1.1-DNA重组技术的基本工具(00002)幻灯片

1.1DNA重组技术的基本工具专题1基因工程基因工程基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程结果基因工程是指按照人们的意愿，将某种基因有目的地转移到另一种生物中去的新技术。基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平剪切→拼接→导入→表达人类需要的基因产物基因工程产品延熟保鲜转基因西红柿研究者发现，控制植物衰老激素乙烯合成的酶基因，是导致植物衰老的重要基因，如果能够利用基因工程的方法抑制这个基因的表达，番茄就不会容易变软和腐烂了。抗虫的基因来自苏云金杆菌。苏云金杆菌形成的伴胞晶体是一种毒性很强的蛋白晶体，能使棉铃虫等鳞翅口害虫瘫痪致死。科学家将编码这个蛋白质的基因导入作物，使作物自身具有抵御虫害的能力。抗虫棉转基因鲑鱼日本三得利公司2009年10月20日宣布，将于11月3日发售世界上首次培育成功的蓝玫瑰。玫瑰的基因不能编码合成蓝色色素，三得利公司通过把三色紫罗兰的基因植入玫瑰，培育出含蓝色素的玫瑰，售价在2000日元至3000日元。蓝色妖姬

DNA重组技术的基本工具“分子手术刀”--“分子缝合针”--“分子运输车”--限制性核酸内切酶DNA连接酶运载体“分子手术刀”切点：主要在原核生物中来源：特点：磷酸二酯键特异性，一种限制酶只能识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并在特定的切点上切割DNA分子。EcoRⅠ限制酶只识别GAATTC，并在GA间切割SmaⅠ限制酶只识别CCCGGG，并在GC间切割。例如：限制性核酸内切酶(简称限制酶)GAATTCCTTAAGGGAATTCCTTAA黏性末端CCCGGGGGGCCCCCCGGGGGGCCC平末端EcoRⅠ

SmaⅠ

“分子缝合针”DNA连接酶种类E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源连接末端类型共性T4噬菌体大肠杆菌只能连接黏性末端既可连接黏性末端，又可连接平末端。这两种连接酶催化反应基本相同，都是连接双链DNA的缺口，而不能连接单链DNA。

DNA连接酶连接的是两个脱氧核苷酸分子的什么部位？“分子缝合针”DNA连接酶DNA连接酶与DNA聚合酶一样吗？为什么？磷酸二酯键基因的针线：DNA连接酶

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G用同种限制酶切割答：不一样。DNA连接酶和DNA聚合酶都是形成磷酸二酯键,二者的差别主要表现在：（1）DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核酸片段的3′末端的羟基上，形成磷酸二酯键；而DNA连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键，不是在单个核苷酸与DNA片段之间形成磷酸二酯键。（2）DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成一条与模板链互补的DNA链；而DNA连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来。因此DNA连接酶不需要模板。此外，二者虽然都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。DNA连接酶与DNA聚合酶一样吗？为什么？基因的载体质粒，λ噬菌体的衍生物，动植物病毒等。“分子运输车”载体必须具备的条件：3、具有某些标记基因，便于进行筛选。（如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等）2、具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接；1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存；4、对受体细胞无害。载体的作用：1、将外源基因转移到受体细胞中去。2、利用载体在受体细胞内对外源基因进行大量复制。常用的载体有：质粒质粒是基因工程最常用的运载体，它广泛地存在于细菌中，是细菌拟核外能够自主复制的很小的环状DNA分子，大小只有普通细菌拟核DNA的百分之一。要对天然质粒进行人工改造质粒病毒(噬菌体和动植物病毒)基因的载体“分子运输车”

迄今为止，基因工程中使用的限制酶绝大部分都是从细菌或霉菌中提取出来的，它们各自可以识别和切断DNA上特定的碱基序列。细菌中限制酶之所以不切断自身DNA，是因为生物在长期演化过程中，含有某种限制酶的细胞，其