筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体1、概念

动物细胞融合也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞形成一个细胞的过程一、动物细胞融合2、原理：膜的流动性一、动物细胞融合3、结果：形成杂交细胞。杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。4、诱导方法：聚乙二醇（PEG）、灭活的病毒、电激等。5、过程：3、过程：细胞相互凝集膜上蛋白质分子和脂质分子重新排布细胞膜打开细胞发生融合病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝集。6、优点：

突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能7、应用：用于研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培养等的重要手段。最重要的用途：制备单克隆抗体2、动植物细胞在结构上有何区别？这与它们杂交或融合过程有什么影响？3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？离心、振动、电激等物理方法；PEG等化学方法问题讨论动物细胞无细胞壁，动物细胞融合过程中不须去除细胞壁和再生出细胞壁。１、植物体细胞杂交最终得到的是完整的植物个体，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗？

不能，只能得到杂交细胞4、动物细胞融合能利用上述两类方法吗？还有其他方法吗？能，还可以利用灭活的病毒（生物方法）进行诱导问题讨论５、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？相同，都是细胞膜的流动性问题讨论6、为什么要用灭活的病毒？病毒一般对生物体是有伤害的。仙台病毒物理或化学方法丧失感染活性保留融合活性主要用于制备

单克隆抗体获得杂种植株物理、化学方法（同左）灭活的病毒

物理（离心、振荡、电激）化学（聚乙二醇）使细胞分散后诱导细胞融合去除细胞壁后诱导原生质体融合细胞膜的流动性细胞膜的流动性用途

诱导方法步骤

融合的原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目8、植物、动物细胞融合的比较抗体是由何种细胞产生的？2.抗体是如何产生的？？二、单克隆抗体（一）获得抗体的传统方法1、方法：向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，从动物血清中分离所需抗体。2、缺点：

产量少、纯度低、特异性差

..3、解决问题的设想:免疫反应过程中，每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。克隆单一的B淋巴细胞，形成细胞群，获得大量的单一抗体。4、面临的新问题：

一个B淋巴细胞不可能在体外培养条件下无限增殖的。

..1、如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？问题讨论提示：1.什么样的细胞可以产生抗体？2.什么样的细胞可以无限增殖？2、瘤细胞和癌细胞有何区别？共同点：两者都有无限增殖的能力不同点：瘤细胞不能转移

1、设计方案：一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖杂种细胞（二）单克隆抗体的制备2、单克隆抗体制备过程

注射抗原B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔单克隆抗体（选择性培养基）诱导其融合的方法有哪些？单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备BBBB瘤瘤瘤瘤１、细胞融合后培养液中有几种细胞？筛选杂种细胞思考：杂交瘤细胞２、制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？细胞融合技术、细胞培养技术3、单克隆抗体的概念：化学性质单一，特异性强的抗体4、单克隆抗体的优点：

特异性强，灵敏度高，并可大量制备。①诊断疾病（识别作用，如同位素标记单克隆抗体，可诊断肿瘤、心血管畸形等）（三）单克隆抗体的应用优点：准确、高效、简易、快速②用于治疗疾病和运载药物（主要用于癌症治疗，也可运载药物，如“生物导弹”）（导向作用，作为载体，生物导弹=单克隆抗体+药物，用于治疗肿瘤）（位置准确、疗效高、副作用小）小结两个过程动物细胞培养过程单克隆抗体制备过程三个“一”一个诱导细胞融合的新方法

——灭活病毒一个新细胞——杂交瘤细胞一个优势——单克隆抗体特异性强、灵敏度高的优势单克隆抗体

下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案2、该方案能达到预期效果吗？为什么？4、图中B为________过程，常用_________作为诱导剂，该细胞继承___________的遗传特性，既能__________,又能___________。1、该实验方案的目的是__________3、A是从小鼠的脾脏中取得_______,该细胞能够产生______5、C过程指细胞培养，该过程包括_____培养和_____培养两个阶段，其中_____代以内的的细胞属于细胞株。制备单克隆抗体B细胞抗体细胞融合灭活病毒双亲细胞分泌抗体无限增殖原代传代50B体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC世界上第一只克隆羊“多莉”的培育过程如图所示，请据图回答：乙甲abcdef(1)图中的甲为苏格兰绵羊，乙为多莉羊。那么，a和b是通过_______分裂形成的，其DNA含量是体细胞的_______；c肯定是__细胞，乙的遗传性状与提供___________的绵羊一致.减数一半体细胞核乙甲abcdef(2)产生甲和乙的过程分别是—————和————（3）在形成乙是的过程中，需要将d的细胞核取出，将c细胞核移入d细胞内，此技术叫———。所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是————————————————————————（4）绵羊的白色对黑色为显色。若甲是白色绵羊，要判断它是否纯合体，选用与它交配的绵羊最好是————-------------------------有性生殖克隆核移植卵细胞大，易于操作；卵细胞具有继续分化的潜能。黑毛乙甲abcdef（5）在产生多莉羊时，需将e细胞形成的早期胚胎移入另一头母羊（f）子宫里，这种技术在细胞工程中叫——————（6）继植物