四川农业大学生物化学模拟练习题

.下列各三肽混合物，用阳离子交换树脂， pH梯度洗脱，哪一个最先被洗下来？ （选D）A.Met-Asp-Gln; B.Glu-Asp-Val;C.Glu-Val-Asp; D.Met-Glu-Asp.当要把Cys、Ser、Gly和His四种氨基酸吸附于阳离子交换树脂柱上时，应调到什么 pH值？（选A）A.pH4.0 B.pH6.0 C.pH8.0 D.pH10.0.在下列检测蛋白质的方法中，哪一种取决于完整的肽链？B.双缩月尿反应.酶的活性中心多为一凹穴， 其作用是为酶促反应营造一个疏水环境， 这种结构特征是蛋白质分子在哪个结构层次上形成的？ B.三级结构.在酶催化机理中，侧链基团既是一个很强的亲核基团， 又是一个很有效的广义酸碱基团的氨基酸是B.His.DNA分子中拓扑连环数（L）、螺旋总数（T）、超螺旋数（W）三个参数之间的关系为A.L=T+W.线粒体蛋白的跨膜运送是一种： D.通过对各个蛋白质专一的载体传送17.别构酶与不同浓度底物发生作用常呈 S型曲线，这说明：A.别构酶结合一个底物后，与下一个底物的结合能力增强19.下列关于凝胶层析的叙述哪一项是正确的？ B.凝胶层析可用于蛋白质分子量的测定6.氨基酸生物合成的调节，主要依靠③氨基酸合成途径中，酶的别构效应和阻遏效应.用双脱氧末端终止法测定DNA序列，要除去DNA聚合酶中的活性。②5'-3'外切酶.遗传密码中第几个碱基常常很少或不带遗传信息？ —③第三个.有一个环肽的组成是Ala、Asp、Gly、Phe、Leu、Val,下列方法中你首先选用什么方法作为你测定这一个肽的序列的第一步？②胰凝乳蛋白酶水解.蛋白质的碱水解导致—破坏。③Trp,Arg,His.测得核酸样品甲溶液的粘度远远大于同浓度的核酸样品乙溶液， 甲最可能是④DNA.线粒体内的细胞色素C是一种①内膜外周蛋白.酶反应速度对底物浓度作图，当底物浓度达到一定程度时，得到是零级反应，对此最恰当的解释是③酶的活性部位被底物所饱和.1997年，Prusiner因在研究的重大贡献而获得当年诺贝尔生理医学奖。 ①月元病毒的生物学传染性原理7.要把膜蛋白质分子完整的从膜上溶解下来可以用③去垢剂.利用基因工程手段，包括基因的定点突变改造蛋白质分子，使之具有更完善、更能符合人类需求的功能。这种技术和科学被称之为。②蛋白质工程.用[-32P]dATP标记一个DNA片段，需要用。③DNA聚合酶胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶）法：水解芳香族氨基酸的竣基侧肽键 （色Trp、酪Tyr、苯丙Phe）胰蛋白酶法：水解赖氨酸 Lys、精氨酸Arg的竣基侧肽键澳化脯法：水解蛋氨酸 Met竣基侧的肽键.磺胺药物能抑制病菌的生长是因为它是一种。②竞争性抑制剂.在寡聚蛋白质中，亚基间的主体排布、相互作用以及接触部位间的空间结构称为。③四级结构9.2,3一二磷酸甘油酸（DPG）通过3亚基的正电荷相互作用，使脱氧血红蛋白的四级结构趋于稳定。鸟类红细胞中含有一种不同于 DPG的调节分子，也能降低血红蛋白对氧气的亲和力。下列物质中哪种最有可能充当鸟类红细胞的调节分子？ ④乳酸1.蛋白质可与碱共热而水解，虽然这个过程会破坏一些氨基酸，但它却被常用来测定蛋白质中哪一种氨基酸的含量？ ③Trp3.二异丙基磷酰氟（DFP）是下列哪一类蛋白水解酶的专一性不可逆抑制剂①丝氨酸蛋白酶5.管体激素对机体的影响是激素与受体结合后通过什么方式而实现的？ ④真核调节基因转录7.膜蛋白与双脂层主要通过下列哪种力构成生物膜？④疏水作用10.氧化磷酸化和光合磷酸化的区别为： a.在细胞中进行部位不同 b.ATP酶在膜上定位的方向不同c.磷酸化所需的能量来源不同 d.电子供体和受体不同 e.能量转化过程中H,流动方向不同。（全选）.如果测定一个小肽的氨基酸顺序，下列试剂中最合适的是④PITC.超过滤与凝胶过滤是①两种性质不同，用处也不同的蛋白质制备方法.TPCK（N-对甲苯磺酰苯内氨酰甲基酮）是下列哪个酶的亲和标记试剂？②胰凝乳蛋白酶7.细胞内外钠钾的运送是属于①主动运输10.寡聚脱氧胸甘酸（oligodT）纤维素柱层析分离mRNA是属于③亲和层析12.DNA拓扑异构酶I型和II型的主要区别在于①I型使DNA的一条链发生断裂和再连接， II型使DNA的二条链同时发生断裂和再连接。.有一个蛋白质样品，经SDS及不连续PAGE检查均显一条带；N端分析及C端分析说明它只有一个端基；等电聚焦电泳中呈现一深一浅的两条带。一般情况下，这蛋白质样品最可能是②样品呈微不均一性.测定蛋白质在DNA上的结合部位常用 ④DNase1保护足迹分析法.对具有正协同效应的酶，其反应速度为最大反应速度 0.9时的底物浓度与反应速度为最大反应速度0.1时的底物浓度之比值应该是③<81.在染色体中DNA的构象主要是②B型.证明DNA是遗传信息携带者的科学家是 ③Avery、Macleod和McCarty.端粒酶是一种②反转录酶.蛋白质变性伴随有结构上的变化是②一些侧链基团的暴露.一个速度对底物浓度作图有 S型曲线的酶③不一定是别构酶.酶促反应降低反应活化能的能量来源是④酶构象变化所释放的能量.基因工程技术的创建成为可能是由于发现下列哪些酶？③II型限制性内切酶19.以下哪一个是正确的二—②线粒体内膜能通透H+离子由内向外22.有一个肽的组成是Ala、Asp、Gly、Leu、Val、Pro,它的N端是封闭的，下列方法中你首选用什么方法作为你测定这一个肽的序列的第一步？③竣肽酶水解24.腺甘酸环化酶存在于③质膜1.在酶的分离纯化中最理想的实验结果是下面哪一项？①纯化倍数高，回收率高.下列关于Z型DNA结构的叙述哪一个不正确？④它是细胞内DNA存在的主要形式 （表述正确的有：①它是左手螺旋②每个螺旋有12个碱基对，每个碱基对上升0.37nm③DNA的主链取Z字型）.下列关于DNA超螺旋的叙述哪一个不正确？②超螺旋密度为正值，表示DNA螺旋不足（正紧负松,其余表述正确的有：①超螺旋密度为负值，表示DNA螺旋不足③大部分细胞DNA呈负超螺旋④当DNA分子处于某种结构张力之下时才能形成超螺旋）.下列哪种技术常用于检测凝胶电泳分离后的限制性酶切片段？②Southernblotting.下列关于离子交换树脂的叙述哪一个不正确？④阳离子交换树脂可交换的离子是阴离子（其余表述正确的有：① 是人工合成的不溶于水的高分子聚合物 ②阴离子交换树脂可交换的离子是阴离子 ③有阳离子交换树脂和阴离子交换树脂两类）.在红细胞中，谷胱甘肽的氧化为什么会降低血红蛋白输氧的能力？③氧化形式的谷胱甘肽可使血红蛋白中的铁保持在正三价状态.下面关于竞争性抑制剂的论述正确的是④如果抑制作用发生，需它与底物反应以消除它对酶促反应的影响.不同的细胞对不同的第二信使产生不同的反应是因为不同的细胞具有 ②不同的酶组成.喝一杯浓茶或一杯浓咖啡会产生什么影响？ ②增强肾上腺素作用.预测下面哪种基因组在紫外线照射下最容易发生突变？②单链DNA病毒.测定酶促反应的初速度是为了③防止逆反应对结果分析所造成的影响.竣肽酶A促使底物的水解，下面哪个是其重要的机制？④通过结合Zn2+的活化水.下面关于某一种酶的几个同工酶的叙述正确的是 ? ②对同一底物具有不同专一性.下列哪种方法可得到蛋白质的“指纹图谱"④用胰蛋白酶水解，再进行纸层析或纸电泳TOC\o"1-5"\h\z2.纤维素柱层析分离蛋白质是根据蛋白质的分子大小。 （X）4.离子载体是异类可溶于脂双层的疏水性的小分子，它能增加脂双层对离子的通透性。 （J6.真核生物的基因不组成操纵子，不生成多顺反子 mRNA。（V）.正协同效应使酶促反应速度增加。 （X）.酶活性的测定实际上就是酶的定量测定。 （，）.将含有Asp、Gly、Thr、Lys和Leu的溶液（pH为3.0）加到预先用同样缓冲液平衡过的Dower-50阳离子交换树脂中，随后用该缓冲液洗脱此柱，5种氨基酸将按以下顺序洗脱下来：Asp、Thr、Gly、Leu和Lys。（V）.从理论上说，可用Edman降解法测定任何非封闭性多月t的全部氨基酸顺序。 （，）.真核细胞染色体DNA结构特点之一是具有重复序列，高度重复序列一般位于着丝点附近，通常不转录。（H.逆转录病毒的基因组RNA实际上是一种多顺反子mRNA。（，）TOC\o"1-5"\h\z.与蛋白酶不同的是，ribozyme的活性不需要有特定的三维结构。 （的5.操纵子学说适合于原核生物，又适合于真核生物，是说明基因调节的最好模型。 （凶7.生物膜象分子筛一样对大分子不能通过，对小分子能以很高的速度通过。 （X）9.线粒体内膜的电位是基质侧较负，胞液侧较正。 （，）内负外正12.因为密码子是不重叠的，所以基因也不重叠。 （X）7.酶反应中，底物类似物的抑制作用和过量底物的抑制作用基本上是相同的。 （X）10.镰刀型细胞贫血病是一种先天性遗传病，其病因是由于血红蛋白代谢发生障碍。 （X）4.利用过渡态类似物做半抗原，免疫动物获得抗体，从抗体中筛选具有催化活性的免疫球蛋白。这是迄今为止获得抗体酶的重要方法。 （M.结晶了的酶是纯酶。（X）.膜的独特功能由特定的蛋白质执行，功能越复杂的生物膜，膜蛋白含量越高。 （M.蛋白质折叠的主要驱动力是氢键。 （X）.SOD专一性的清除超氧物负离子，是细胞防御系统的重要组成部分。 （，）.在生物圈中，能量从光氧生物流向化氧生物，而物质在二者之间循环。 （，）.核糖体不仅存在于细胞质中，也存在于线粒体和叶绿体中。 （，）.RNA病毒不含有 DNA基因组，所以根据分子遗传中心法则，它必须先进行逆转录，才能复制和增殖。（X）.丝氨酸是蛋白质磷酸化位点，因此蛋白质中含有的丝氨酸残基均能被磷酸化。 （X）.蛋白质分子中的亚基也称为结构域。 （X）1.含有四个二硫键的胰脏核糖核酸酶，若用巯基乙醇和尿素使其还原和变性，由于化学键遭到破坏和高级结构松散，已经无法恢复其原有功能。 （X）.所有别构酶都是寡聚蛋白。 （储.一个基质连有Poly（u）配基的亲和层析柱，可方便的从细胞匀浆中分离出真核的 RNAo（V）10.反转录酶仅具有RNA指导的DNA聚合酶的活力。（X）1.某一生物样品，与茚三酮反应呈阴性 脯氨酸，羟脯氨酸，用羧肽酶 A和B作用后脯氨酸测不出游离氨基酸，用胰凝乳蛋白酶作用后也不失活。 因此可肯定它属非肽类物质。（X）.糖蛋白合成时蛋白质糖基化位点主要在 Ser、Asn残基上。（V）.酶的最适温度和最适pH都是酶的特征性常数。（X）.真核生物的基因不组成操纵子，不生成多顺反子 mRNA。（V）.NO是最小的信使分子之一。（M）TOC\o"1-5"\h\z.单克隆抗体和多克隆抗体的区别在于后者可以抗多种抗原。 （X）.米氏常数是酶与底物形成复合物的结合常数。 （X）.RNA不携带遗传信息。（X）.澳乙锭（EB）与双链DNA和某些有双链螺旋区RNA特异结合后，产生很强的荧光，是由于EB能插入到核酸碱基对之间。 （脑.核酸的生物功能都是通过与蛋白质的相互作用完成。 （X）.在所有病毒中，迄今为止，没有发现既含有 RNA、又含有DNA的病毒。（，）.迄今为止，发现所有的第二信使都是通过蛋白激酶起作用的。 （X）.在完整的红细胞悬浮液中， 即使加ATP、Na+和K+,也测不出Na+、K+-ATPase活力。（，）.同一种神经介质作用于不同靶细胞引起截然相反的作用，是因为靶细胞上受体不同。 （，）.激素与靶细胞中特异受体的结合亲和力很高，但大多是一种可逆反应。 （，）25.酶蛋白最适pH值只取决于酶蛋白本身的结构。 （X）IP3引起胞内 Ca2+的动员是其传递信号的方式。DNA局部构象常是 DNA—结合蛋白之间结合的标志。17．蛋白质可逆磷酸化在介导信号物质生理效应中起到中心枢纽的作用。19．产生限制性内切酶的细菌通过甲基化来保护自身的 DNA不被降解。20．密码子不重叠，但基因有可能重叠。3．因为丝氨酸，苏氨酸和酪氨酸都是蛋白质磷酸化的位点，因此所有蛋白质激酶均能使蛋白质中这三种氨基酸残基磷酸化。9．呼吸作用和光合作用均能导致线粒体或叶绿体基质值 pH升高。18．生物膜中胆固醇的作用是降低膜的流动性。．noncodingRNA（非编码RNA）是近年来发现的一类能够转录但不能编码蛋白质，具有特定功能的RNA分子，在细胞中执行着许多功能，其中微RNA（miRNA）和小干扰RNA（siRNA）越来越受到人们的关注与其他 RNA作用模式不同的是，他们均对编码 RNA有干扰作用。．核糖体循环．信号肽假说.mulecularchaperone（分子伴侣） 一类可以介导蛋白质正确折叠与装配，但其本身并不构成被介导蛋白质的组成部分的蛋白因子。．酶联免疫分析6．蛋白质组学是将酶作为标记物质，使其与抗原（或抗体）结合成酶 -抗原（或抗体）复合物，利用复合物与待测抗体（或抗原）专一且定量的结合关系，通过测定待测抗体（或抗原）结合的标记酶活力，从而计算出抗原（或抗体）的量。相应于基因组学，其是在整体水平上研究细胞内所有蛋白质的组成及其动态变化规律的新兴学科。．亲和标记法．Kcat型抑制剂根据酶与底物特异结合的性质，设计或合成一种含有反应基团的底物类似物作为活性部位基团的标记试剂，这种试剂象底物一样进入活性部位，接近结合位点，并以其活波的化学基团与活性部位的某一基团共价结合，而指示出酶活性部位的特征。四、问答题（任选作三题，多选不计分， 10X3=30）．阐述生物信息学的介入对核酸、蛋白质结构与功能研究的影响。.何谓guanylatebindingprotein?请写出其亚基组成、主要类型及各类型主要功能，并用箭头图示 guanylatebindingprotein偶联的受体信号传递途径。G蛋白:一般是指一类与膜受体偶联的异三聚体结合蛋白，其具有和GTP结合并催化GTP水解成GDP的能力，由&丫三个亚基组成，可充当细胞膜上受体和靶酶之间的信号传递体。①Gs：能活化腺甘酸环化酶（ACase）②Gi、Go、Gt系列：Gi:抑制ACase、电位门控Ca2+通道和磷脂酰肌醇专一的PLC,活化K+通道和Na+通道等；Go：抑制神经元Ca2+通道 Gt:活化cGMP专一的PDE③Gq系列：活化磷脂酰肌醇专一的 PLC④G12系列：功能不详，可能和活化JNK、Na+/K+交换系统和活化立早基因 转录有关．阐述 DNA指纹法（fingerprintting）为什么可用于不同个体基因组的比较？DNA指纹法是指：由限制性内切酶把很大的DNA分子降解成很多长短不同的较小片段，其数目和长度反映了限制性内切酶的切点在 DNA分子上的分布，它能作为某 DNA或含有这种DNA生物所特有的“指纹”。因为不同个体的等为基因之间碱基代换、重排、插入、缺失等都会引起这种“指纹的多态性。．一种分子量为150,000d的酶，其活性部位含有一个半胱氨酸残基。已知使 5ml含有1.2mg/ml的酶溶液完全失活需要3.0*10-2mg的碘乙酰胺（ICH2CONH2,分子量185d）.问该酶是由几个亚基组成的？1.2X5X185/3.0*10-2=37000150000/37000~4．从一种植物中叶中得到了粗酶提取液，每mL含蛋白质32mg。在提取条件下，10uL提取液的催化反应速度为 0.14^mol/min取50ml提取液用硫酸胺盐析分离。将饱和度0.3-0.6的沉淀物溶于10mL水中，此溶液的蛋白浓度为 50mg/mL,从中取出10uL,测定其反应速度为0.65umol/min。计算： 1）提取过程中酶的回收百分率； 2）酶的提纯倍数。（10分）1）粗提取液的总活力=0.14^mol/mn+（10uL*10-3）X50Ml=700IU盐析后的总活力=0.65mol/mh+（10uL*10-3）x10ML=650IU提取过程中酶的回收百分率 =650/700*100%=92.86%2）粗提取液白勺比活力=0.14（1mol/mh+（10uL*10-3）/32mg/Ml=7/16盐析后的比活力==0.65（1mol/mh+（10uL*10-3）/50mg/mL=1.3酶的提纯倍数=1.3+7/16=2.97．有一个七肽，经分析它的氨基酸组成是：Lys,Gly,Arg,Phe,Ala,Tyr,Ser。此肽未经胰凝乳蛋白酶处理时，与 FDNP反应不产生DNP-氨基酸。经胰凝乳蛋白酶（Phe,Tyr,Trp）处理后，此肽断裂成两个肽段，其氨基酸组成分别为 Ala,Tyr,Ser和Gly,Phe,Lys,Arg。这两个肽段分别与FDNP反应，可分别产生DNP-Ser和DNP-Lys。此肽与胰蛋白酶（Lys,Arg）反应，同样能生成两个肽段，它们的氨基酸组成分别是 Arg,Gly和Phe,Tyr,Lys,Ser,Ala。试问此七肽的一级结构是怎样的？给出分析过程。 ，并阐述理由。1）此肽未经胰凝乳蛋白酶处理时，与FDNP反应不产生DNP-氨基酸：此肽为环肽胰凝乳蛋白酶处理后，此肽断裂成两个肽段，其氨基酸组成分别为Ala，Tyr，Ser和Gly，Phe，Lys，Arg：（Ala-Ser）-Tyr或（Ser-Ala）-Tyr（）-Phe两个肽段分别与 FDNP反应，可分别产生 DNP-Ser和DNP-Lys：两个肽链的N末端为Ser-和Lys-4）可以得出这两个肽链为：Ser-Ala-Tyr；Lys-（）-Phe5）胰蛋白酶反应，能生成两个肽段，它们的氨基酸组成分别是Arg,Gly和Phe,Tyr,Lys,Ser,Ala：Gly-Arg；（）-Lys6）根据以上可得： Lys-Gly-Arg-Phe；Ser-Ala-Tyr-Lys所以推出：环肽Ser-Ala-Tyr-Lys--Gly-Arg-Pheprimaryactictansport直接利用细胞膜上的ATP将物质逆着浓度梯度转运noncodingRNAAFLP4、亲和层析5、具有酶活性受体6、拉氏构象图7、朊病毒8、结构域9、Hsp70系统.Hsp70系统Hsp70,Hsp40,GrpE（核甘酸交换因子），它们利用ATP水解供能来改变底物蛋白质结构，交换因子将 ADP重新生成ATP10、Kcat型不可逆抑制剂二、解答（8选5,5X6=30分）1、简述 DNA酶法测序的基本思路。2、DNA超螺旋形成的意义。3、简述糖蛋白的结构特点和主要功能。4、为什么说端粒酶是一种逆转录酶？5、胞内第二信使 Ca2+信号与cAMP信号产生和灭活的区别是什么？6、蛋白质凝胶过滤和超滤是一回事吗？请解 释。7、简述细胞信号转导的主要规律。细胞信号传递途径是一个复杂的网络系统，一种胞间信号被靶细胞质膜或胞内的受体接收，通过跨膜信号转导系统传入胞内，然后由一系列蛋白质传递于效应分子，产生预定的生物学效应。这样的信号传递途径实际上是一个把原初信号逐级放大的级联系统，使得一种胞间信号的微弱刺激可以引发下游千百种酶和转录因子的活性改变，导致生物体内明显的生理变化。8、设计实验判断可逆与不可逆抑制作用。三、问答（5选3,3X10=30分）1、为什么同工酶可以作为一种分子标记？试以 SOD的电泳方法为例阐述同工酶染色的原理及其优越性。2、绘出血红蛋白和肌红蛋白的氧合曲线图，根据各自氧合曲线的特点，对血红蛋白和肌红蛋白的结构和功能关系进行分析。3、阐述氧化磷酸化偶联的机制，比较线粒体氧化磷酸化与叶绿体光合磷酸化的异同。4、酶高效催化的根本原因是什么？有哪些影响因素？结合实例讨论影响酶催化效率的主要因素。5、试述细胞内蛋白质降解途径及其生物学意义。1.简述信号肽的特点和转运机制。信号肽具有两个特点：1）位于分泌蛋白前体的 N-端2）引导分泌蛋白进入膜以后，信号肽将被内质网腔内的信号肽酶切除信号肽的转运机制：信号肽运作的机制相当复杂，有关组分包括信号肽识别颗粒（ SRP）及其受体、信号序列受体（SSR）、核糖体受体和信号肽酶复合物。信号肽发挥作用时，首先是尚在延伸的、仍与核糖体结合的新生肽链中的信号肽与 SRP结合，然后通过三重结合（即信号肽与SSR的结合、SRP及其受体结合、核糖体及其受体的结合）。当信号肽将新生肽链引导进入内质网腔内后，在信号肽酶复合物的作用下，已完成使命的信号肽被切除。2.同工酶产生的原因是什么？研究同工酶有何意义？为什么可以用电泳的方法分离鉴定同工酶？初级同工酶产生的原因是由于酶蛋白的编码基因不同，次级同工酶产生的原因是虽然编码基因相同，但基因转录产物mRNA或翻译产物加工过程不同。1在遗传学和分类学上，同工酶提供了一种精良的判别遗传标志的工具；2在发育学上，同工酶有效的标志细胞类型及细胞在不同条件下的分化情况，以及个体发育和系统发育的关系。3在生物化学和生理学上，根据不同器官组织中同工酶的动力学、底物专一性、辅助因子专一性、酶的变构性等性质的差异，从而解释它们代谢功能的差异。4在医学和临床诊断上，体内同工酶的变化，可看作机体组织损伤、或遗传缺陷，或肿瘤分化的分子标记。因为同工酶的功能虽然相同， 但是其分子量和其所带电荷数有差异， 故可以用电泳的分析方法鉴定。.生物膜主要有哪些生物学功能？任举一例说明膜结构与功能的密切关系。生物膜的生物学功能可以概括如下：1）区域化或房室化 2）物质的跨膜运输 3）能量转换（氧化磷酸化） 4）细胞识别.研究蛋白质一级结构有哪些意义？蛋白质的一级结构即多肽链中氨基酸残基的排列顺序（ N端一C端）是由基因编码的，是蛋白质高级结构的基础，因此一级结构的测定成为十分重要的基础研究。 一级结构的特定的氨基酸序列决定了肽链的折叠模式，从而决定其高级结构，从而决定其功能。一级结构的种属差异与分子进化（细胞色素 C）一级结构的变异与分子病（镰刀状红细胞）.何iDDNA的变性、复性和杂交？DNA的杂交在生物化学和分子生物学研究中的应用？试举例说明。DNA变性是指在一系列物理化学因素作用下 DNA一级结构不变而二级结构中的氢键遭到破坏，DNA双螺旋结构部分解体，或全部解离成两条单链 DNA分子的过程，两股链成为无规则线团，叫变性。引起变性的外界条件消除后（如加热变性后再缓慢降温） ，已分开的双螺旋又可重新缔合成双螺旋，成为复性。不同来源的DNA分子放在一起热变性，然后慢慢冷却，让其复性，若这些异源DNA之间有互补的序列或部分互补的序列， 则复性使会形成杂交分子。 DNA与互补的RNA之间也可以发生杂交。核酸的杂交在分子生物学和生物化学中应用广泛，如将已知基因的 DNA制成具有同位素标记的DNA片段DNA探针，用其去检测未知DNA分子。1.蛋白质特定构象形成的原因是什么？环境因素对蛋白质构象形成有无影响？为什么？蛋白质特定构象形成的驱动力有 R-侧链基团间的相互作用；肽链与环境水分子的相互作用；天然构象的形成过程是一个自发的过程。环境因素对蛋白质构象形成有影响， 因为维持蛋白质高级结构的主要是氢键、 范得华力、疏水作用和盐键等次级键，环境因素会影响这些作用力的形成和大小， 从而影响蛋白质构象的形成。.试比较光合磷酸化和氧化磷酸化能量转化机制的异同。光合磷酸化的能量是来自光能的激发，是储存能量，氧化磷酸化能量是来自底物的分解，释放能量。.激素受体有哪两大类？试比较其信号转导机制。浜白耍——7 3［白质4初学作用含氮激素作用机制的第二信使学说：激素是第一信使，它可与靶细胞膜上具有立体构型的专一性受体结合，结合后激活膜上的腺甘酸环化酶系统，在 mg+存在的情况下腺甘酸环化酶促使ATP转化为cAMP,cAMP使无活性的蛋白激酶PKC激活，促使细胞内多种蛋白质发生磷酸化反应，从而引起靶细胞各种生理生化反应。类固醇激素作用机制的基因表达学说： 类固醇激素分子小、呈脂溶性，因此可透过细胞膜进入细胞。在进入细胞之后，先于细胞内的胞浆受体结合，形成激素 -胞浆受体结合物而进入细胞核内，再与核内受体结合，形成激素-核内受体复合物从而激发 DNA的转录过程，生成新的mRNA,诱导蛋白质的合成，引起相应的生物效应。6.分子筛层析和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳皆可用于测定蛋白质分子量，其原理有何差异？各自特点和适用范围。分子筛层析，又称凝胶层析、排阻凝胶层析、凝胶过滤， 利用凝胶把物质按分子大小不同进行分离的一种方法。由于被分离物质的分子大小（直径）和形状不同，洗脱时，大分子物质由于直径大于凝胶网孔而不能进入凝胶内部， 只能沿着凝胶颗粒间的孔隙， 随溶剂向下移动，因此流程短，首先流出层析柱， 而小分子物质，由于直径小于凝胶网孔，能自由进入胶粒网孔，使之洗脱时流程增长，移动速度变慢而后流出层析柱。可用于测定氨基酸，脱盐和浓缩，分离提纯生物大分子，除去热源物质SDS,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理是当 SDS与蛋白质结合后，蛋白质分子即带有大量的负电荷，并远远超过了其原来的电荷， 从而使天然蛋白质分子间的电荷差别就降低乃至消除了，与此同时蛋白质在 SDS作用下结构变得松散，形状趋向一致，所以各种SDS-蛋白质复合物在电泳时产生的脉动率差异，就反映了分子量的大小。可用于测PH值和蛋白质的亚基数???7.将四种二肽（Gly-Gly,His-His,Asp-Asp,Lys-Lys）的混合物先在PH5.6缓冲系统中进行电泳（I）,再转90。在PH7.2缓冲系统中进行电泳（II）,最后用苛三酮显色。请在下图中绘出该试验电泳图谱，并简述理由。3.什么是抗体？试以IgG的结构为例，分析抗体的重要功能，并简要说明抗体的多样性。当外源性物质，如蛋白质、毒素、糖蛋白、脂蛋白等进入人或动物体内时，机体的免疫系统便产生相应的免疫球蛋白并与之结合， 以消除异物的毒害，此反应为免疫反应，此异物便是抗原，此球蛋白便是抗体。抗体分子的多样性和独特的生物学功能都能从其分子结构上找出依据，以下以IgG为例来简单说明：）轻、重链。IgG呈Y型，由4条通过二硫键相连的肽链组成，其中包括两条相同的轻链和两条相同的重链。 一条重链的N-末端和相邻轻链协作形成一个抗原结合位点， 所以IgG共有2个抗原结合位点，是二价的。因而一个抗体分子可以和 2个抗原分子结合并交叉连接从而使抗原沉淀。）可变区和不变区。IgG每条链在N末端有一可变区，在 C末端有一不变区，由于重轻链N端形成了抗原结合位点，这些区域氨基酸序列的可变性使其在结构上具有某种程度的柔韧性，从而形成了结合不同抗原的不同专一性结合位点。）抗体的结构域。轻链折叠形成 2个紧密的三维结构域，一个代表可变区，另一个代表不变区，每条重链可形成 4个结构域，一个可变区和三个不可变区。）Fab和Fc片段。木瓜蛋白酶消化IgG释放出Y型分子的两个臂，各含一个抗原结合位点，叫做Fab片段，因为Fab只有一个抗原结合位点，所以不能与抗原交叉连接。释放出的Y型分子的柄部称为Fc片段，它由两条重链的C端组成，易于结晶。Fc有触发破坏抗原的作用。例如触发补体系统和诱导白细胞吞噬病原。4.什么是受体？有何特征和类别？简述一种分离提纯受体的方法、原理。受体是细胞内或细胞表面的一种天然分子，可以识别并特异地与有生物活性的化学信号分子（配体）结合，从而激活或启动细胞内一系列生物化学反应最后导致该信号物质特定的生物效应。绝大多数受体为蛋白质，极少数是非蛋白受体。受体与配体结合具有特异性、亲和性、饱和性受体分为细胞内受体（甾醇类激素）和细胞外受体（离子型通道受体、G蛋白偶联型受体、具有酶活性的受体）。分子克隆技术提取微量受体：从细胞中提取所有微量 mRNA逆转录成cDNA，将其重组入载体质粒子，继而让其转染缺乏受体的培养细胞群，其中少数细胞可能还有能编码受体所需的cDNA，并表达成表面受体。1.有一种七肽具有神经传导抑制剂的作用，其氨基酸组成为Ala5、Phe1、Lys1，七肽与FDNB反应后经酸水解，释放出DNP—Ala。用胰蛋白酶处理产生组成为Ala3、Phe1的四肽和组成为Ala2、Lys1的三肽。与胰凝乳蛋白酶作用则生成游离的Ala和一个六肽。试推导出该七肽的氨基酸序列。）七肽与FDNB反应后经酸水解，释放出DNP—Ala：N末端是Ala-2）与胰凝乳蛋白酶作用则生成游离的 Ala和一个六肽：C末端是-Phe*la3）用胰蛋白酶处理产生组成为Ala3、Phe1的四肽和组成为Ala2、Lys1的三肽：Ala-Ala-Phe刊a和Ala-Ala-Lys所以推除Ala-Ala-Lys-Ala-Ala-Phe刊a胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶）法：水解芳香族氨基酸的竣基侧肽键 （色Trp、酪Tyr、苯丙Phe）胰蛋白酶法：水解赖氨酸 Lys、精氨酸Arg的竣基侧肽键溴化脯法：水解蛋氨酸 Met羧基侧的肽键.画出肌红蛋白（Mb）和血红蛋白（Hb）的氧合曲线，并讨论各自氧合曲线与其功能相关性。4.什么是双信使信号转导系统，试述胞外信息通过该系统在胞内得以传递的机制。

评脂做？ITHE _£评脂做？ITHE _£ MIE生理生化反应 激素通过结合到细胞表面的膜受体上，激活 G蛋白，G蛋白开启磷酯酶C（PLC）的活性，从而使磷酸酰肌醇（PIP2）分解为肌醇三磷酸（IP3）和二酰甘油（DG）。DG进一步活化PKC,促使靶蛋白中的Thr和Ser残基磷酸化，最终改变一系列酶的活性，引起生理生化反应。IP3则作用于内质网膜受体，打开 Ca+离子通道，升高胞质内【Ca+1,Ca+的释放改变CaM和其他钙传感器的构象，使之变得更容易与靶蛋白结合， 改变靶蛋白的生物活性，从而完成激素的联级放大作用，在多种细胞内引起广泛的生理效应。Ca+的释放也活化了PKC,从而改变一系列酶的活性，引起生理生化反应。5.试述三种直接或间接的方法，以证明某种外源基因已在转基因生物中存在或表达。1）载体特征的直接筛选：通常载体都带有可选择的遗传标志，最常用的有抗药性标记、营养标记和显色标记。对噬菌体而言，噬菌斑的形成则是其自我选择的结果。2）差别杂交或扣除杂交法分离克隆基因： 扣除杂交就是用一般细胞的 cDNA与特殊细胞的cDNA杂交先扣除一般共有的cDNA,再将剩余的特异的cDNA进行克隆。3）免疫学方法：用放射性固定酶或发光物质标记抗体，可以十分灵敏检测到外源基因的存在或表达。4）细菌菌落或噬菌斑的原位杂交： 细菌菌落一一复印至硝酸纤维素膜上一一 aOH使菌体裂解，DNA变性，然后中和一一单链DNA结合到膜上一一32P-CDNA杂交一一放射自显影一一与放射性cDNA杂交的菌斑。某天然九肽，其组成为： Gly2、Phe2、Tyr1>Met1、Asp1、Arg1、Pro1,经胰凝乳蛋白酶水解后可分得一个五肽和一个四肽， 四肽的组成为Phe1、Tyr1>Gly1和Pro1。此九肽的CNBr处理产物再经阳离子交换树脂层析并洗脱得一个组成为 Arg1、Phe1、Gly1的三肽，此九肽经胰蛋白酶水解可得 Phe,如用FDNB反应后再水解得DNP-Tyr。请写出这九肽的全顺序，并阐述解析过程。Tyroo-Phe-Asp-Met-Gly-Arg-Phe什么是核酶和抗体酶？它们和酶有什么不同？核酶，把对RNA具有催化活性的RNA叫做核酶，化学本质为RNA,一般酶化学本质为蛋白质。抗体酶，又称催化抗体，是指通过一系列生物化学技术方法制备出的具有催化活性的抗体，它除了具有相应的免疫学性质外还具有类似于酶能催化某种活化反应的性质， 在一般酶基础之上还具有相应免疫学性质。某一均一的DNA样品，用EcoRI、HpeII、HindIII3种限制性内切酶及它们的组合进行酶切，测出得到的DNA片段的大小如下：EcoRI——————1.3kb（x2）HpeII——————2.6kbHindIII——————2.6kbEcoRI+HpeII——————0.5kb 0.8kb 1.3kbHpeII+HindIII——————1.2kb 1.4kbEcoRI+HpeII+HindIII——————0.5kb0.6kb 0.7kb 0.8kb指出这种分子是线性还是环形的，并绘出限制性图谱。试分析同源细胞色素 C结构的种属差异和保守性，阐明其结构和功能的统一性。对比不同有机体中表现同一功能的蛋白质的氨基酸序列，结果发现它们不仅长度相同或相近，而且其中许多位置的氨基酸对于不同种属来说都相同，称为不变残基，其他部位的残基对于不同种属则有相当大的变化，称为可变残基。同源蛋白质的氨基酸序列中的这种相似性被称为顺序同源性。不变残基对于同源蛋白质的功能是必须的，可变残基的变化虽不影响蛋白质的功能，却反映了这些种属在系统上的联系，细胞色素C三级结构的保守性。35个不变的AA残基，是细胞色素 C的生物功能所不可缺少的。其中有的可能参加维持分子构象，有的可能参与电子传递，有的可能参与“识别”并结合细胞色素 C还原酶和氧化酶。细胞表面受体主要有哪些类型？各具有什么特点，作用机理有何区别？离子通道性蛋白（配体闸门通道）：配体结合 通道打开G-蛋白偶联型受体： 配体结合受体构象发生改变——G蛋白激活——靶酶激活具有酶活性的受体：配体结合 酶激活1.叙述血红蛋白的结构特征。这种结构和它的功能有什么关系？血红蛋白和氧的结合受哪些因素的影响？人体内的血红蛋白由四个亚基组成，分别为两个 a亚基和两个3亚基，自动组装成 《2例形态。血红蛋白的每个亚基由一条肽链和一个血红素分子构成，肽链盘绕折叠成球形，把血红素分子包在里面（这条肽链盘绕成的球形结构又叫珠蛋白），血红素分子是一个具有卟啉结构的小分子，在其中心有一个亚铁离子。血红蛋白与氧结合：首先，一个氧分子与血红蛋白中的一个亚基结合，与氧结合之后的珠蛋白结构发生变化，造成整个血红蛋白结构的变化，这种变化使得第二个氧分子相比于第一个氧分子更容易寻找到血红蛋白的另一个亚基结合，而它的结合会进一步促使第三个氧分子的结合，以此类推，直至构成血红蛋白的四个亚基分别与四个氧分子结合。在组织内释放氧的过程也是这样，一个氧分子的离去会刺激另一个的离去，直至完全释放所有的氧分子。什么是遗传信息传递的中心法则？你认为用中心法则描述的遗传信息传递规律还有哪些问题有待补充？为什么说朊病毒的发现是对此法则的挑战？目前普骗认为遗传信息不能从蛋白质流向核酸，但是 DNA是否可以不经过RNA直接作为指令蛋白质合成的模板，尚待实验证明。Prion朊病毒是一类高度保守的糖蛋白，其广泛表达于脊椎动物，且与神经系统功能的维持、淋巴细胞信号转导、核酸代谢等有关；当其发生构象改变之后可变成致病性朊病毒 （PrPsc），PrPsc可引起包括疯牛病在内的一系列致死性神经变性疾病（统称 prion病）。以a螺旋为主的对蛋白酶敏感的不具有感染能力的 PrPC转变成以3片层为主的对蛋白酶抵抗的具有感染能力的不溶性 PrPSc。少量PrPsc与细胞PrPC结合后，以PrPsc为模板，使PrPC发生明显构象改变而转变为 PrPsc,从而达到PrPsc传染扩增的目的，最后使PrPC全部转变成不溶性的PrPsc,脑组织形成淀粉样斑块直至死亡迄今，人类已发现的传染病病原体都含有核酸，它们的扩增繁殖都遵循遗传信息流的中心法则。而PrPsc不含核酸，它是通过与 PrPc相互作用，诱导其变构而转变成 PrPsc,从而实现自身增殖 ,其增殖过程不涉及核酸复制，可见这与中心法则明显相左。2.试举一例，简要说明在生命活动的一些重要过程中是如何通过蛋白质 （或酶 ）与核酸的相互作用而实现某一功能的。基因在表达其性状的过程中贯串着核酸与核酸、核酸与蛋白质的相互作用。DNA复制时,双股螺旋在解旋酶的作用下被拆开 ,然后 DNA聚合酶以亲代 DNA链为模板,复制出子代 DNA链。转录是在RNA聚合酶的催化下完成的。转译的场所核糖核蛋白体是核酸和蛋白质的复合体，根据 mRNA的编码，在酶的催化下，把氨基酸连接成完整的肽链。基因表达的调节控制也是通过生物大分子的相互作用而实现的。如大肠杆菌乳糖操纵子上的操纵基因通过与阻遏蛋白的相互作用控制基因的开关。真核细胞染色质所含的非组蛋白在转录的调控中具有特殊作用。正常情况下，真核细胞中仅2〜15%基因被表达。阐述核酸、蛋白质一级结构研究和大规模测序的必要性及其对生命科学发展的重要影响核酸和蛋白质的一级结构研究和大规模测序，可以帮助我们正确认识核酸、蛋白质的高级结构，从结构到功能，从而认识核酸和蛋白质的功能。核酸和蛋白质复杂的组成和结构是其生物学功能多样性的基础，而蛋白质和核酸独特的性质和功能则是其结构的反映因为生物的遗传信息储存于DNA的核苷酸序列中，生物界物种的多样性寓于 DNA分子四种核苷酸千变万化的不同排列之中。测定DNA分子上四种核苷酸的排列顺序即DNA序列，是分子生物学家多年要解决的重要问题，蛋白质的构象归根结底取决于它的AA序列和周围环境的影响，因此研究蛋白质一级结构与功能的关系具有十分重要的意义。分离纯化得到一种蛋白质，至少设计两条路线，来克隆出该蛋白质的基因或 cDNA。）测出氨基酸的序列——合成cDNA探针——用Southern印迹法筛选DNA文库基因2）作为抗原，制备专一的抗体——沉淀核糖体，分离 mRNA——对应的cDNA文库什么是第二信使假说？如果你在研究某种激素的作用机理时，你得到一种小分子物质，如何证明它是一种新的第二信使？激素与受体结合，使 G蛋白活化，进而再使 ACase活化，催化ATP形成cAMP，作为第二信使的cAMP再经一系列的相关反应级联放大，即先激活细胞内的蛋白激酶，再进一步诱发各种功能单位产生相应的反应。cAMP起着信息的传递和放大作用，激素的这种作用方式叫做第二信使假说。胞内信号分子是胞间信号被细胞表面受体接受后，激活同样处于膜上的酶或离子通道而产生的，这样才能完成跨膜的信号转换，最后导致细胞反应，如果我们把胞间信号分子作为第一信使，则细胞内信号分子正是充当了第二信使的作用。取新鲜猪血50ml，离心收集红细胞，经多步分离纯化步骤获得25mg超氧化物歧化酶 （SOD）制剂，将其溶于 5ml水中，从中取出0.1ml用邻苯三酚自氧化法测定SOD活性。测得每分钟邻苯三酚自氧化率加酶前后分别为0.07/min和0.06/min，反应液体积为10ml；另取0.1ml酶液用考马斯亮蓝法测得蛋白质含量为0.40mg。计算所得SOD制剂的总活力单位数及其比活力。（SOD活力单位定义为：每毫升反应液中，每分钟抑制邻苯三酚自氧化率达 50%的酶量）高级生物化学试题1998级.下列单链DNA片段中哪一个在双链状态下可以形成回文结构？①ATGCCGTADATGCTACGDGTCATGAC®GTATCTAT.蛋白质的分子量可以用沉降系数 S表示，1S=10X10-3①s ②cm③cm/s④秒.某酶有四种底物（S）,其km值分别如下，该酶的最适底物为① 5X10-5 ②1X10-5 ③ 10X10-5 ④0.1X10-5.胰岛素受体和一些生长因子受体也是一种酶，它是①酪氨酸激酶 ②丝氨酸或苏氨酸激酶 ③腺甘酸环化酶④硝酸化酶.在接近中性pH的条件下，下列哪种基因既可作为 H+的受体，又可作为H+的供体？①His-咪陛基②Lys-*-氨基③Arg-月瓜基④Cys-疏基.氨基酸生物合成的调节，主要依靠①氨基酸合成后的化学修饰 ②氨基酸合成后的脱氨基和转氨基作用 ③氨基酸合成途径中，酶的别构效应和阻遏效应.物质跨膜主动运输是指传送时①需要ATP②需要有负责传送的蛋白质 ③消耗能量（不单是ATP）④在一定温度范围内传送速度与绝对温度的平方成正比.用双脱氧末端终止法测定 DNA^列，要除去DNA聚合酶中的活性。①核酸内切酶②5'-3'外切酶③3'-5'外切酶④核酸酶.遗传密码中第几个碱基常常很少或不带遗传信息？①第一个②第二个③第三个④第四个.有一个环肽的组成是 Ala、Asp、Gly、PheLeu2、Val,下列方法中你首先选用什么方法作为你测定这一个肽的序列的第一步？①胰蛋白酶水解②胰凝乳蛋白酶水解 ③澳化氢裂解④竣肽酶水解是非题.一般讲，从DNA分子的三联体密码中可以推定氨基酸的顺序，相反，从氨基酸的顺序也可以毫无疑问的推出DNA顺序。（）TOC\o"1-5"\h\z.所有生物催化剂都是蛋白质。 （）.蛋白质分子中个别氨基酸的取代未必会引起蛋白质活性的改变。 （）.具有正协同效应的酶，其Hill系数总是大于1的。（）.操纵子学说适合于原核生物，又适合于真核生物，是说明基因调节的最好模型。 （）.ATP不是化学能量的储存库。（）.生物膜象分子筛一样对大分子不能通过，对小分子能以很高的速度通过。 （）.一个蛋白质样品，在某一条件下用电泳检查， 显示一条带，因此说明该样品是纯的。（）.线粒体内膜的电位是基质侧较负，胞液侧较正。 （）.DNA半不连续复制是指复制时一条链的合成方向是 5-3而另一条则是3-5o（）.基因表达的最终产物不一定都是蛋白质。 （）.因为密码子是不重叠的，所以基因也不重叠。 （）名词解释.蛋白质超二级结构2.sanger反应3.ribozyme4.顺反子5.基因文库6.引发体7.限制性内切酶8.分子病9.增色效应与减色效应 10.固定化酶11.解偶连作用12.亲和层析问答题.简述信号肽的特点和转运机制。.同工酶产生的原因是什么？研究同工酶有何意义？.生物膜主要有哪些生物学功能？任举一例说明膜结构与功能的密切关系。.研究蛋白质一级结构有哪些意义？.何iDDNA的变性、复性和杂交？ DNA的杂交在生物化学和分子生物学研究中的应用？试举例说明。.有一蛋白质在某一组织内含量较低，很难分离提纯，现已知其分子量并具有该蛋白质的抗体，问用哪些实验方法可以初步证明该组织内确含有该蛋白质？单项选择.蛋白质的碱水解导致破坏。①His,Asp,Glu②Trp,Asn③Trp,Arg,His④Lys,Thr,Ser.测得核酸样品甲溶液的粘度远远大于同浓度的核酸样品乙溶液，甲最可能是①变性DNA②RNA③变性RNA④DNA.线粒体内的细胞色素C是一种①内膜外周蛋白②内膜内在蛋白③基质可溶蛋白.酶反应速度对底物浓度作图，当底物浓度达到一定程度时，得到是零级反应，对此最恰当的解释是①形变底物与酶产生不可逆结合 ②酶与未形变底物形成复合物 ③酶的活性部位被底物所饱和④过多底物与酶发生不利催化反应的结合5.1997年，Prusiner因在研究的重大贡献而获得当年诺贝尔生理医学奖。①肮病毒的生物学传染性原理 ②氧化氮的信号分子作用 ③G蛋白及其信号分子作用④单个细胞膜离子通道.对一个克隆的DNA^段做物理图谱分析需要用①核酸外切酶②限制性内切酶③DNA连接酶④DNA聚合酶.要把膜蛋白质分子完整的从膜上溶解下来可以用①蛋白水解酶②透明质酸酶③去垢剂④糖甘酶.用双脱氧末端终止法测定DNA^列，要除去DNA聚合酶中的活性。①核酸内切酶②5'-3'外切酶③3'-5'外切酶④核酸酶.免疫球蛋白经水解后，可以获得一个具有抗体结合位的 Fc片段和两个与抗原结合的Fab抗原结合点。①木瓜蛋白酶②5-3外切酶③3-5外切酶④胃蛋白酶.非竞争性抑制剂使①Vmax不变,Km变大②Vmax变小，Km不变③Vmax变小，Km变小④Vmax变大，Km变大二、是非题.肌红蛋白和血红蛋白的亚基在一级结构上有明显的同源性，它们的构象和功能也十分相似，所以它们的氧合曲线也是相似的。 （）.有一条肽链的氨基酸顺序为 Glu-Asp-Arg-Ala-Try-Lys-Asn-Ser-Arg-Thr-Met-His,用胰蛋白酶水解可以得到 4个肽段。（）.真核细胞中，细胞内Na+浓度比细胞外低，细胞外K+浓度比细胞内低。（）.用定位点突变方法得到缺失某一个氨基酸残基突变体，这个突变的酶蛋白不再具有催化活性，因此可以认为该缺失残基一定是酶结合底物的必需基团。 （）.所有转录产物中，除编码序列外的核甘酸在后加工时都必须切除，才能得到有翻译功能的mRNA（）TOC\o"1-5"\h\z.电子通过呼吸链释放能量偶联 ATP生成的反应是不可逆反应。 （）.酶反应中，底物类似物的抑制作用和过量底物的抑制作用基本上是相同的。 （）.具有正协同效应的酶，其Hill系数总是大于1。（）.突变是遗传物质的畸变，点突变时有一个碱基的改变，一定会导致氨基酸顺序的改变。（）.镰刀型细胞贫血病是一种先天性遗传病，其病因是由于血红蛋白代谢发生障碍。 （）三、名词解释1.信号肽/导肽2.Km/Tm3.DNA文库/cDNA文库4. 超二级结构/结构域5.主动运输/被动运输6.PCR/RAPD7. 化学酶工程/生物酶工程8.胞间信号/胞内信号四、问答题.蛋白质特定构象形成的原因是什么？环境因素对蛋白质构象形成有无影响？为什么？.试比较光合磷酸化和氧化磷酸化能量转化机制的异同。.激素受体有哪两大类？试比较其信号转导机制。.同工酶产生的原因是什么？研究同工酶的意义？.画出tRNA的二级结构模式图，标明其关键功能部位， 并阐述其在蛋白质合成中结构和功能的统一性。.分子筛层析和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳皆可用于测定蛋白质分子量， 其原理有何差异？各自特点和适用范围。.将四种二肽（Gly-Gly,His-His,Asp-Asp,Lys-Lys）的混合物先在PH5.6缓冲系统中进行电泳（I）,再转90。在PH7.2缓冲系统中进行电泳（II）,最后用苛三酮显色。请在下图中绘出该试验电泳图谱，并简述理由。高级生物化学试题1999级一、单项选择.利用基因工程手段，包括基因的定点突变改造蛋白质分子，使之具有更完善、更能符合人类需求的功能。这种技术和科学被称之为。①遗传工程②蛋白质工程③细胞工程④蛋白质分子结构的预测.用["p]dATP标记一个DNM段，需要用。①多核甘酸激酶②DNA1接酶③DNA聚合酶④逆转录酶.胰蛋白酶专一水解蛋白质中肽键部位是。①碱性残基N端②酸性残基N端③碱性残基C端④酸性残基C端.磺胺药物能抑制病菌的生长是因为它是一种。①不可逆抑制剂②竞争性抑制剂③反竞争性抑制剂④非竞争性抑制剂.在寡聚蛋白质中，亚基间的主体排布、相互作用以及接触部位间的空间结构称为 c①三级结构②缔合现象③四级结构④变构现象.核酸翻译时可以从任一核甘酸起始读码， 人工合成的（AAC）n（n为任意整数）多聚核甘酸，

能够翻译出几种多聚氨基酸？①一种②二种③三种④四种.有一个环肽的组成是Ala、Asp、Gly、Met、Leu2、Val,下列方法中你首先选用什么方法作为你测定这一个肽的序列的第一步？①胰蛋白酶水解 ②胰凝乳蛋白酶水解③澳化氢裂解④竣肽酶水解.下列有关糖蛋白中糖链部分生物学功能的论述，哪一个是错误的？①在细胞识别中糖链部分起着识别信号的作用 ②糖链的引入增加了糖蛋白酶水解作用的能力③糖链是酶活性中心的组成部分④糖链对糖蛋白的构象稳定起一定的作用.2,3一二磷酸甘油酸（DPG）通过3亚基的正电荷相互作用，使脱氧血红蛋白的四级结构趋于稳定。鸟类红细胞中含有一种不同于 DPG的调节分子，也能降低血红蛋白对氧气的亲和力。下列物质中哪种最有可能充当鸟类红细胞的调节分子？①6-P-G ②IP6③磷酸④乳酸10.蛋白质的分子量可以用沉降系数 S表示，1S=10X10-3①s ②cm③cm/s④秒二、是非题.固醇类激素的作用机制是细胞膜上的受体相互作用，再通过细胞内的第二信使对细胞发生调节作用。（）TOC\o"1-5"\h\z.基因表达的最终产物不一定是蛋白质。 （）.所有的生物催化剂都是蛋白质。 （）.利用过渡态类似物做半抗原，免疫动物获得抗体，从抗体中筛选具有催化活性的免疫球蛋白。这是迄今为止获得抗体酶的重要方法。 （）.突变是遗传物质的畸变，点突变时有一个碱基的改变，一定会导致氨基酸顺序的改变。（）.生物膜象分子筛一样对大分子不能通过，对小分子能以很高的速度通过。 （）.线粒体内膜ATP酶和叶绿体ATP酶具有相似的结构，氧化磷酸化和光合磷酸化也具有相似的机理。（）.诱导契合学说能很好的解释酶专一性的机理。 （）型抑制剂5.型抑制剂5.信号肽拓扑异构酶.肮病毒（prion）2.HGP3.RFLP4.Kat.DNA文库7. 化学渗透学说 8.四、问答题.试述同工酶产生的原因及其生物学意义？为什么可以用电泳的方法分离鉴定同工酶？.研究蛋白质、核酸一级结构有何意义？试对蛋白质、 核酸的一级结构测定战略进行比较?.什么是抗体？试以IgG的结构为例，分析抗体的重要功能，并简要说明抗体的多样性。.什么是受体？有何特征和类别？简述一种分离提纯受体的方法、原理。.DNA半保留复制的机理是通过哪些重要的实验证明的？该复制方式的揭示有何意义？高级生物化学试题2000级一、单项选择.蛋白质可与碱共热而水解，虽然这个过程会破坏一些氨基酸，但它却被常用来测定蛋白质中哪一种氨基酸的含量？①Ser②Cys③Trp④Tyr.激素对靶细胞的专一性效应主要取决于①受体的有无②受体的活化③受体量的多少④受体的结构.二异丙基磷酰氟（DFP）是下列哪一类蛋白水解酶的专一性不可逆抑制剂？①丝氨酸蛋白酶②萌基蛋白酶③天冬氨酸蛋白酶.对一个克隆的DN端段做物理图谱分析需要用①核酸外切酶②限制性内切酶③DNA连接酶④DNA聚合酶.管体激素对机体的影响是激素与受体结合后通过什么方式而实现的？①cAMP第二信使作用②磷酸肌醇的级联反应③激活酪氨酸激酶④真核调节基因转录.关于遗传密码的破译工作，下列论述哪些是正确的？①遗传密码的破译归功于Nirenbergh和Khorana的开拓性工作。②无细胞蛋白质合成体系的建立使破译遗传密码成为可能。 ③利用核糖体结合技术破译了大部分密码子， 用人工合成的重复序列多聚核甘酸为模板，检查氨基酸渗入情况，破译了全部遗传密码。④幸运的是，所用的无细胞蛋白质合成体系含有相当高浓度的 Mc2+,外加的人工模板无需起始信号就可以开始指令氨基酸渗入。.膜蛋白与双脂层主要通过下列哪种力构成生物膜？①氢键②离子键③共价键④疏水作用.以下哪些实验在说明核酸是遗传物质方面起了决定性作用？①O.T.Avery等（1944年），肺炎球菌转化实验②Chargaff（1950年），DNA^基组成研究③Hershey和Chase（1951年），同位素示踪T2噬菌体感染大肠杆菌的试验④Wilkins和Franklin（1953年），DNAx-射线晶体衍射研究。.下列哪个不是推导米氏方程的假设条件？①测定速度为反应的初速度②[So]>>[E]③ES水解生成E+S的速度显著快于ES形成P+E的速度，或称之为“快速平衡学说”④ 当反应达到稳定状态时，中间产物ES的形成速度不等于其分解速度。.氧化磷酸化和光合磷酸化的区别为： a.在细胞中进行部位不同b.ATP酶在膜上定位的方向不同c.磷酸化所需的能量来源不同 d.电子供体和受体不同e.能量转化过程中H+流动方向不同。以上正确的为：①a、b、c②a、c、e③b、c、d、e④a、b、c、d、e、是非题TOC\o"1-5"\h\z.同工酶在电泳时迁移率相同。 （）.结晶了的酶是纯酶。（）.膜的独特功能由特定的蛋白质执行，功能越复杂的生物膜，膜蛋白含量越高。 （）.SDS—PAGEM定蛋白质分子量的方法是根据蛋白质分子所带的电荷不同。 （）.反竞争性抑制剂是既能改变酶反应速度，又能改变酶 Km的一种抑制剂。（）.蛋白质折叠的主要驱动力是氢键。 （）.SOD专一性的清除超氧物负离子，是细胞防御系统的重要组成部分。 （）.在生物圈中，能量从光氧生物流向化氧生物，而物质在二者之间循环。 （）.核糖体不仅存在于细胞质中，也存在于线粒体和叶绿体中。 （）.RNA病毒不含有DNA基因组，所以根据分子遗传中心法则，它必须先进行逆转录，才能复制和增殖。（）.丝氨酸是蛋白质磷酸化位点，因此蛋白质中含有的丝氨酸残基均能被磷酸化。 （）.蛋白质分子中的亚基也称为结构域。 （）三、解释下列名词1.分子伴侣2.PCR3.Na+.K+—ATPase4.生物传感器ribozyme6.受体7.cDNA文库8. 原级同工酶四、问答题.有一种七肽具有神经传导抑制剂的作用， 其氨基酸组成为Ala5、Phe1、Lys1,七肽与FDNB反应后经酸水解，释放出 DNP-Ala。用胰蛋白酶处理产生组成为 Ala3、Phe1的四肽和组成为Ala2、Lys1的三肽。与胰凝乳蛋白酶作用则生成游离的 Ala和一个六肽。试推导出该七肽的氨基酸序列。.画出肌红蛋白（Mb）和血红蛋白（Hb）的氧合曲线，并讨论各自氧合曲线与其功能相关性。.简述人类基因组计划（HGP）的概况，并结合自己的专业，阐述它对生命科学发展的意义。.什么是双信使信号转导系统，试述胞外信息通过该系统在胞内得以传递的机制。.试述三种直接或间接的方法，以证明某种外源基因已在转基因生物中存在或表达。.解释为什么测定酶活力时一定要测定初速度，且一般以测定产物增加最为宜。高级生物化学试题2001级一、单项选择.蛋白质可与碱共热而水解，虽然这个过程会破坏一些氨基酸，但它却被常用来测定蛋白质中哪一种氨基酸的含量？①Ser②Cys③Trp④Tyr.如果测定一个小肽的氨基酸顺序，下列试剂中最合适的是①苛三酮②CNBr③胰蛋白酶④PITC.超过滤与凝胶过滤是①两种性质不同，用处也不同的蛋白质制备方法 ②同一性质，表现方法不同的蛋白质制备方法③同一种方法的两个名词.TPCK（N-对甲苯磺酰苯内氨酰甲基酮）是下列哪个酶的亲和标记试剂？①胰蛋白酶②胰凝乳蛋白酶③甘油醛一3-磷酸脱氢酶④溶菌酶.利用基因工程手段，包括基因的定点突变改造蛋白质分子，使之具有更完善、更能符合人类需求的功能。这种技术和科学被称之为。①遗传工程②蛋白质工程③细胞工程④蛋白质分子结构的预测.非竞争性抑制剂使①Vmax不变,Km变大②Vmax变小，Km^变③Vmax变小，Km变小④Vmax变大，Km变大.细胞内外钠钾的运送是属于①主动运输②促进扩散③被动运输④基因转位.生物膜脂双层的流动性主要取决于①磷脂②胆固醇③鞘磷脂④脑磷脂.管体激素对机体的影响是激素与受体结合后通过什么方式而实现的？①cAMP第二信使作用②磷酸肌醇的级联反应③激活酪氨酸激酶④真核调节基因转录.寡聚脱氧胸甘酸（oligodT）纤维素柱层析分离mRNA1属于①分配层析②离子交换层析③亲和层析④高压液相层析.某DNM段按末端终止法测序得部分电泳图谱如下，因此该 DNA勺部分序列是①AGCTCAGG）GGACTCG③AGCCTCAGG GGACCTCGA.DNA拓扑异构酶I型和II型的主要区别在于①I型使DNA勺一条链发生断裂和再连接，II型使DNA勺二条链同时发生断裂和再连接。②I型使DNA的两条链同时发生断裂和再连接，II型使DNA的一条链发生断裂和再连接。③I型、II型都使DNA的一条链发生断裂和再连接，但前者催化反应不需ATP,后者需ATR④I型、II型都使DNA的二条链同时发生断裂和再连接，但前者催化反应不需 ATP,后者需ATR二、是非题TOC\o"1-5"\h\z.含有四个二硫键的胰脏核糖核酸酶，若用疏基乙醇和尿素使其还原和变性，由于化学键遭到破坏和高级结构松散，已经无法恢复其原有功能。 （）.免疫球蛋白由两条轻链和两条重链所组成，抗体与抗原的结合只涉及轻链，因为它有可变区域，重链的序列基本上都是恒定的，因此，只起维持结构稳定的作用。 （）.血红蛋白和肌红蛋白均为氧的载体，前者是一个典型的别构蛋白，因而与氧结合过程中呈现正协同效应，而后者却不是。 （）.一般讲，从DNA分子的三联体密码中可以推定氨基酸的顺序，相反，从氨基酸的顺序也可以毫无疑问的推出DNA顺序。（）.膜蛋白的跨膜肽段的二级结构大多为 “-螺旋。（）.具有正协同效应的酶，其Hill系数总是大于1。（）.所有别构酶都是寡聚蛋白。（）.一个基质连有Poly（u）配基的亲和层析柱，可方便的从细胞匀浆中分离出真核的 RNA（）.突变是遗传物质的畸变，点突变时有一个碱基的改变，一定会导致氨基酸顺序的改变。（）.反转录酶仅具有RNA旨导的DNA聚合酶的活力。（）三、解释下列名词1.超螺旋DNA2.肽平面3.PAGE4.信号肽5.AFLP6.酶标免疫分析7.蛋白质的可逆磷酸化 8.Kat型抑制剂四、问答题.某天然九肽，其组成为：Gly2、Phe2、Tyr1>Met1、Asp1、Arg1、Pro1,经胰凝乳蛋白酶水解后可分得一个五肽和一个四肽，四肽的组成为 Phe1、Tyr1>Gly1和Pro1。此九肽的CNBr处理产物再经阳离子交换树脂层析并洗脱得一个组成为 Arg1、Phe1、Gly1的三肽，此九肽经胰蛋白酶水解可得 Phe,如用FDN皈应后再水解得DNP-Tyr。请写出这九肽的全顺序，并阐述解析过程。.什么是核酶和抗体酶？它们和酶有什么不同？.某一均一的DNA羊品，用EcoRI、HpeII、HindIII3 种限制性内切酶及它们的组合进行酶切，测出得到的DNM段的大小如下：EcoRI 1.3kb(x2)HpeII 2.6kbHindIII 2.6kbEcoRI+HpeII 0.5kb0.8kb1.3kbHpeII+HindIII 1.2kb1.4kbEcoRI+HpeII+HindIII 0.5kb0.6kb0.7kb0.8kb指出这种分子是线性还是环形的，并绘出限制性图谱。.试分析同源细胞色素C结构的种属差异和保守性，阐明其结构和功能的统一性。.细胞表面受体主要有哪些类型？各具有什么特点，作用机理有何区别？.怎样知道DNAM制是半保留复制而不是全保留复制？请解释Meselson和Stahl关于大肠杆菌DNAM制实验的结果。高级生物化学试题2002级一、单项选择.协同效应的结构基础是：①蛋白质分子的缔合②蛋白质的别构作用③蛋白质分子被激活 ④蛋白质的变性作用.有一个蛋白质样品，经 SDS-PAG极不连续PAGE佥查均显一条带；N端分析及C端分析说明它只有一个端基；等电聚焦电泳中呈现一深一浅的两条带。一般情况下，这蛋白质样品最可能是①样品不纯②样品呈微不均一性③样品由几种大小不同的亚基组成.测定蛋白质在DNAl^q结合部位常用①Western印迹法②PCR③限制性内切酶谱分析法 ④DNase1保护足迹分析法.对具有正协同效应的酶，其反应速度为最大反应速度 0.9时的底物浓度与反应速度为最大反应速度0.1时的底物浓度之比值应该是①>81 ②=81 ③<81.基因有两条链，与mRNA5列相同(T代替U)的链叫做①有义链②反义链③重链④cDNA链.在染色体中DNA勺构象主要是①A型②B型③C型④Z型.证明DN蝠遗传信息携带者的科学家是①Meselson和Stahl②Watsonn和Crick③Avery、Macleod和McCarty④Berg和Cehen.端粒酶是一种①限制性内切酶②反转录酶③RNA聚合酶④肽酰转移酶.钙调蛋白是一种重要的调控蛋白，参与多种酶作用的调控，它属于①跨膜信息转导的G蛋白家族②钙结合蛋白家族③免疫球蛋白家族④蛋白质激酶家族.番醇类激素容易通过靶细胞膜，是由于它①与膜受体有高度亲和力 ②分子的亲水性疝一&分子上有羟基结合④自身是脂溶性的.通常使用哪一种试剂测定多肽链的氨基末端？①CNBr②苯异硫鼠酸酯③6mol/L的HCl④胰蛋白酶.蛋白质变性伴随有结构上的变化是①肽链的断裂②一些侧链基团的暴露 ③氨基酸残基的化学修饰 ④蛋白质亚基聚合.在接近中性ph的条件下，下列哪种基因既可作为 H+的受体，又可作为H+的供体？①His-咪陛基②Lys-*-氨基③Arg-月瓜基④Cys-疏基.一个速度对底物浓度作图有 S型曲线的酶①肯定是别构酶②不是别构酶③不一定是别构酶.酶促反应降低反应活化能的能量来源是①底物化学键的断裂可释放的化学能 ②酶与底物结合能③底物形变能④酶构象变化所释放的能量.基因工程技术的创建成为可能是由于发现下列哪些酶？①DN咪合酶②DNA连接酶③II型限制性内切酶④末端转移酶.寡聚脱氧胸甘酸(oligodT)纤维素柱层析分离mRNA1属于①分配层析②离子交换层析③亲和层析④高压液相层析.用["p]dATP标记一个DNM段，需要用。①多核甘酸激酶②DNA1接酶③DNA聚合酶④逆转录酶.以下哪一个是正确的？①线粒体内膜对H+离子没有通透性②线粒体内膜能通透H+离子由内向外③线粒体内膜能通透H+离子由外向内④线粒体内膜能自由通透H离子.物质跨膜主动传送是指传送时①在一定温度范围内传送速度与绝对温度的平方成正比 ②消耗能量(不单指ATP)③需要有负责传送的蛋白质 ④需要ATP.目前已经知道某种金属离子在细胞信号转导行使细胞功能时起十分重要作用。它是①Na+②K+③Ca2+④M『.有一个肽的组成是Ala、Asp、Gly、Leu2、Val、Pro,它的N端是封闭的，下列方法中你首选用什么方法作为你测定这一个肽的序列的第一步？①胰蛋白酶水解②漠化鼠裂解③竣肽酶水解.形成稳定的肽链空间结构，一个重要的原因是肽链中的四个原子以及和它相邻的 a碳原子处于 ①不断绕动状态②可以相对自由旋转③同一平面④随不同外界环境而变换的状态.腺甘酸环化酶存在于①内质网膜②细胞核③质膜④胞浆或质膜.非竞争性抑制剂使 ①Vmax不变,Km变大②Vmax变小，Km^变③Vmax变小，Km变小④Vmax变大，Km变大二、是非题某一生物样品，与茚三酮反应呈阴性，用羧肽酶 A和B作用后测不出游离氨基酸，用胰凝乳蛋白酶作用后也不失活。因此可肯定它属非肽类物质。()与肌红蛋白不同，血红蛋白由四个亚基组成，因此提高了它与氧的结合能力，从而增加了输氧的功能。()糖蛋白合成时蛋白质糖基化位点主要在 Ser、Asn残基上。()酶的最适温度和最适 pH都是酶的特征性常数。()NO是最小的信使分子之一。()真核生物的基因不组成操纵子，不生成多顺反子 mRNA()单克隆抗体和多克隆抗体的区别在于后者可以抗多种抗原。()米氏常数是酶与底物形成复合物的结合常数。()突变是遗传物质的畸变，点突变时有一个碱基的改变，一定会导致氨基酸顺序的改变。()反转录酶仅具有RNA旨导的DNA聚合酶的