蛋白质含量的测定方法

蛋白质含量的测定方法蛋口质的测定方法-凯氏微量法有手工滴定定氮和自动定氮仪定氮，实验者可根据经济条件设备而定。1.原理蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸钱。然后碱化蒸憎使氨游离，用过量硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋口质含量。2NH（CH）C00H+13HS0?（NH）S0+6C0+12S0+16H042222424222（NH）SO+2NaOH?2NH+2HO+NaSO42432242.方法本法参照GB5009.5-85,适用于各类食品及饲料中蛋白质的测定。3.试剂所有试剂均用不含氨的蒸憎水配制。试剂均为分析纯。1）硫酸铜2）硫酸钾3）浓硫酸4）2%硼酸溶液（或1%的硼酸）5）混合指示剂：1份0.1%MJ基红乙醇溶液与5份0.1%漠甲酚绿乙醇溶液临用时混合。也可用2份0.1%甲基红乙醇溶与1份0.1%次甲基蓝乙醇溶液临用时混合。6）饱和氢氧化钠:500g氢氧化钠加入500mL水中，搅拌溶解，）令却后放置数日，澄清后使用。）0.01mol/L或0.05mol/L盐酸标准溶液:需标定后使用（配制及标定方法见附录）4仪器1）消化炉；2）凯氏定氮蒸镭装置；3）万分之一电子天平4）凯氏定氮蒸憎装置:如图所示1热源2,烧瓶3.玻璃管4,橡皮管5（玻璃杯6.棒状玻塞7反应室8.反应室外壳9.夹子10・反应室中插管11.冷凝管12.锥形瓶13.石棉网图4微量凯氏蒸镭装置示意图smi弋正ft•淤miv.A*smi弋正ft•淤miv.A*1承打M.龄fairh3.wMAMII>他捋加以》hilWCRI加久操作步骤1样品处理:精密称取0.1、2.0g固体样品或2、育|半固体样品或吸取液体样品520mL,放入100mL或500mL凯氏烧瓶中，加入0.2g硫酸铜，0.3g硫酸钾及3、20mL浓硫酸，放置过夜后小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，取下放冷后用约2,10mL蒸憬水冲洗瓶璧，混匀后继续加热至液体呈蓝绿透明，取下放冷，小心加10、20mL水混匀，放)令后，移入100mL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空口实验。2按图装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处，加中基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。3向接收瓶内加入10mL,1、2%硼酸溶液及混合指示液1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10mL样品消化稀释液山小玻璃杯流入反应室，并以10mL水洗涤小烧杯使之流入反应室内，塞紧小玻璃杯的棒状玻璃塞。将3\0mL饱和氢氧化钠溶液倒入小玻璃杯中，提起玻璃塞使其缓缓流入反应室，立即将玻璃塞盖紧，并加水于小玻璃杯中以防漏气。加紧螺旋夹，开始蒸憎。蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸2min,移动接收瓶，使冷凝管下端离开液面，然后用少量中性水冲洗冷凝管下端外部，再蒸lmin取下接收瓶，以0.01或0.05mol/L盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。同时吸取10mL试剂空口消化液按5.3操作。计算X=(v-v)XcX0.014XB/mX100XF0式中:X—样品中蛋白质含量，g,100g;V—样品消耗盐酸标准液的体积，mL;V—空口消化液消耗盐酸标准液体积，mL：0c一盐酸标准液摩尔浓度,mol/L;0.014-lmol/L盐酸标准液1mL相当氮克数；B一定容体积/取液量；m—样品的质量，g；F—氮换算为蛋口质计算因子。蛋口质的氮素含量不同，故换算因子不同。详见下表。蛋白质计算因子食物计算因子:蛋，鱼，肉及制品，禽类，玉米，高粱，豆类，水果和蔬菜类6.25;乳及乳制品6.38;大米5.95;小麦面普通粉5.70;全麦，大麦，燕麦，裸麦，小米，小麦面全麦5.83;小麦5.80潢豆5.71;花生5.46;芝麻、向日葵、核桃和榛子5.30;金失皮6.317.举例设取样品0.1000g，消化后稀释£100mL。取10mL样品稀释液，标准盐酸为0.01mol/L,空白滴定为0.12mL,样品滴定用去的标准盐酸为3.21mL,测得样品中蛋白质百分率为：(3.21-0.12)X0.01X0.014X10,0.01X100X6.25,(3.21-0.12)X8.75,27.0%8.附录：(1)标准HC1溶液(0.1mol/LHC1)配制及标定：配制:量取9毫升HC1，加适量水稀释至1000毫升。标定:精确称取约0.15克左右在270,300?干燥至恒重的基准无水碳酸钠，加50毫升水使之溶解，加10滴澳中酚绿-中基红混合指示液，(量取30mL0.2%漠甲酚绿乙醇溶液，加入20mL0.1%中基红乙醇溶液，混匀)用配制的盐酸滴定至溶液山绿色变紫红色，煮沸2min,冷却至室温，继续滴定至溶液山绿色变为暗紫色。同时做试剂空口实验。(2)计算：C=m(V-V)XO.05300C—HC1标准滴定溶液的实际浓度，mol/L;m—基准无水碳酸钠的质量，g；V—HC1标准滴定溶液用量，mL;V一试剂空口HC1标准滴定溶液用量，mL;00.0530-1.00mLHC1标准滴定溶液(C(HC1)二lmol/L)相当基准无水碳酸钠go0.01mol/LHC1:精确吸取标定过的0.lmol/LHC110mL,准确稀释至100亳升。必要时重新标定浓度。9注意事项：干样用称量纸称重连纸一同消化，空白管同样放称量纸消化。含糖量高和油脂高的样品消化时容易溢出，加热要缓慢。稀释样品时消化液过热，加水反应猛烈使样品损失;消化液过冷，加水后盐析不溶解。食品中脂肪的测定方法GB5009.6-85酸水解法1原理:样品经酸水解后用乙g迷提取，除去溶剂即得游离及结合脂肪总量。2试剂：盐酸95%乙醇。乙服石油g迷。3仪器100mL具塞刻度量筒。4操作方法1.样品处理1）固体样品:精密称取约2g,置于50mL大试管内，力口8mL水，混匀后再加10mL盐酸。2）液体样品：称取10.。％置于50mL大试管内，加10mL盐酸。2.将试管放入70,80?水浴中，每隔5,lOmin以玻璃棒搅拌一次，至样品消化完全为止，约40,50mino3.取出试管，加入10mL乙醇，混合。冷却后将混合物移于lOOmL具塞量筒中，以25mL乙g迷分次洗试管，一并倒入量筒中。待乙g迷全部倒入量筒后，加塞振摇lmin，小心开塞，放出气体，再塞好，静置12min,小心