细胞与基因治疗

基因与细胞治疗

由于现有的治疗心律失常的局限性，近年出现了以基因工程和细胞工程为基础的心律失常治疗新方案。基因治疗通过对靶细胞内某基因的修复和(或)替换来增强、补充、矫正或抑制该基因异常表达,使其表达产物即相应蛋白质的数量增加或减少,蛋白质功能增强或减低,从而影响疾病过程,最终达到治疗目的。快速性心律失常的基因治疗

治疗室性心动过速的研究集中于缩短复极时间，以防止因QT间期明显延长而导致的尖端扭转型(TdP)室性心动过速等致死性心律失常的发生。

hERG(humanether-a-go-go-relatedgene)基因编码延迟整合钾通道的快速成分

IKr,hERG突变可使IKr通道外向钾电流减少,QT间期延长,易于诱发室性心律失常。

在培养的兔心肌细胞(兔心肌细胞在体外培养几天后通常出现APD延长,EAD发生率明显增高)中转入hERG基因,使APD明显缩短,相对不应期明显增加,EAD发生率下降四倍多,且能抑制电交替。所以hERG基因可用于治疗与QT间期延长和复极离散度增加相关的室性心动过速。APD↓EAD发生率↓缓慢性心律失常的基因治疗1.增强起搏细胞的变时功能2.生物性的起搏细胞

增强起搏细胞的变时功能编码β2肾上腺素能受体的质粒注入约克猪的右房的起搏部位,上调肾上腺素能受体的表达。电生理的检测显示,心房组织的局部过表达肾上腺素能受体可以明显增强起搏组织的变时效应，使现存的或病变的起搏细胞的功能得到改善和加强。心速108→127→16350%↑

生物性的起搏细胞

起搏离子流If是一种超极化激活的内向离子流,它介导窦房结的四期自动除极。超极化激活的环核苷酸门控的(Hyperpolarizationactivatedcyclicnucleotidegated,HCN)通道是心脏起搏离子流If产生的基础。

HCN基因家族的四个成员目前发现在心脏中存在的有3个：HCN1、HCN2和HCN4。ECGleadsI,II,andRA,andLA(overlyinginjectionsite)electrogramsduringnormalsinusrhythminananesthetizeddogpreviouslyinjectedwithHCN2+GFP

（greenfluorescentprotein）intoLA(initial2beats).

将含有HCN2

基因的腺病毒注射入犬的左房（LA）。

4天后进行的电生理标测发现,当刺激迷走神经诱发出窦房结停搏后,左房的注射部位出现了自发性的左房节律。而只注射了GFP的对照犬则无任何的自发节律。

QuJetal.Circulation2003;107:1106-1109PacemakerfunctionininvitromodelmHCN2转染的hMSCs影响耦合的心脏细胞的兴奋性。综上，过表达HCN2基因可以增大起搏电流,使移植的心肌细胞具有起搏能力。PotapovaIetal.CirculationResearch2004;94:952-959

细胞治疗置入体外诱导出的治疗细胞或者将干细胞作为载体,进行基因改造。可从以下几个层面进行心律失常的治疗：替代心脏起搏、传导系统病变或缺失的细胞；移植基因工程化改造的细胞,表达某种离子通道,和受体组织细胞耦联,改变受体组织的电生理特性；移植细胞通过局部分泌一些重组蛋白改变心脏的电生理环境。

干细胞是一种具有多分化潜能和自我复制功能的早期未分化细胞，在特定的条件下可能分化为不同的功能细胞，形成多种组织和器官。

目前主要进行的是体外干细胞培养移植研究，包括胚胎干细胞（embryonicstemcell，ESC）、骨髓间充质干细胞（MesenchymalStemCells,MSCs）等。

胚胎干细胞（ESC）在体外并不仅仅分化为单个心肌细胞,而是可以形成功能性的心脏合胞体(syncytium),具有稳定的起搏和传导能力,并且对AD和ACh的刺激有反应。但由于来源有限,移植后可能存在免疫排斥反应,且涉及到伦理学问题,故有一定局限性。.早期心肌细胞小而圆的细胞更大和更细长的细胞几乎所有的心肌细胞，单核。Morphometricchangesinthecell'slength,width,area,andlength-to-widthratioduringinvitrocardiomyocytematuration.*P<0.05comparedwithbaselinemeasurements.

骨髓间充质干细胞（MSCs）在体内植入心肌后能向心肌细胞方向分化，表达心肌细胞多种蛋白：肌球蛋白重链(MHC)、间隙连接蛋白Cx43(Connexin43)、心肌锌指转录因子(GATA-4)等。故MSCs能作为治疗心脏疾病的一种移植细胞,替代部分受损心肌细胞。由于MSCs能通过骨髓穿刺反复收集、体外大量扩增,取材方便,扩增后自体回输,不必应用免疫抑制剂,成为近年来最具吸引力的心肌再生种子细胞。

在心肌梗死(myocardialinfarction,MI)治疗中有研究发现MSCs移植后能改善MI后心律失常的发生。这需要由MSCs分化的细胞具有自律性、兴奋性和传导性。

MSCs在5—aza诱导下能分化为具有自主搏动功能的心肌样细胞，且有关心肌细胞收缩的基因表达升高。诱导分化后MSCs有一定兴奋性,并与正常心肌细胞类似。诱导后MSCs向心肌细胞方向分化时发现CX43的表达增高，说明MSCs分化细胞有形成缝隙连接的能力，并具有一定传导功能。故MSCs能够作为治疗功能不全性心律失常的替代细胞。MSCs经5—aza诱导UpperpanelshowsimmunofluorescenceimagesofhMSCsstainedwithDiI(red).PijnappelsDAetal.Cardiova