HPVDNA检测现状及最新国际宫颈癌筛查课件

HPV-DNA检测现状及2012最新国际宫颈癌筛查指南hpage0©2010RocheHPV-DNA检测现状及2012最新国际宫颈癌筛查指南hp内容：1.HPV介绍2.HPV-DNA检测产品及各自特点3.2012最新国际宫颈癌筛查指南hpage1©2010Roche内容：hpage1©2010RocheHPV介绍根据感染组织类型分为：皮肤组织粘膜组织hpage2©2010RocheHPV介绍根据感染组织类型分为：hpage2©2HPV介绍E：早期基因区编码早期6个蛋白L：晚期基因区编码晚期2个蛋白hpage3©2010RocheHPV介绍E：早期基因区编码早期6个蛋白hpage3感染后的存在状态：状态一：非整合状态状态二：整合到宿主细胞/nrc/journal/v2/n1/slideshow/nrc700_F1.html

HPV介绍hpage4©2010Roche感染后的存在状态：HPV-DNA检测（进口并取得FDA注册证）Logo公司SFDAFDAQIAGENYYHologicYYROCHEYYGen-probeNYhpage5©2010RocheHPV-DNA检测（进口并取得FDA注册证）Logo公司SFHPVDNA检测（国产）Logo公司SFDAFDA凯普YN亚能YN港龙YN金菩嘉YN透景YN之江YN达安YNhpage6©2010RocheHPVDNA检测（国产）Logo公司SFDAFDA凯普YN亚HPV-DNA检测（按不同原理分类）原理代表公司杂交捕获QIAGEN酶切信号放大HologicPCR荧光法ROCHE、港龙、达安、凯普、之江PCR-反向点杂交（PCR-膜杂交）亚能、凯普TMAGen-probe流式荧光杂交法透景hpage7©2010RocheHPV-DNA检测（按不同原理分类）原理代表公司杂交捕获QIHPVDNA检测QIAGENHC2原理：基于信号放大的酶标板技术的化学发光检测的核酸杂交检测方法（杂交捕获）流程：裂解－杂交－捕获－反应－冲洗－信号收集－判读时间：手工操作3.5小时，仪器操作4.5小时结果：检测13种HPV高危型，不分型主要问题：与个别HPV亚型会发生交叉反应，无内对照，约5%假阳性率DML2000hpage8©2010RocheHPVDNA检测QIAGENHC2原理：基于信号放大的酶标HPVDNA检测HologicCervistaHRHPV原理：基于专利Invader®酶切信号放大技术流程：磁珠分离核酸提取－酶切信号放大－荧光检测时间：4小时自动化孵育+2小时人工操作（半自动）结果：14种高危型16、31、33、52、58、18、39、45、66、68、51、56、66，不分型主要问题：可能与其它HPV如HPV67和70发生交叉反应，从而产生假阳性结果荧光测读仪温度循环仪hpage9©2010RocheHPVDNA检测HologicCervistaHRHPVHPVDNA检测HologicCervista(r)HPV16/18原理：基于专利Invader®酶切信号放大技术流程：磁珠分离核酸提取－酶切信号放大－荧光检测时间：4小时自动化孵育+2小时人工操作（半自动）结果：仅对16、18分型主要问题：可与高水平的高危型HPV31发生交叉反应。非常低的HPV感染或样本可能导致假阴性荧光测读仪温度循环仪hpage10©2010RocheHPVDNA检测HologicCervista(r)HPVHPVDNA检测ROCHEPCR－多色荧光探针法原理：基于PCR反应结合不同荧光染料的探针检测高危型HPV并对16、18分型流程：核酸提取－PCR扩增检测时间：5小时（手工操作时间15分钟）结果：Cutoff值，14种高危型，并对16、18分型最新产品，文献见美国ATHENA实验（LancetOncol）cobas4800HPV检测系统HR1618Contr.Ch1Ch2Ch3Ch4GT16高危型混合(12GT)GT1831,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66,681618333139355145525658596668hpage11©2010RocheHPVDNA检测ROCHEPCR－多色荧光探针法原理：基于HPVDNA检测凯普21种人乳头状瘤病毒（HPV）分型检测试剂盒原理：PCR+基因芯片导流杂交技术流程：核酸提取—PCR扩增—导流杂交－显色时间：3.5-4个小时（手动）结果：21格某格显色即为某HPV亚型阳性（13+5+3），对21种HPV分型（含其它HPV亚型）主要问题：手工操作，易交叉污染，没有经过临床实验hpage12©2010RocheHPVDNA检测凯普21种人乳头状瘤病毒（HPV）分型检测试HPVDNA检测方法亚能人乳头瘤病毒基因分型(23型)检测试剂盒原理：使用自行设计的HPV基因组中的特异性引物，对待测样品中可能存在的HPV基因型进行PCR扩增并进行生物素标记，再将PCR扩增产物与固定在芯片上的23个特异性探针进行特异性的分子杂交，并通过化学显色方式判读结果(

PCR-反向点杂交法)流程：核酸提取—PCR扩增—导流杂交－显色结果：膜条显色直接提示感染的HPV亚型，23种亚型（18+5）（含其它HPV亚型）主要问题：手工操作，易交叉污染，没有经过临床实验hpage13©2010RocheHPVDNA检测方法亚能人乳头瘤病毒基因分型(23型)检测试HPVDNA检测透景luminex原理：流式荧光技术，PCR产物和微球上交联的探针根据碱基互补配对的原理杂交，加入荧光标记反应，最后在流式荧光检测仪上检测荧光信号。流程：核酸提取－PCR扩增－微球杂交－荧光标记反应－荧光分析结果：26种亚型（19+7），含其它HPV亚型主要问题：没有经过临床实验hpage14©2010RocheHPVDNA检测透景luminex原理：流式荧光技术，PCR

SFDA认证FDA认证HPV高危型HPV16/18分型有临床研究确认cut-off值仪器可扩展性罗氏cobas®4800√√14√√肿瘤靶向治疗基因突变检测凯杰Hc2√√13×

√×英硕力Cervista

√√14√/×

√×国产：亚能√×

14√×无自主仪器国产：凯普√×

14√×无自主仪器国产：港龙√×

13√×无自主仪器国产：透景√×14√×不详HPV-DNA检测主要产品对比表hpage15©2010RocheSFDA认证FDA认证HPVHPV16/18分型有临床研究2012最新国际宫颈癌筛查指南16h2012最新国际宫颈癌筛查指南16h2012年刊登在美国癌症学会杂志(ACS)和美国阴道镜及宫颈病理学会杂志（ASCCP）

宫颈癌预防及早期诊断指南2012年刊登在美国癌症学会杂志(ACS)和美国阴道镜及宫颈2012年，ACS/ASCCP/ASCP最新指南

HPV联合细胞学筛查：30-65岁的妇女

Pap&HPVASC-US&HPV+or≥LSILNILM&HPV+Repeatco-testHPV16orHPV16/18genotypingColposcopy1year1yearNILM&HPV-ASC-US&HPV-Colposcopy5years+-+5years-SaslowD,etal.AmJClinPathol2012;137:516-42Cytologyaloneisnotedasanacceptable(butnotpreferred)optionforwomen30-65yrsoldevery3yearsimmediatelyhpage18©2010Roche2012年，ACS/ASCCP/ASCP最新指南

HPV联旧指南与新指南的区别1.ASC-UStriage(≥21years)

2.Adjunctscreening(≥30years)

ASC-USHPV

DNAColposcopyRe-screen

(LBC;1year)NegativeCytology(NILM)–+HPV

DNA++HPV16/18ColposcopyRe-screen

(LBC&HPV;1year)–+Screen

(≥3year)–Re-screen

(LBC&HPV;1year)Re-screen

(LBC;3years*acceptableORLBCandHPV;5years*preferred)Re-screen

(5years)co-testing(30-65years)Forwomen(30–65yrs),cytologyaloneevery3yearsisnotedasanacceptable(butnotpreferred)optiononly19h旧指南与新指南的区别1.ASC-UStriage(≥2联合检测将是未来的筛查方向！20h联合检测将是未来的筛查方向！20h212012年起，国际ACS，ASCCP，ASCP指南一同建议细胞学阴性、HPV16/18(+)的女性应立即进行阴道镜检查

2012ACS,ASCCP，ASCPGuidelines（美国癌症学会、美国阴道镜和宫颈病理学会，美国临床病理学会指南）21h212012年起，国际ACS，ASCCP，ASCP指南一同建谢谢！hpage22©2010Roche谢谢！hpage22©2010RocheHPV-DNA检测现状及2012最新国际宫颈癌筛查指南hpage0©2010RocheHPV-DNA检测现状及2012最新国际宫颈癌筛查指南hp内容：1.HPV介绍2.HPV-DNA检测产品及各自特点3.2012最新国际宫颈癌筛查指南hpage1©2010Roche内容：hpage1©2010RocheHPV介绍根据感染组织类型分为：皮肤组织粘膜组织hpage2©2010RocheHPV介绍根据感染组织类型分为：hpage2©2HPV介绍E：早期基因区编码早期6个蛋白L：晚期基因区编码晚期2个蛋白hpage3©2010RocheHPV介绍E：早期基因区编码早期6个蛋白hpage3感染后的存在状态：状态一：非整合状态状态二：整合到宿主细胞/nrc/journal/v2/n1/slideshow/nrc700_F1.html

HPV介绍hpage4©2010Roche感染后的存在状态：HPV-DNA检测（进口并取得FDA注册证）Logo公司SFDAFDAQIAGENYYHologicYYROCHEYYGen-probeNYhpage5©2010RocheHPV-DNA检测（进口并取得FDA注册证）Logo公司SFHPVDNA检测（国产）Logo公司SFDAFDA凯普YN亚能YN港龙YN金菩嘉YN透景YN之江YN达安YNhpage6©2010RocheHPVDNA检测（国产）Logo公司SFDAFDA凯普YN亚HPV-DNA检测（按不同原理分类）原理代表公司杂交捕获QIAGEN酶切信号放大HologicPCR荧光法ROCHE、港龙、达安、凯普、之江PCR-反向点杂交（PCR-膜杂交）亚能、凯普TMAGen-probe流式荧光杂交法透景hpage7©2010RocheHPV-DNA检测（按不同原理分类）原理代表公司杂交捕获QIHPVDNA检测QIAGENHC2原理：基于信号放大的酶标板技术的化学发光检测的核酸杂交检测方法（杂交捕获）流程：裂解－杂交－捕获－反应－冲洗－信号收集－判读时间：手工操作3.5小时，仪器操作4.5小时结果：检测13种HPV高危型，不分型主要问题：与个别HPV亚型会发生交叉反应，无内对照，约5%假阳性率DML2000hpage8©2010RocheHPVDNA检测QIAGENHC2原理：基于信号放大的酶标HPVDNA检测HologicCervistaHRHPV原理：基于专利Invader®酶切信号放大技术流程：磁珠分离核酸提取－酶切信号放大－荧光检测时间：4小时自动化孵育+2小时人工操作（半自动）结果：14种高危型16、31、33、52、58、18、39、45、66、68、51、56、66，不分型主要问题：可能与其它HPV如HPV67和70发生交叉反应，从而产生假阳性结果荧光测读仪温度循环仪hpage9©2010RocheHPVDNA检测HologicCervistaHRHPVHPVDNA检测HologicCervista(r)HPV16/18原理：基于专利Invader®酶切信号放大技术流程：磁珠分离核酸提取－酶切信号放大－荧光检测时间：4小时自动化孵育+2小时人工操作（半自动）结果：仅对16、18分型主要问题：可与高水平的高危型HPV31发生交叉反应。非常低的HPV感染或样本可能导致假阴性荧光测读仪温度循环仪hpage10©2010RocheHPVDNA检测HologicCervista(r)HPVHPVDNA检测ROCHEPCR－多色荧光探针法原理：基于PCR反应结合不同荧光染料的探针检测高危型HPV并对16、18分型流程：核酸提取－PCR扩增检测时间：5小时（手工操作时间15分钟）结果：Cutoff值，14种高危型，并对16、18分型最新产品，文献见美国ATHENA实验（LancetOncol）cobas4800HPV检测系统HR1618Contr.Ch1Ch2Ch3Ch4GT16高危型混合(12GT)GT1831,33,35,39,45,51,52,56,58,59,66,681618333139355145525658596668hpage11©2010RocheHPVDNA检测ROCHEPCR－多色荧光探针法原理：基于HPVDNA检测凯普21种人乳头状瘤病毒（HPV）分型检测试剂盒原理：PCR+基因芯片导流杂交技术流程：核酸提取—PCR扩增—导流杂交－显色时间：3.5-4个小时（手动）结果：21格某格显色即为某HPV亚型阳性（13+5+3），对21种HPV分型（含其它HPV亚型）主要问题：手工操作，易交叉污染，没有经过临床实验hpage12©2010RocheHPVDNA检测凯普21种人乳头状瘤病毒（HPV）分型检测试HPVDNA检测方法亚能人乳头瘤病毒基因分型(23型)检测试剂盒原理：使用自行设计的HPV基因组中的特异性引物，对待测样品中可能存在的HPV基因型进行PCR扩增并进行生物素标记，再将PCR扩增产物与固定在芯片上的23个特异性探针进行特异性的分子杂交，并通过化学显色方式判读结果(

PCR-反向点杂交法)流程：核酸提取—PCR扩增—导流杂交－显色结果：膜条显色直接提示感染的HPV亚型，23种亚型（18+5）（含其它HPV亚型）主要问题：手工操作，易交叉污染，没有经过临床实验hpage13©2010RocheHPVDNA检测方法亚能人乳头瘤病毒基因分型(23型)检测试HPVDNA检测透景luminex原理：流式荧光技术，PCR产物和微球上交联的探针根据碱基互补配对的原理杂交，加入荧光标记反应，最后在流式荧光检测仪上检测荧光信号。流程：核酸提取－PCR扩增－微球杂交－荧光标记反应－荧光分析结果：26种亚型（19+7），含其它HPV亚型主要问题：没有经过临床实验hpage14©2010RocheHPVDNA检测透景luminex原理：流式荧光技术，PCR

SFDA认证FDA认证HPV高危型HPV16/18分型有临床研究确认cut-off值仪器可扩展性罗氏cobas®4800√√14√√肿瘤靶向治疗基因突变检测凯杰Hc2√√13×

√×英硕力Cervista

√√14√/×

√×国产：亚能√×

14√×无自主仪器国产：凯普√×

14√×无自主仪器国产：港龙√×

13√×无自主仪器国产：透景√×14√×不详HPV-DNA检测主要产品对比表hpage15©2010RocheSFDA认证FDA认证HPVHPV16/18分型有临床研究2012最新国际宫颈癌筛查指南39h2012最新国际宫颈癌筛查指南16h2012年刊登在美国癌症学会杂志(ACS)和美国阴道镜及宫颈病理学会杂志（ASCCP）

宫颈癌预防及早期诊断指南2012年刊登在美国癌症学会杂志(ACS)和美国阴道镜及宫颈2012年，ACS/ASCCP/ASCP最新指南

HPV联合细胞学筛查：30-65岁的妇女

Pap&HPVASC-US&HPV+or≥LSILNILM&HPV+Repeatco-testHPV16orHPV16/18genotypingColposcopy1year1yearNILM&HPV-ASC-US&HPV-Colposcopy5years+-+5years-SaslowD,etal.AmJClinPathol2012;137:516-42Cytologyaloneisnotedasanacceptable(