植物的常量元素

植物的常量元素通常指氮、磷、钾、钙、镁和硫，它们是土壤农化分析的常规分析项目。确定土壤养分的供应状况、诊断作物的营养水平和施肥效应及肥料利用率等，一般都离不开测定其中一种或几种元素，特别是氮、磷和钾三要素的含量。在农产品收获物的品质鉴定工作中，食品和饲料中蛋白质的测定实际是其有机氮的测定，而磷、钾、钙等则是营养价值很高的灰分元素。植物体内的氮主要以蛋白质、氨基酸等有机氮的形式存在于植物组织中。一般植物体全氮含量在1.0〜5.0%之间，尤以苗期或结实器官中含量较高。苗期作物、刚刚施用过大量氮肥后的作物，尤其是它们的茎叶营养器官、叶菜类作物，往往会有含量相当高的硝态氮，如西葫芦0〜16627mg-kg-1，甜椒1〜6524mg•kg-1，土豆2191〜6435mg•kg-1，甜瓜6~3077mg•kg-1，茄子8~3320mg•kg-1(Simonne等,1998)。植物体内的磷主要以磷脂、核酸、植素等有机态存在。植物种子内的磷50〜80%以上以植素(PHYTIN)形态存在。与氮和钾相比，植物含磷量相对较低，一般为0.2〜0.5%，而植物体内的钾几乎都以无机离子态存在。钙是植物体大分子物质的重要结构组分，部分钙以交换态存在于细胞壁和质膜外表面。钙在细胞液泡内占有很高比例，而细胞溶质中钙的浓度很低。一些钙生植物体内累积的钙达到10%以上而仍能正常生长(Marschner,1996)。植物体含镁量一般为0.25〜1.0%，大致与含磷量相近，叶片内60〜90%的镁可以被水提取，5〜10%的镁在细胞壁中与果胶呈紧密结合或在叶泡内呈易溶性的磷酸盐，大约有6-25%的镁与叶绿素结合，这个比例取决与植物镁素的营养状况。正常生长的作物体内含硫量大多在0.1〜0.5%之间，却基本都以有机态硫的形态存在。一般十字花科作物含硫量高于豆科作物，豆科作物又高于禾本科作物。鉴于不同植物和不同品种之间及同一作物不同生育期、不同部位间营养元素本身会有相当大的差异，而不同营养环境常常又能十分显著地影响这种变异，分析工作者应尽可能了解样品的特性，并在分析过程中采用相应的方法减少干扰，缩小分析误差，对最后的结果作出合理的评判。植物全氮的测定植物体内氮主要以蛋白质、氨基酸或酰胺等有机态存在，加上数量不等的硝态氮。有条件的实验室现在也常采用杜马氏(Dumas)方法的自动定氮仪，该法是将植物样品充分燃烧，植物所有形态的氮均转化为氮气(N2)，通过计量氮气的体积来计算样品中的全氮量(Bergerson,1980)。该法的主要缺点是仪器太贵，不能普及。植物全氮测定通常均用开氏法(Kjedahl)法，即用浓硫酸和混合加速剂或氧化剂消煮样品，将有机氮转化为铵态氮后用蒸馏滴定法测定。混合加速剂(K2SO4或Na2SO4-CuSO4-Se)无疑能有助于快速分解植物样品。近年来氧化剂的使用，特别是HClO4,H2O2又引起人们的重视，因为H2SO4-HClO4,H2SO4-H2O2的消化液，均可同时测定N、P、K等多种元素，有利于自动化装置的使用。前者氧化剂的作用过于激烈，容易造成氮的损失，使测定结果不够稳定可靠；后者如果控制好的h2o2用量、滴加的次数和滴加的速度，使氧化作用不要太强，达到氧化还原的平衡，可以防止氮的损失，此法的主要特点是一次消煮，可以同时测定N、P、K等多种元素。对于含硝态氮较高的样品，全氮量通常是将硝态氮与开氏法单独测定的氮加在一起，其数值与杜马氏方法测定的结果并不一致，但两者可以有一定的比例(Simonne，1998)。若要使开氏法的测定结果包括硝态氮，一般需要将硝态氮还原成为铵态氮，然后再进行开氏定氮。其做法通常是在样品消化前，先用含有水杨酸的浓硫酸处理，使硝态氮在室温下与水杨酸生成硝基水杨酸，再用硫代硫酸钠或锌粉使硝基水杨酸还原为氨基水杨酸；此外，也有先用金属铭粒在酸性条件下还原硝态氮。然后进行h2so4-混合加速剂法消煮分解，将全部有机氮(包括氨基水杨酸)转化为铵盐。此处不能用h2so4-h2o2法分解含有大量硫代硫酸钠或锌粉还原剂的样品。该法得到的待测溶液也不能用比色法测定氮和磷。因此在选择溶液中元素(包括氮)测定方法时应该考虑样品的分解方法，两者应该相互匹配。对蔬菜作物和其它可能含量高浓度硝态氮的样品，研究植物全氮含量时，应考虑测定方法的差异。待测液铵态氮的测定习惯上多采用半微量蒸馏法，该法较为快速、准确。若要进行大批样品的分析，最简单的方法是采用扩散法，所需设备简单，操作所费人力少，准确度也能符合常规分析的要求。此外也可以用氨气敏电极法测定，因消化液酸度很大，碱的加入量必须保证最后测定时，溶液pH大于11。靛酚蓝比色法测定铵态氮的灵敏度很高，形成的显色液为真溶液，若最后显色液浓度过高，可以直接稀释后比色测定，用自动比色仪测定十分方便；其缺点是催化剂硝普钠有剧毒，使用时要十分小心。上述方法的测定原理、步骤、主要注意事项可参考土壤分析部分。植物样品消煮液中铵离子测定，也常常使用下面介绍的奈氏(Nessler)比色法，该法较简单、快速。需要强调的是植物全氮含量远高于土壤中的氮，除了因消煮方法不同要注意不同的干扰因子外，样品的稀释倍数、中和待测液酸度的碱量也不尽相同；另外，空气及测定环境中气态的氨很容易被强酸溶液吸收而导致空白值增大，氨的污染应引起我们足够的重视。因此实验室中测定氮的含量时，应注意环境的清洁，如实验过程中不能抽烟，不能使用氨水等能挥发出氨的试剂，注意实验室不宜离卫生间太近等。13.2.1.植株全氮的测定(不包括硝态氮，H2SO4-H2O2消煮，奈氏比色法)囹13.2.1.1.1方法原理植物样品在浓h2so4溶液中，历经脱水碳化、氧化等一系列作用，而氧化剂H2O2在热浓h2so4溶液中分解出的新生态氧(h2o2——H2O2+[O])具有强烈的氧化作用，分解h2so4没有破坏的有机物和碳。使有机氮、磷等转化为无机铵盐和磷酸盐等，因此可以在同一消煮液中分别测定N、P、K等元素的联合测定。该消煮液除可用半微量蒸馏法定氮外，还可用奈氏比色法测定溶液中氮的含量。奈氏(Nessler)比色法的原理如下：待测液中的铵在pH=11的碱性条件下，与奈氏试剂作用生成桔黄色配合物，其反应式如下：KOH2KI+HgI2—K2HgI4(奈氏试剂)K2HgI4+3KOH+NH3—Hg2O(NH4I)(桔黄色)+7KI+H2O上述显色过程受溶液pH的影响很大，溶液pH=4时不显色，从pH=4〜11之间随pH升高而颜色加深，pH=11时显色完全，其桔黄色的深浅在显色液NH4七N的浓度在0.2〜3mg-L-1时符合比耳定律。凡是在测定溶液中引起混浊的物质中Ca2+、Mg2+、Fe3+、S2-以及酮、醇等，在植物分析中主要是Ca2+、Mg2+离子的干扰，可加酒石酸钠配合掩蔽。13.2.1.1..2主要仪器开氏瓶(100mL)；控温消化炉，721分光光度计。试剂浓H2SO4；300g-L-1H2O2；100g-L-1酒石酸钠溶液；100g-L-1KOH溶液；奈氏试剂：溶解HgI245.0g和KI35.0g于少量水中，将此溶液洗入1000mL容量瓶，加入KOH112g，加水至800mL，摇匀，冷却后定容。放置数日后，过滤或将上清液虹吸入棕色瓶中备用。100^g-mL-1N(NH4+-N)标准溶液：称取烘干NH4Cl(分析纯)0.3817g溶于水中，定容为1000mL，此为100旺•mL-1N(NH4+-N)贮备液。用时吸上述溶液50mL，稀释至500mL，即为10旺-mL-1N(NH4+-N)工作液。13.2.1.1.4操作步骤称磨细烘干的植物样品(过0.25〜0.5mm筛)0.1000〜0.2000g，置于100mL的开氏瓶或消化管中，先用水湿润样品，然后加浓H2SO45mL，轻轻摇匀(最好放置过夜)，瓶口放一个弯颈不漏斗，在消化炉上先低温缓缓加热，待浓硫酸分解冒白烟逐渐升高温度。当溶液全部呈棕黑色时从消化炉上取下开氏瓶，稍冷，逐滴加入300g-L-1H2O210滴，并不断摇动开氏(注切以利反应充分进行。再加热至微沸10〜20min，稍冷后再加入H2O25~10滴。如此反复2~3次，直至消煮液呈无色或清亮色后，再加热5〜10min，以除尽过剩的双氧水(注^。取出开氏瓶冷却，用少量水冲洗小漏斗，洗液洗入瓶中。将消煮液用水定容至100mL，取过滤液(或取放置澄清的上清液)供N、P、K等元素的测定。消煮时应同时做空白试验以校正试剂误差。取上述待测液1〜5mL(g)，置于50mL容量瓶中，加100g-L-1酒石酸钠溶液2mL，充分摇匀(粉)，再加入100g-L-1KOH溶液中和溶液中的酸(KOH的加入量可这样确定：另取一份待测溶液，以酚酞作指示剂，测定中和这份溶液所需KOH的mL数)，加水至40mL，摇匀，加奈氏试剂2.5mL，用水定容后充分摇匀。30min后用分光光度计比色，波长为420nm。在样品测定的同时需做空白试验，以校正试剂误差。标准曲线的制作：分别吸取10旺•mL-1N(NH4+-N)标准液0，2.50，5.00，7.50，10.00，12.50mL置于6个50mL容量瓶中，显色步骤同上样品测定。此标准系列浓度分别为0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5旺・mL-1N(NH4+-N)，在420nm波长处比色。以空白消煮液显色后，调节仪器零点。13.2.1.1.5结果计算N(%)=p•V-tsX10-4/m式中：p——从标准曲线查得显色液N(NH4+-N)的质量浓度(旺-mL-1)V——显色液体积(mL)；ts——分取倍数，消煮液定容体积(mL)/吸取消煮液体积(mL)；m十样品质量(g)。注释(注1)H2O2滴加时应直接滴入瓶底溶液中，若滴在瓶壁上，H2O2会很快分解，失去氧化效果。（注2）溶液中残余的H2O2需要加热分解除去，否则会影响N、P的比色测定。（注3）如果待测液中氮含量太高。可将消煮液先稀释后，再吸取稀释液进行测定。（注4）奈氏比色法测定氮，常受钙、镁的离子的干扰，又因在碱性溶液中显色，显色后又非真溶液，故每加入一种试剂，必须充分摇匀，勿使局部浓度太高而产生混浊。当氨浓度太高时，也会产生混浊，此时必须减少待测液用量，或经稀释后，用稀释液进行显色。13.2.1.2包括硝态氮的样品的全氮测定（水杨酸-锌粉还原法）囹.1方法原理样品中的硝态氮在室温下与硫酸介质中的水杨酸作用，生成硝基水杨酸，再用硫代硫酸钠或锌粉使硝基水杨酸还原为氨基水杨酸。然后进行H2SO4-混合加速剂法消煮分解（注1），将全部有机氮（包括硝态氮）转化为铵盐。铵态氮的定量可用半微量蒸馏法进行。.2主要仪器：同4.1.2.2.2。.3试剂固体Na2S2O3；还原锌粉；水杨酸-硫酸；其它试剂同4.1.2.2.3。.4操作步骤称磨细烘干的植物样品（过0.25〜0.5mm筛）0.1〜0.20XXg，置于100mL的开氏瓶或消化管中，先用水湿润瓶内样品，然后加含水杨酸或苯酚的浓硫酸10mL，摇匀后室温放置30min，加入Na2S2O3约1.5g，锌粉0.4g和水10mL，放置10min，待还原反应完成后，然后加混合加速剂（注1）按土壤全氮的开氏方法［4.1.2.2.4,2（1）］消煮分解。取出开氏瓶冷却，用少量水冲洗小漏斗，洗液洗入瓶中。将消煮液用水定容至100mL，取一定量溶液用半微量蒸馏法定氮(注2)(见4.1.2.2.4，3)。消煮时应同时做空白试验以校正试剂误差。.5结果计算植株中N(%)=(V1-V0)XcX14XlsX10-3X100/m式中：匕一样品测定所消耗去标准酸的mL数；V0一空白试验所耗去标准酸的mL数；c—标准酸(H+)的浓度(mol-L-1)；14一氮原子的摩尔质量(g-mol-1)；10-3—mL将换算为L；松一分取倍数，消化液定容体积(mL)/蒸馏时吸取待测液的体积(mL)；m一十样品质量(g)。.6注释(注1)此处不能用H2SO4-H2O2法分解含有大量Na2S2O3或Zn粉还原剂的样品。(注2)此法得到的待测液不能用于N、P的比色法测定。植株中磷的测定植物体内磷主要以有机磷如核酸、磷脂、植素等的形态存在于植物组织中，有机磷须经干灰化或湿灰化分解转变为无机正磷酸盐。溶液顷一般用比色法测湿灰化应用不同比例的HNO3、H2SO4、HC1O4的方法较为普遍，湿灰化法的消煮温度不会超过混合酸的沸点，灰分元素不会形成难溶的硅酸盐，而且当用H2SO4或HC1O4消煮时，可使SiO2充分脱水且使其吸附作用降至最低限度，不致造成灰分元素测定产生显著的负误差。但是由于试剂用量大，会带来污染的危险，试剂空白值大。当然加有hno3的湿灰化法，则不能在消煮液中同时测定氮。在十灰化法中，所用的温度有所不同，一般建议灰化温度不超过500°C，而时间为2〜8h，近年来，改进的十灰法中，添加一些“助灰化剂”，在灰化时通02,添加KHSO4等，帮助灰化；干灰化添加试剂量少，污染的可能性比湿灰化小，而且简便易行。对于植物全磷的测定用H2SO4-H2O2消煮法，同时测定氮、磷和钾较为方便。总之，方法的选择应根据测定元素的各类、具体条件来决定。溶液中磷的测定，最常用的钼蓝比色法和钒钼黄比色法，可根据样品中磷的含量选用测定方法，当磷的含量高时，选用钒钼黄法为佳，反之则可用钼蓝法。13.2.2.植株中磷的测定(H2S04-H202消煮，钒钼黄比色法)13.2.2.1.1方法原理植物样品经H2S04-H202消煮分解制备待测液(同13.2.1.1.4)。待测液中正磷酸能与偏磷酸盐和钼酸盐在酸性条件下作用形成黄色的杂聚化合物钒钼酸盐，其组成沿不能十分肯定，有人认为是P0•V0-22MoO-nHO。溶液的黄色很稳定，其深浅与磷含量成正比，可252532用比色法测定磷的含量。比色时可根据溶液中磷的浓度选择比色波长400〜490nm，磷的浓度高时选择较长的波长，较低时选用较短的波长。钒钼黄法要求比色液中酸的浓度(即终浓度)很宽，极限是0.04〜1.6mol•L-】(H+)；酸度太高时显色不完全或不显色，太低时则可能生成沉淀或其它物质的颜色。钒酸盐的终浓度范围是8.0X10-5〜2.2X10-3mol•L-1，通常用后一种浓度。钼酸盐的终浓度范围是1.6X10-3〜5.7X10-3mo1・L-1。在正常的室温变化范围内对黄色强度无影响。黄色发生很快，在最初15min内会降低约1.3%，以后至少2h内很稳定，在24h内也无显著变化。本法操作简便快速，准确度和重复性较好，相对误差约为1〜3%；灵敏度较钼蓝法低，适测范围广，约为1~20mg-L-1；对酸的浓度要求不严格，容易控制，在HNO3、HCl、H2SO4、HC1O4等介质中都可适用；干扰离子少，特别是Fe3+的允许量远高于钼蓝法，因此该法广泛用于植物和有机肥料样品中磷的测定。13.2.2.1.2主要仪器：消煮管(瓶)；控温消煮炉；分光光度计。试剂钒钼酸铵试剂：称(NH4)6MoO24•4H2O12.5g溶于200mL水中。另将偏钒酸铵(NH4VO3)0.625g溶于沸水150mL中，冷却后，加入浓HNO3125mL，再冷却全室温。将钼酸铵溶液缓慢地注入钒酸铵溶液中，随时搅拌，用水稀释至500mLo6mol•L-1NaOH溶液：称NaOH24g溶于水，稀释至100mL。2,6-二硝基酚指示剂：2,6-二硝基酚0.25g溶于100mL水中。其变色范围是pH2.4(无色)〜4.0(黄色)。变色点是pH3.1。50漠•mL-1P标准溶液：准确称取经105°C烘干的KH2PO40.2195g，溶于水，移入1000mL容量瓶，加水全约400mL，加浓硫酸5mL，用水定容。装入塑料瓶中低温保存备用。其它试剂同13.2.1.1.313.2.2.1操作步骤吸取13.2.1.1.4消煮好经过滤的待测液20~25mL(含P0.25〜1.0mg)，置于50mL容量瓶中，加2,6-二硝基酚指示剂2滴，用6mo1•L-1NaOH溶液中和全刚呈黄色，加入钒钼酸铵试剂10.00mL，用水定容。放置15min后用波长450nm，在分光光度计上比色，以空白液调节仪器零点。标准曲线制作：分别吸取50^g-mL-iP标准溶液0,1.0,2.5,7.5,10.0,15.0于50mL容量瓶中，同上述操作步骤显色和测定，该标准系列P的浓度分别为0,1.0，2.5，5.0，7.5，10.0，15.0旺•mL-i。13.2.2.1.5结果计算全P(%)=p•VX分取倍数X10-4/m式中：p一从标准曲线查得显色液P的质量浓度(旺・mL-1)；V一显色液体积(mL)；分取倍数一消煮液定容体积(mL)/吸取消煮液体积(mL)；m一十样品质量(g)。13.2.2.2植株中磷的测定(H2SO4-H2O2消煮，钼锑抗比色法)囹13.2.2.2.1方法原理植物样品经H2SO4-H2O2分解(原理同13.2.1.1.1)。溶液中的磷用钼锑抗比色法测定。主要仪器：同13.2.2.1.2试剂浓h2so4；300g•L-1H2O2；50^g•mL-1标准溶液：同13.2.2.1.3(4)；其它试剂同5.2.2.313.2.2.2.4操作步骤吸取13.2.1.1.4消煮好经过滤的待测液2〜5mL（含P5〜25谄）置于50mL容量瓶中，按照5.2.2.4,2调节溶液酸度和显色步骤进行比色测定。标准曲线制作：同5.2.2.4,3。结果计算：参照13.2.2.1.5注释：参照5.2.2.6植物全钾的测定（h；sq-HOj消煮，火焰光度计法归一242213.2.3.1方法原理植物体内的钾素几乎全部以离子状态存在于植物组织中，所以植物中全钾除了可以用上述干灰法或湿灰化法（h2so4-h2o2）以外，如果单独测定钾，还可以用1mol-L-1NH4OAC浸提法，或1mol-L-1HCl浸提法，同时测定Ca、Mg、Cu、Zn等元素。待测液中的钾可直接用火焰光度计法测定，方法快速方便，结果可靠准确。由于植物样品中铁、铝等的干扰比土壤分析中的较小，所以十灰化法或湿灰化法制得的待测液，也可以用火焰光度计法快速测定全钾。其工作原理见6.2.2.113.2.3.2主要仪器：火焰光度计；其它同13・2・2.1・213.2.3.3试剂浓h2so4；300g-L-1H2O2；K标准溶液：同6.2.2.3,6。13.2.3.4操作步骤吸取13.2.1.1.4消煮好的待测过滤液5mL置于50mL容量瓶中，用水定容（注1）,用分光光度计测定K。标准曲线制作：同6.2.2.4,3。但必须加入与待测液中相同量的其它离子成分（即加空白消煮液5mL）（成）。13.2.3.5结果计算全K（%）=p•k・tsX10-4/m式中：p一从标准曲线查得K的质量浓度（建-mL-1）；V一测定液体积（mL）；松一分取倍数，消煮液定容体积（mL）/吸取消煮液体积（mL）；m一十样品质量（g）。13.2.3.6注释（注1）溶液中的酸度对测定结果有影响（酸的存在将大大降低钠光的强度）。酸浓度在0.2mol-L-1时对K、Na的测定几乎无影响；一般不得超过0.25mol-L-1。mol-L-1（注2）标准液和待测液组成要基本相同，溶液组成（包括酸碱和阳、阴离子的浓度）的改变对测定结果都有影响，因此应力求标准溶液与待测溶液一致。植物全钙镁的测定[4]植物全量钙镁测定样品的分解，可用干灰化法和湿灰化法。湿灰化法，如果采用HNO3-HClO4-H2SO4三酸消煮法，并且同时测定磷、钾时要注意镁和钙转化为难溶的CaSO4，而且SO42-浓度太高时，对EDTA配合滴定或原子吸收分光光度法测定钙都会带来影响，因此钙镁的测定，以采用干灰化法为好。也可采用1mol•L-iHCl浸提法测定钙镁和微量元素。溶液中钙镁的测定，目前都用EDTA配合滴定法或原子吸收分光光度法。植物样品中含磷量比较高，特别是种子中含磷很高而钙镁较少，因此在测定全钙镁时必须考虑解决磷的干扰问题。而用原子吸收分光光度法测定钙镁是一个快速而准确的方法，应用得比较普遍。13.2.4.1EDTA配合滴定法13.2.4.1.1方法原理植物样品经干灰化后用稀盐酸煮沸，溶解灰分中的钙和镁。待测溶液中Ca2+和Mg2+用EDTA直接滴定法测定。方法原理同13.1.1.1.1。对含磷较高的植物种子样品则须用EDTA反滴定法，以免在碱性深液中生成磷酸钙而造成负误差。13.2.4.1.2主要仪器：马福炉；瓷坩锅(30mL)；半微量滴定管。试剂三乙醇胺(1:1)溶液。4mol•L-1NaOH溶液：称氢氧化钠(化学纯)16.0g溶于100mL水中。0.01mol•L-1EDTA标准溶液：取EDTA二钠盐3.720g溶于无二氧化碳水中，微热溶解，冷却后定容为1L。用标准Ca2+溶液标定，方法同测定Ca2+。溶液贮于塑料瓶中。标准Ca2+溶液：准确称取在105°C下烘干4〜6h的CaCO3(分析纯)0.5004g溶于0.5mol•L-1盐酸溶液25mL中，煮沸除去二氧化碳，瓶用无二氧化碳水洗入500mL容量瓶中，定容。该溶液的浓度为0.01mol•L-1(Ca2+)o氨缓冲溶液(pH=10)：取NH4Cl溶于200mL水中加入浓氨水(化学纯)570mL,用水稀释至1L,贮于塑料瓶中，并注意防止吸收空气中的二氧化碳。K-B指示剂：先取K2SO4(无水)研细，再分别取酸性铭黑K[2-(2-羟基-5-磺酸钠-偶氮苯)-1,8-二羟基-3,6萘二磺酸钠盐]0.5g和1g萘酚绿B研细，将三者混匀，贮于塑料瓶中，不用时放在干燥器中保存。13.2.4.1.4操作步骤按13.1.1.1.3进行灰化。冷却后用少量水湿润灰分，然后小心滴加HCl约20mL，慎防灰分飞溅损失，加热至沸以溶解残渣。用热水将其无损地洗入100mL容量瓶中，冷却后定容过滤，滤液备用。1.直接滴定法(适用于一般茎叶样品)钙的测定：吸收上述待测液10mL(约含钙1〜5mg)，放入150mL三角瓶中，用水稀释至50mL，加入1：1三乙醇胺2mL，摇匀，再加4mol-L-1NaOH2mL，摇匀放置2min待Mg(OH)2沉淀后立即加入K-B指示剂0.1〜0.2g，用0.01mol-L-1EDTA标准溶液滴定至紫红色突变为蓝绿色为终点。钙+镁总量的测定：另取上述待测液10mL(约含钙1〜5mg)，放入150mL三角瓶中，用水稀释至50mL，加入1：1三乙醇胺2mL，摇匀，再加氨缓冲液5mL，摇匀。加入K-B指示剂0.1〜0.2g，用0.01mol-L-1EDTA标准溶液滴定至紫红色突变为蓝绿色为终点。13.2.4.1.5结果计算I全Ca(%)=cX*X10-3X40.08XisX100/m全Mg(%)=c(V2-V1)X10-3X24.31XisX100/m式中：c—EDTA的浓度(mol-L-1)；V1—滴定钙时消耗EDTA的体积(mL)；、一滴定钙+镁时消耗EDTA的体积(mL)；10-3—将mL换算为L；40.08和24.31一分别为钙、镁原子的摩尔质量(g-mol-1)；松一分取倍数，待测液定容体积(mL)/吸取待测液体积(mL)；m一十样品质量(g)。2.反滴定法(适用于一般种子样品)钙的测定：吸收上述待测液10mL(约含钙1〜5mg),放入150mL三角瓶中，用水稀释至50mL,加入1:1三乙醇胺2mL,摇匀，再加4mol-L-1NaOH2mL,摇匀放置2min待Mg(OH)2沉淀后立即加入K-B指示剂0.1〜0.2g，加入0.01mol-L-1EDTA标准溶液10mL，此时溶液呈蓝色，然后用0.01mol-L-1Ca标准溶液反滴定过剩的EDTA，终点为蓝绿色突变为紫红色。同时做钙空白标定：吸取空白液10mL^P1.2mol-L-1HCl约20mL的稀释液)同上步骤进行滴定。钙+镁总量的测定：另取上述待测液10mL(约含钙1〜5mg)，放入150mL三角瓶中，用水稀释至50mL，加入1：1三乙醇胺2mL，摇匀，再加氨缓冲液5mL，摇匀。加入K-B指示剂0.1〜0.2g，加入0.01mol-L-1EDTA标准溶液10mL，此时溶液呈蓝色，然后用0.01mol-L-1Ca标准溶液反滴定过剩的EDTA，终点为蓝绿色突变为紫红色。同时做钙+镁空白标定：吸取空白液10mL^P1.2mol-L-1HCl约20mL的稀释液)同上步骤进行滴定。13.2.4.1.5结果计算II全Ca(%)=cX(V0-V1)X10-3X40.08X^5X100/m全Mg(%)=c["-V2)-(V0-V1)]X10-3X24.31XisX100/m式中：c—EDTA的浓度(mol・L-i)；匕一反滴定钙时消耗的0.01mol-L