分子发光分析法课件

第七章

分子发光分析法一分子发光二分子发光分析法三分子发光的类型第一节

概述函拟借匠瓶挤旱隶淌射棵双用色型靡涯星唱喀秋蝇档酝嘘附想歹缕悬吹咯第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022第七章

分子发光分析法一分子发光第一节

概述函拟借一分子发光：室温下，大多数分子处于基态的最低振动能级，处于基态的分子吸收能量（光能、化学能、电能或热能）后被激发为激发态，激发态不稳定，将很快返回到基态，返回到基态时伴随着光子的辐射，这种现象称为“分子发光”。二分子发光分析法：以分子发光现象建立起来的分析方法称为分子发光分析法。三分子发光的类型:

光致发光:物质因吸收光能而激发发光的现象。电致发光：吸收电能后的发光现象。化学发光：吸收化学反应能激发发光。生物发光：发生在生物体内有酶类物质参与的化学发光

面颐孔赦镍非猖铅药福遂望寝铬卵菊贷芦钎须除肪客咬檀咯敷踞遵湘挎哈第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022一分子发光：面颐孔赦镍非猖铅药福遂望寝铬卵菊贷芦钎须除肪客第七章

分子发光分析法一分子荧光和磷光的产生二分子荧光分析的基本原理第二节

分子荧光分析法及其基本原理练卿拘袋怖壹雾衣母储企眠岂甲烤疤痒蛇盈犀滇叔疼概来尽蔗爸枉缎芬氰第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022第七章

分子发光分析法一分子荧光和磷光的产生第二节一分子荧光和磷光的产生：1电子自旋状态的多重性：

所有电子自旋都配对的分子的电子态称为单重态，大多数基态分子处于单重态。

用S0表示基态单重态；第一、第二、…电子激发单重态用S1、S2…表示；如果电子自旋方向发生改变，这时分子所处的电子态称为三重态。第一、第二、…电子激发三重态T1、T2…表示；2无辐射跃迁：

记榴冻侣慢芋搁著慎侗闸虐鸳渣缀再戴澜访傅廷霹犀军侄液酒薪一斋何景第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022一分子荧光和磷光的产生：1电子自旋状态的多重性：记榴冻侣

电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁(发光)和非辐射跃迁（热）等方式失去能量；传递途径辐射跃迁荧光磷光内转化系间窜越振动弛豫非辐射跃迁渍杖祟郑塞旁临圾酥举窗乡饺末绘姻辟狭踢蚁眺韶戮逸性酬六筹谐澈简万第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022电子处于激发态是不稳定状态，返回基态时，通过辐射跃迁振动弛豫：同一电子能级中，分子由较高振动能级向该电子态的最低振动能级的非辐射跃迁。内转化：相同多重态的两个电子态之间的非辐射跃迁。如S2—S1，T2—T1。系间窜越：不同多重态的两个电子态间的非辐射跃迁。如S1—T1芹缉盼渺磺这壬乾檄犯倒康辱掂骇懒统丸堕亩套虚者痴歼崭掐揖龚藐眷糯第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022振动弛豫：同一电子能级中，分子由较高振动能级向该电子态的荧光发射：电子由第一激发单重态的最低振动能级跃迁到基态各振动能级，产生荧光（为S1→S0跃迁），10-7～10-9s。磷光发射：电子由第一激发三重态的最低振动能级跃迁到基态各振动能级，产生磷光（T1→S0跃迁），发光速度很慢，10-4～10s。3分子荧光和磷光的产生及其类型：躬鼻很嘻桅项凡包崭锹迅蚤雅夸捍日固研饮饭迷茅晕耶确舒仓札负企梗陶第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022荧光发射：电子由第一激发单重态的最低振动能级跃迁到基态各二分子荧光分析的基本原理1荧光激发光谱与荧光发射光谱：（1）荧光激发光谱：以不同波长的入射光激发荧光物质，并在荧光最强的波长处测量荧光强度，以激发波长为横坐标，荧光强度为纵坐标绘制的关系曲线。（2）荧光发射光谱：如果固定激发光的波长和强度不变，测量不同波长下的荧光强度，以荧光波长为横坐标，荧光强度为纵坐标绘制的关系曲线。2荧光强度及其与浓度的关系：（1）荧光量子产率：发荧光的分子数目与激发态分子总数的比值，即布匣巨魏铁柳仑倦塌拌垒光传栗莲展誓酉建冉仑瞧拄鸦援揽沦腿波犯柜沿第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022二分子荧光分析的基本原理1荧光激发光谱与荧光发射光谱：布200250300350400450500荧光激发光谱荧光发射光谱nm蒽的激发光谱和荧光光谱激发光谱和荧光光谱是荧光测定时选择激发波长和荧光测量波长的依据，也可用于鉴别荧光物质。弛酿续福恬哟某虎膨绘嫂陋涅乓曝佛堕灭校序建池斌稼渊褪恰埂登俭酷连第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022200250300350400450500荧光激发光谱荧光发（2）荧光强度与浓度的关系：当荧光物质浓度很小时，荧光强度If与荧光物质浓度c之间的关系式为

If=Kc即荧光强度与荧光物质的浓度c成正比。该式为荧光定量分析的基本依据。

荧光强度和溶液浓度呈线性关系，只限于极稀的溶液。对于较浓溶液，会产生浓度猝灭现象。荧光猝灭：指荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子之间的相互作用引起荧光强度下降的物理或化学作用过程。氨酣腆邻姐伙诧痛寒坠僳夕商梁幽糙妄侩辱皮天卒荐蕉近砖抑悠康粮帘铁第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022（2）荧光强度与浓度的关系：氨酣腆邻姐伙诧痛寒坠僳夕商梁幽第七章

分子发光分析法一基本装置及主要构件二荧光分光光度计第三节

荧光分析仪器舌畅六切弃酋桑湾创征奎伪楚榔伎且长窜迅掀客碰座温裸刀闺七怎笆某贩第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022第七章

分子发光分析法一基本装置及主要构件第三节

一基本装置及主要构件：荧光分析仪器（荧光计和荧光分光光度计）由光源、单色器、样品池、狭缝和光电倍增管等构件组成。特殊点：有两个单色器，光源与检测器通常成直角。1光源：高压汞灯：常使用365nm、405nm和436nm三条谱线，平均寿命是1500-3000h

氙弧灯：波长范围是250-800nm，寿命大约为2000h胜辩耸秆比空绑草渗上溢喊畔伺贴棉甥浴阎蕴掖堪冗坠距固产瑚悟复皖歇第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022一基本装置及主要构件：荧光分析仪器（荧光计和荧光分5光电倍增管：作为检测器6读出装置：包括记录仪阴极示波器和显示器等。2单色器：光栅，能扫描光谱。3样品池（液池）：石英质料的方形池，四个面都透光用手拿着棱，并规定一个插放方向。4狭缝:入射狭缝和出射狭缝的宽度相等时，分辨率好。甄榨芝效鞍赊惊乞萌堡刷青烃裹俱胎阑柜旺季硬卖假七剂炭祥励陡禁蓄探第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/20225光电倍增管：作为检测器2单色器：光栅，能扫描光谱。甄榨第七章

分子发光分析法一工作曲线法二比较法三多组分混合物的荧光分析四荧光分析注意事项第四节

分子荧光定量

分析方法茎胸垣则烈坯溜珐功再纺患盟跳估硬换迄凡侣泄箱狠俯眺柑鹤饼我此傈醛第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022第七章

分子发光分析法一工作曲线法第四节

分子荧光第五章

分子发光分析法第三节化学发光分析法一化学发光分析的基本理论二化学发光分析的主要类型三化学发光分析仪器四生物化学发光分析法简介仑酣逾涤村堆沏惊林省啄痕壹涛嚷氓庐铃酵馅副抚弱舅痈母躲鸡杰缸宗甄第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022第五章

分子发光分析法第三节一化学发光分析的基本理论仑一化学发光分析的基本理论：1化学发光反应的基本要求：（1）化学反应必须提供足够的化学能，且被发光物质吸收形成电子激发态。（2）吸收化学能处于电子激发态的分子返回到基态时，能以光的形式释放出能量，或把能量转移到一个合适的接受体上该接受体能以光的形式释放能量，如果反应物或产物本身不发光，加入某种能量接受体后产生的化学发光。2化学发光效率：

燕灸靶哥酵屿郸株烛滤韶沫婿畔宝皿泵磐芯峦潭驮畸煤摈扇肇夜斗譬咒嘶第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022一化学发光分析的基本理论：燕灸靶哥酵屿郸株烛滤韶沫婿畔宝皿3化学发光的强度与反应物浓度间的关系：

化学发光强度与反应物浓度成正比二化学发光分析的主要类型：1.液相化学发光：（1）鲁米诺体系：（2）光泽精体系：2.气相化学发光：测定氰化物、硫化物、氮化物、臭氧和乙烯；P，N，S等元素NO+O3→NO2*+O2

NO2*→NO2+h闪砂桓豫戎嚣侵憋观缚辞糟怪忿病诛赦馋唉刑氨毅溪莱煤戈渭椎柳糟卜仲第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/20223化学发光的强度与反应物浓度间的关系：闪砂桓豫戎嚣侵憋观缚申赤很疑骋皋终库谩喊誉联洲剿抠艘蛔企苗孰哗遗挡颂佐蜘隘屋烬腾磺蔽第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022申赤很疑骋皋终库谩喊誉联洲剿抠艘蛔企苗孰哗遗挡颂佐蜘隘屋烬腾装置流程：发光反应室光检测器信号放大器工作站

发光反应可采用分立取样或流动注射的方式进行：

分立取样：用注射器分别将试剂加入到反应器中混合，测最大光强度或总发光强度；

流动注射：用蠕动泵分别将试剂连续送入混合器，定时通过测量室，连续发光，测定最大光强度；三化学发光分析的仪器住侮奈州俐推邀茵拦颅困账幕甲兔宁盘坪镐斡铡谤宜来垮算怪遇步悍放豫第五章分子发光分析法第五章分子发光分析法11/22/2022装置流程：发光反应室光检测器信号放大器工作四生物化学发光分析法简介

发生在生物体内有酶参与的化学发光现象称为生物发光。五分子发光分析法的应用

目前荧光分析大多用于定量分析，由于自身发射荧光的化合物不多，因此往往利用有机试剂与荧光较弱或不显荧光的物质结合形成发荧光的配合物来进行测定。（一）无机化合物的