凝血酶原时间PT测定作业指导书

凝血酶原时间PT测定作业指导书实验原理：在待检血浆中加入过量的组织凝血活酶和Ca离子，与FWa形成复合物，触发外源性凝血系统，使凝血酶原转变为凝血酶，凝血酶使纤维蛋白原变为纤维蛋白。所测血浆凝固时间，即凝血酶原时间。凝块形成的时间与血浆中的外源性凝血因子含量呈负相关。标本采集：早晨空腹采血（空腹12小时左右），静脉采血。3.8%（w/v）枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。标本存放：将混合了抗凝剂的全血以3000r/minX10min离心，室温放置不超过2小时，2〜8°C保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70C不超过6个月），只能冻融1次，在37C迅速解冻，以减低凝血因子的消耗，解冻后立即测试。标本运输：低温条件下运输。标本拒收的标准：抗凝剂不符合，采血量不准确，凝固，溶血，脂血标本不能作测定。实验材料：北京世帝科学仪器公司凝血酶原时间测定试剂盒，主要成分为兔脑粉、氯化钙和少量稳定剂。仪器设备：7.1仪器名称：M200全自动凝血因子分析仪。仪器厂家：北京世帝科学仪器有限责任公司。仪器型号：CoagulationanalyzerM200仪器技术参数：试剂位：16个，可放置不同规格大小的试剂瓶。样品位：60个，可放置原试管。仪器校准程序：校准频率：当方法改变，试剂厂家或试剂型号改变，仪器维修影响测定结果等情况时，必须进行校准。校准操作：设置标准曲线分析（由仪器提供商指定工程师执行）。操作步骤：开机前应先检查清洗液、废液、测试杯、试剂量是否足够。打开血凝仪电源开关，打开电脑双击图标，输入密码。试剂按照图形显示的位置摆放。8.4联机完成后，预温10-15min。点击“输入”选择“项目”再选择单孔或批量，完毕后点击“新增”后，再点击退出。点击主菜单“下发任务”（在不关软件的情况下只是第一次需要此操作）。回到主菜单切换到“列表显示”编辑病人信息，点击保存。测试完毕后，（如有异常曲线、异常值时可选中重测）然后选择打印。检验结果的判断与分析：9.1仪器测定PT的线性范围在5-600秒，测定完成后仪器显示PT秒数、PT活动度、INR值等参数。若不能测出结果，将出现下列信息：“---”提示检测失败，可能的原因是：试剂缺乏。9.2仪器设定PT参考范围在11-14秒，如果得不到一个正常数值，需要重新测定。质量控制：每批样本同时测定两个浓度水平（高值和正常值）的质控品，以2S为警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则详见室内质控作业指导书。11・临床意义：PT是用于筛查外源性凝血系统（II、V、切、X）及口服抗凝药物剂量（如华发令、双香豆素等）的检测项目。11.1参考范围：秒数S：11s-14S（患者结果超过正常对照35以上有临床意义）国际标准化比值INR：0.8-1.24PT延长见于先天性凝血因子II、V、训、X缺乏；低（无）纤维蛋白原血症；获得性见于DIC、原发性纤溶症、维生素K缺乏、肝病、血循环中有抗凝物质（如口服抗凝剂、肝素）。PT缩短：见于先天性凝血因子V增多、口服避孕药、高凝状态（DIC早期、急性心肌硬塞等）、血栓性疾病（脑血栓形成、急性血栓性静脉炎）、多发性骨髓瘤、洋地黄中毒、乙醚麻醉后。变异的潜在原因：12.1抗凝剂：草酸盐、EDTA、肝素不适用于PT检查标本采集处理不当，如血与抗凝剂未充分混匀，出现凝块，混匀时过分用力，使标本溶血，造成结果变异。纤溶药物的影响，如双香豆素、链激酶、尿酶等。超剂量使用肝素使凝固时间延长。FDP增加使凝固时间延长。某些药物，如口服避孕药、雌激素、天门冬酰胺酶、钠络酮等影响测试结果。操作注意事项：13.1试剂严禁冰冻，试剂使用后应及时置于2-8°C保存，以延长试剂的寿命。在采集全血和整个测试过程中，所有试管、注射器以及移液管都应为塑料制品。13.3待测血浆不能采用肝素、EDTA抗凝,应使用109mmol/L枸橼酸钠抗凝。13.4为防止在测定过程中V因子的损失，预温时间要准确为180秒，预温温度应保持在36.5°C-37.5°C。13.5如果血球压积V20%或〉55%，需按下列公式调整血样与抗凝剂的比例：抗凝剂用量=0.00185X血量（ml）X（100-病人红细胞压积）。溶血标本不得使用。同时应避免高血脂性或黄疸性样本的使用，因为这些情况可能会影响测试结果，尤其是在使用光学法凝血分析仪时。由于PT试剂盒内含有动物源性原料，虽然在制备过程中已经过了病毒和细菌的灭活步骤，但由于没有一种实验方法能确保试剂盒内的动物源性成分不存在传播疾病的可能，使用者在使用过程中及处理废弃物时有可能受到疾病的传染或者传染给他人。仪器维护与保养：试剂、比色杯及时添加。日维护：每日关机前点击“针浸泡”1次。参考文献：叶应妩，王毓三，申子瑜。《全国临床检验操作规