistedthehostessatth117assistanceUN.帮助，援助giveassistancetosb给予帮助cometosb’sasssstance帮助某人assistantCN.助手，助理assistanceUN.帮助，援助1185.Theyrequirethesameatmosphereashumansandgreatengineers.他们需要的空气跟人类的空气一样,

他们都是超乎寻常的工程技术人员。5.Theyrequirethesameatmos119辨析:assist,help与aid

assist与help同义,但着重指“协助”,受协助的人自己做一部分工作;

help可指具体或抽象意义上的“帮助”;

aid一般指缓助一群人,

尤指用金钱,

接受帮助的人较广泛。如：辨析:assist,help与aid120require(1)vt.

toneedormakenecessary需要[开放思维]requiren./prondoingsth.that-clausetodosth.requirerequiren./pron121

Thissuggestionwillrequirecarefulthought.这建议需要仔细考虑。

Tocarryoutthisplanwouldrequireincreasingourstaffby50％。执行这一计划需要增加50%的人员。Thissuggestionwillrequir122(1)require,need,want用法一致,当物作主语时,其后可接动名词或不定式的被动语态。(2)require接that从句时,谓语动词用虚拟语气,

即(should)+v.Theflowersrequire/need/wantwatering/tobewatered.

花需要浇水了。Attention(1)require,need,want用法一致,当物123辨析:requiretodo与requiredoing

都表示“需要做某事”,

接动词不定式时,句子的主语是动词不定式的逻辑主语,接动名词时,句子的主语则是动名词的逻辑宾语。如:Herequirestoseemypassport.

他要看我的护照。Thehouserequirespainting.

这房子需要油漆。辨析:requiretodo与requiredoin1246.Supposethat……假设1)conj.usedwhenimaginingwhattheresultwouldbeifsomethinghappened.It’snotworththerisk,supposeyourmotherfoundout?不值得冒这个险,

万一你妈妈发现了怎么办?Suppose/supposingheisabsent,whatshallwedo?假如他不在,我们怎么办?6.Supposethat……假设1252)conj.tosuggestsomething;supposing让……(用于提出建议)Supposewegoforawalk.3)besupposedtodo/besth.

应当,

应该Customersarenotsupposedtosmokehere.顾客不可以在这里抽烟.Heissupposedtobeagoodwriter.他被认为是个好作家。2)conj.tosuggestsomething;1267.Isitlikely/unlikelythat……?

……事可能/不可能吗?likelyadj.somethingthatislikely/willprobablyhappenorisprobablytrue可能的,可能会发生的,可能是真的7.Isitlikely/unlikelythat127如:Snowshowersarelikelyinthenext24hours.未来的24小时内可能有阵雨。

Thelikelycostoftheoperation.手术可能的费用。如:Snowshowersarelikelyin1282)bably很可能如:I’dverylikelyhavedonethesamethinginyoursituation.在你那种情况下,我很可能做出同样的事。2)bably很可能如:129辨析:likely,possible与probablelikely

与probable的可能性接近“很有可能”。句型为:sb.islikelytodo或Itislikelythatprobable:句型为It’sprobablethatpossible:句型为It’spossible(forsb.)todosth.或Itispossiblethat意为有某种可能,实际上也许不能实现,其副词常与couldnot连用,表示不大可能。辨析:likely,possible与probable130Goodbye!Thankyouforyourattention!Goodbye!Thankyouforyourat131结核病实验室诊断结核病实验室诊断结核病基本情况：（1）结核病是一个古老的疾病，至今仍然严重威胁着人类健康。近十几年来，由于结核菌的耐药性、HIV/TB双重感染移民（流动人口）问题使全球结核病控制工作面临严重挑战。结核病基本情况：（1）结核病是一个古老的疾病133结核病实验室诊断课件134结核病实验室诊断课件135结核病实验室诊断课件136结核病实验室诊断课件137结核病细菌学检查的重要作用是结核病临床诊断和治疗的重要依据是直接发现病原菌的诊断方法，比影象学、免疫学等检查具有更高的特异性是确定、调整化疗方案的重要依据是国家结核病控制规划（NTP）的重要组成部分是发现传染源的最主要途径和手段是考核疗效、评价防治效果的可靠指标结核病细菌学检查的重要作用138分枝杆菌生物学基础分枝杆菌139概述结核分枝杆菌是1882年郭霍（RobertKoch）从肺结核病人痰标本中发现。是人类结核病的主要病原菌。概述结核分枝杆菌是1882年郭霍（RobertKoch140分类结核分枝杆菌属原核生物界、厚壁菌门、裂植菌纲、放线菌目、分枝杆菌科的分枝杆菌属，分枝杆菌属种类甚多，目前已命名的有200多种，一般可分为缓慢生长和快速生长两大类。分类结核分枝杆菌属原核生物界、厚壁菌门、裂植菌纲、放线菌目、141概述分枝杆菌呈分支状生长，营养要求比普通细菌高，是一种生长缓慢的革兰氏阳性杆菌。经石炭酸复红染液着色后，不被盐酸酒精脱色，故称此类细菌为抗酸菌。

概述分枝杆菌呈分支状生长，营养要求比普通细菌高，是一142分枝杆菌分类分枝杆菌分类143结核分枝杆菌结构结核分枝杆菌组成：细胞壁、细胞膜、细胞质、核物质结核分枝杆菌结构结核分枝杆菌组成：144细胞壁厚度为10~35nm，较一般细菌的细胞壁厚。含有大量脂类，具有坚韧性和疏水性。功能：保护细菌的固有形态抵抗酸碱物质及宿主细胞对细菌的破坏和杀伤如果细胞壁有缺陷，细菌只能在高渗环境下生存，则称此类细菌为L型细菌。细胞壁厚度为10~35nm，较一般细菌的细胞壁厚。145细胞膜细胞壁内层围绕于细胞质外的富于弹性的半透膜。主要成分是脂类（磷脂）和蛋白质。功能：细菌与外界环境进行物