流式细胞仪BD-FACSCanto-II课件

流式细胞仪背景知识

1PPT课件流式细胞仪背景知识

1PPT课件总览流式细胞术基本知识流式细胞仪的组成数据采集与分析2PPT课件总览流式细胞术基本知识2PPT课件流式细胞技术是什么？流式细胞术在流动的状态中检测细胞或颗粒的各项特性特异性强，灵敏度高，速度快，并能实现多参数分析可检测的样本种类多样：外周血，骨髓，细胞穿刺液，洗脱液，实体组织，培养细胞，微生物FlowCytometryFlow:FluidCyto:CellMetry:Measurement3PPT课件流式细胞技术是什么？流式细胞术FlowCytometry3流式细胞术检测样本0.4um40um4PPT课件流式细胞术检测样本0.4um40um4PPT课件流式细胞术检测指标

流式细胞术提供的信息：

-相对细胞大小

-相对细胞颗粒密度和内部复杂度

-染色过细胞的相对荧光强度5PPT课件流式细胞术检测指标

5PPT课件细胞结构细胞大小细胞粒度DNA含量与细胞周期RNA含量蛋白质含量染色体分析细胞功能细胞表面/胞浆/核的特异性抗原细胞活性细胞内细胞因子酶活性激素结合位点细胞受体细胞凋亡在上述信号基础上的细胞分选流式细胞术的应用6PPT课件细胞结构细胞功能在上述信号基础上的细胞分选流式细胞术的应用6流式细胞仪组成液流系统：形成层流系统，聚焦细胞光学系统：产生和收集光学信号电子系统：光信号转化为电信号，进行信号处理7PPT课件流式细胞仪组成7PPT课件FluidicsDiagramSheathFlowsheathtankSampleFlowsheathinteriorreservoirwasteinteriorreservoirsheathfiltersampleinjectiontube(SIT)testtubeorplateflowcellinterrogationpointbubblefilterwastetank8PPT课件FluidicsDiagramSheathFlowshe液流系统9PPT课件液流系统9PPT课件光学系统

激发光学系统包括:-激光器-透镜和反射镜，将激光引导到检测区域收集光学系统包括:滤光片，将产生的光信号引导到对应的光学接收器10PPT课件光学系统

激发光学系统包括:10PPT课件11PPT课件11PPT课件12PPT课件12PPT课件光学系统13PPT课件光学系统13PPT课件14PPT课件14PPT课件光学系统-滤光片460500540460500540460500540SP500LP500BP500/50

Longpass Shortpass Bandpass15PPT课件光学系统-滤光片46050054046016PPT课件16PPT课件17PPT课件17PPT课件电子系统LaserLaserLaserTimeVoltageTimeVoltageTimeVoltage18PPT课件电子系统LaserLaserLaserTimeVoltage电子系统19PPT课件电子系统19PPT课件电子系统20PPT课件电子系统20PPT课件Review悬浮状态的细胞单个流过流动室细胞被激发产生散射光和荧光信号信号被采集转换成数字信号存储于电脑上液流系统光学系统电子系统21PPT课件Review悬浮状态的细胞液流系统电子系统21PPT课件回顾流式细胞仪的三大组成部分？滤光片LP600代表什么意思？BP400/40呢？22PPT课件回顾流式细胞仪的三大组成部分？22PPT课件数据采集

三种数据：

-前向散射光FSC

-侧向散射光SSC

-各种荧光散射光FL1，FL2，FL3，FL423PPT课件数据采集

23PPT课件当使用激光光源时，在前向方向（和激光行进的方向相同）上可用前向散射光接收通道接收到一定量的散射光前向散射光的强度是和细胞或其他检测颗粒的大小、形状密切相关的数据采集-前向散射光24PPT课件当使用激光光源时，在前向方向（和激光行进的方向相同）上可用前当激光光源被使用时，侧向也有一定量的散射光产生，可以用90o

角的侧向散射光检测通道来采集侧向散射光的强度和细胞或其他检测颗粒的颗粒密度、内部复杂程度密切相关数据采集-侧向散射光25PPT课件当激光光源被使用时，侧向也有一定量的散射光产生，数据采集-侧外周全血细胞散射光双参数点图

颗粒杂质、气泡对检测的影响26PPT课件外周全血细胞散射光双参数点图

颗粒杂质、气泡26P细胞标记上荧光物质后，这种荧光物质要求特定波长的激发光来激发，同时发出特定波长的光荧光物质被激发以后产生的发射光将由特定的荧光通道来接收特定检测是通过光学滤片和透镜来控制的数据采集-荧光信号荧光强度是和细胞上标记上的荧光染料的量正相关27PPT课件数据采集-荧光信号荧光强度是和细胞上标记上的荧光染料的量正相数据采集28PPT课件数据采集28PPT课件电压

信号放大方式：log、lin信号类型：A,W,H电压的调节:根据阴性对照管来调节29PPT课件电压

信号放大方式：log、lin29PPT课件阈值可以以任意参数及多个参数的组合作为阈值大多数样本都可以设定FSC/SSC阈值以下的信号不存储根据阴性对照管来调节目的是将不需要的杂质信号，噪音信号，无用的细胞信号等扣除，使收集到的都是有用信号30PPT课件阈值可以以任意参数及多个参数的组合作为阈值30PPT课件31PPT课件31PPT课件32PPT课件32PPT课件补偿

补偿方式：任意两个通道之间，可以采用手动或自动补偿。补偿的调节:根据单染对照管来调节33PPT课件补偿

补偿方式：任意两个通道之间，可以采用手动或自动补偿。334PPT课件34PPT课件35PPT课件35PPT课件36PPT课件36PPT课件37PPT课件37PPT课件38PPT课件38PPT课件1.)Compensation-TooLittle;TooMuch39PPT课件1.)Compensation-TooLittle;2.)

BasicPrinciplesofCompensation-%Compensationisindependentoffluorescenceintensity40PPT课件2.)BasicPrinciplesofCompen3.)Compensation-

TooDim,TooBrightCompensationControlsSmallerrorsincompensationofadimcontrol(A)canresultinlargecompensationerrorswithbrightreagents(B&C).41PPT课件3.)Compensation-

数据分析流式数据直方图散点图等高线图密度图三维图统计数据42PPT课件数据分析42PPT课件直方图直方图(DistributionHistogram)横坐标代表荧光信号或散射光信号相对强度，单位是对数，可以是线性或对数坐标。纵坐标一般是细胞数。43PPT课件直方图直方图(DistributionHistogram)散点图散点图(DotPlot)X坐标为该细胞一参数相对含量，Y坐标为该细胞另一参数的含量，可以将细胞亚群分开。44PPT课件散点图散点图(DotPlot)44PPT课件等高线图和密度图45PPT课件等高线图和密度图45PPT课件三维图46PPT课件三维图46PPT课件统计数据Events百分比平均荧光强度荧光中位值CVSD……47PPT课件统计数据Events47PPT课件数据获取与分析电压阈值补偿获得数据画图设门统计48PPT课件数据获取与分析电压获得数据画图48PPT课件Thanks!49PPT课件Thanks!49PPT课件流式细胞仪背景知识

50PPT课件流式细胞仪背景知识

1PPT课件总览流式细胞术基本知识流式细胞仪的组成数据采集与分析51PPT课件总览流式细胞术基本知识2PPT课件流式细胞技术是什么？流式细胞术在流动的状态中检测细胞或颗粒的各项特性特异性强，灵敏度高，速度快，并能实现多参数分析可检测的样本种类多样：外周血，骨髓，细胞穿刺液，洗脱液，实体组织，培养细胞，微生物FlowCytometryFlow:FluidCyto:CellMetry:Measurement52PPT课件流式细胞技术是什么？流式细胞术FlowCytometry3流式细胞术检测样本0.4um40um53PPT课件流式细胞术检测样本0.4um40um4PPT课件流式细胞术检测指标

流式细胞术提供的信息：

-相对细胞大小

-相对细胞颗粒密度和内部复杂度

-染色过细胞的相对荧光强度54PPT课件流式细胞术检测指标

5PPT课件细胞结构细胞大小细胞粒度DNA含量与细胞周期RNA含量蛋白质含量染色体分析细胞功能细胞表面/胞浆/核的特异性抗原细胞活性细胞内细胞因子酶活性激素结合位点细胞受体细胞凋亡在上述信号基础上的细胞分选流式细胞术的应用55PPT课件细胞结构细胞功能在上述信号基础上的细胞分选流式细胞术的应用6流式细胞仪组成液流系统：形成层流系统，聚焦细胞光学系统：产生和收集光学信号电子系统：光信号转化为电信号，进行信号处理56PPT课件流式细胞仪组成7PPT课件FluidicsDiagramSheathFlowsheathtankSampleFlowsheathinteriorreservoirwasteinteriorreservoirsheathfiltersampleinjectiontube(SIT)testtubeorplateflowcellinterrogationpointbubblefilterwastetank57PPT课件FluidicsDiagramSheathFlowshe液流系统58PPT课件液流系统9PPT课件光学系统

激发光学系统包括:-激光器-透镜和反射镜，将激光引导到检测区域收集光学系统包括:滤光片，将产生的光信号引导到对应的光学接收器59PPT课件光学系统

激发光学系统包括:10PPT课件60PPT课件11PPT课件61PPT课件12PPT课件光学系统62PPT课件光学系统13PPT课件63PPT课件14PPT课件光学系统-滤光片460500540460500540460500540SP500LP500BP500/50

Longpass Shortpass Bandpass64PPT课件光学系统-滤光片46050054046065PPT课件16PPT课件66PPT课件17PPT课件电子系统LaserLaserLaserTimeVoltageTimeVoltageTimeVoltage67PPT课件电子系统LaserLaserLaserTimeVoltage电子系统68PPT课件电子系统19PPT课件电子系统69PPT课件电子系统20PPT课件Review悬浮状态的细胞单个流过流动室细胞被激发产生散射光和荧光信号信号被采集转换成数字信号存储于电脑上液流系统光学系统电子系统70PPT课件Review悬浮状态的细胞液流系统电子系统21PPT课件回顾流式细胞仪的三大组成部分？滤光片LP600代表什么意思？BP400/40呢？71PPT课件回顾流式细胞仪的三大组成部分？22PPT课件数据采集

三种数据：

-前向散射光FSC

-侧向散射光SSC

-各种荧光散射光FL1，FL2，FL3，FL472PPT课件数据采集

23PPT课件当使用激光光源时，在前向方向（和激光行进的方向相同）上可用前向散射光接收通道接收到一定量的散射光前向散射光的强度是和细胞或其他检测颗粒的大小、形状密切相关的数据采集-前向散射光73PPT课件当使用激光光源时，在前向方向（和激光行进的方向相同）上可用前当激光光源被使用时，侧向也有一定量的散射光产生，可以用90o

角的侧向散射光检测通道来采集侧向散射光的强度和细胞或其他检测颗粒的颗粒密度、内部复杂程度密切相关数据采集-侧向散射光74PPT课件当激光光源被使用时，侧向也有一定量的散射光产生，数据采集-侧外周全血细胞散射光双参数点图

颗粒杂质、气泡对检测的影响75PPT课件外周全血细胞散射光双参数点图

颗粒杂质、气泡26P细胞标记上荧光物质后，这种荧光物质要求特定波长的激发光来激发，同时发出特定波长的光荧光物质被激发以后产生的发射光将由特定的荧光通道来接收特定检测是通过光学滤片和透镜来控制的数据采集-荧光信号荧光强度是和细胞上标记上的荧光染料的量正相关76PPT课件数据采集-荧光信号荧光强度是和细胞上标记上的荧光染料的量正相数据采集77PPT课件数据采集28PPT课件电压

信号放大方式：log、lin信号类型：A,W,H电压的调节:根据阴性对照管来调节78PPT课件电压

信号放大方式：log、lin29PPT课件阈值可以以任意参数及多个参数的组合作为阈值大多数样本都可以设定FSC/SSC阈值以下的信号不存储根据阴性对照管来调节目的是将不需要的杂质信号，噪音信号，无用的细胞信号等扣除，使收集到的都是有用信号79PPT课件阈值可以以任意参数及多个参数的组合作为阈值30PPT课件80PPT课件31PPT课件81PPT课件32PPT课件补偿

补偿方式：任意两个通道之间，可以采用手动或自动补偿。补偿的调节:根据单染对照管来调节82PPT课件补偿

补偿方式：任意两个通道之间，可以采用手动或自动补偿。383PPT课件34PPT课件84PPT课件35PPT课件85PPT课件36PPT课件86PPT课件37PPT课件87PPT课件38PPT课件1.)Compensation-TooLittle;TooMuch88PPT课件1.)Compensation-TooLittle;2.)

BasicPrinciplesofCompensation-%Compensationisindependentoffluorescenceintensity89PPT课件2.)BasicPrinciplesofC