兽药残留的检测-hnbb

第十二章兽药残留的测定方国臻一.兽药残留与危害典型的兽药是指用于预防和治疗畜禽疾病的药物。但是，随着集约化养殖生产的开展，一些化学的、生物的药用成分被开发成具有某些功效的动物保健品或饲料添加剂，也属于兽药的范畴。兽药的主要用途有防病治病、促进生长、提高生产性能、改善动物性食品的品质等。兽药残留是指动物性产品的任何可食部分含有兽药母化合物或其代谢物。一.兽药残留的种类与危害兽药最高残留限量(MRLVD)是指某种兽药在食物中或食物表面产生的最高允许兽药残留量(单位μg／kg，以鲜重计)。兽药残留——主要是由于各种正常用药和药物滥用造成的。另外，休药期(是指自停止给药到动物获准屠宰或其动物性产品获准上市的间隔时间)过短，是造成动物性食品兽药残留过量的另一个重要原因。

兽药在动物性食品中的残留

兽药的原形化合物及其代谢物在动物的细胞、组织、器官或可食性产品（如奶、蛋）中的蓄积、贮存，称为食品动物的兽药残留。（狭义）化学物(Chemicals)残留：除兽药外还包括通过食物链进入动物体内的农药（如杀虫剂、除草剂等）和环境污染物(如重金属、霉菌毒素等)。（广义）在生产中大量使用抗菌药物、抗寄生虫药物及各种促生长制剂，这些药物都会以原形或以有活性的代谢产物形式随动物粪便、尿液或其他排泄物进入环境。这些物质在环境土壤、微生物、水生生物、植物等蓄积或贮存。兽药在生态环境中的残留

兽药残留的产生产生的途径兽药和添加剂的使用防治动物疫病使用药物添加剂环境污染物不遵守休药期的规定标签外用药:剂量、剂型、给药途径、疗程、适应症、动物非法使用违禁药物克伦特罗、己烯雌酚等污染饲料加工、贮藏、运输兽药残留产生的主要原因

兽药残留毒性急性毒性作用慢性毒性作用特殊毒性作用病原菌的耐药性对胃肠道菌丛的影响急性毒性克伦特罗（瘦肉精）中毒慢性毒性氯霉素、氨基糖苷类、灰黄霉素等雌激素类（己烯雌酚）、同化激素（苯丙酸诺龙）喹恶啉类（卡巴氧）硝基呋喃类（呋喃西林、呋喃他酮）砷制剂苯并咪唑类杀虫剂（666）氯羟吡啶、SM2等甲醛、苯酚等特殊毒性（“三致作用”）激素样作用用对内分泌功功能的影响响对生育能力力的影响儿童性早熟熟过敏反应青霉素类、、四环素类类、磺胺类类等对人类肠道道微生物的的影响破坏或抑制制人体胃肠肠菌群中敏敏感菌的生生长。导致条件性性病原菌的的大量繁殖殖或体外病病原菌侵入入肠道。改变肠道菌菌群的代谢谢活性，使使菌群改变变药物和食食物固有活活性和毒性性的的生物物转化能力力发生变化化。引起细菌耐耐药性的产产生，导致致人类感染染性疾病治治疗的失败败。二.常见兽兽药残留的的种类1．抗生素素类药物这类药物多为天然发发酵产物，是临床应应用最多的的一类抗菌药物，如青霉素素类、氨基基糖苷类、、大环内酯酯类、四环环素类、螺螺旋霉素、、链霉素、、土霉素、、金霉素等等。青霉素素类最容易易引发超敏敏反应，四四环素类、、链霉素有有时也能引引起超敏反反应。轻至至中度的超超敏反应一一般表现为为短时间内内出现血压压下降、皮皮疹、身体体发热、血血管神经性性水肿、血血清病样反反应等，极极度超敏反反应可能导导致过敏性性休克甚至至死亡。长长期摄入含含氨基糖苷苷类残留超超标的动物物性食品，，可损害听听力及肾脏脏功能。2．磺胺类类药物主要用于抗抗菌消炎，，如磺胺嘧嘧啶、磺胺胺二甲嘧啶啶、磺胺眯眯、菌得清清、新诺明明等。近年年来，磺胺胺类药物在在动物性食食品中的残残留超标现现象，在所所有兽药当当中是最严严重的。长长期摄入含含磺胺类药药物残留的的动物性食食品后，药药物可不断断在体内蓄蓄积。磺胺类药物物的毒性作作用损害泌尿系系统磺胺类药主主要经肾脏脏排出，在在尿中浓度度较高，其其溶解度又又较低，尤尤其当尿液液偏酸性时时，可在肾肾盂、输尿尿管或膀胱胱内析出结结晶，产生生刺激和阻阻塞，造成成泌尿系统统损伤，引引起结晶尿尿、血尿、、管型尿。。引起过敏反反应抑制造血系系统导致细菌产产生抗药性性磺胺类药物物结构磺胺类药物物的基本结结构为对氨氨苯磺酰胺胺，简称磺磺胺的衍生生物，具具有芳氨基基和磺酰胺胺基，多为为两性化合合物。常用的磺胺胺类药物的的化学结构构式：磺胺类药物物的分子结结构磺胺类药物物在兽医临临床上的应应用磺胺药对大大多数革兰兰氏阳性和和阴性细菌菌都有抑制制作用，在在食源性动动物的饲养养中，磺胺胺类药物不不仅作为兽兽药被广泛泛用于兽医医临床对细细菌感染性性疾病的防防治，有时时也被用作作饲料添加加剂。磺胺药的药药代动力学学磺胺药主要要在肝脏中中代谢，常常见的方式式是在对位位氨基处发发生乙酰化化，其次是是羟基化作作用。有的的磺胺药其其乙酰代谢谢物的水溶溶性低，易易在肾小管管内析出结结晶，而有有些代谢物物虽水溶性性较高，但但在酸性尿尿中也容易易结晶析出出，容易引引起结晶尿尿和肾并发发症。磺胺类药物物对食品的的污染使用过磺胺胺类药物的的动物，如如果不遵守守适当的休休药期，其其肌肉组织织、蛋和奶奶中就会被被残留的磺磺胺类药物物污染；短短期大剂量量或长期小小剂量给药药，很容易易造成磺胺胺类药物在在动物各组组织中蓄积积；当饲料或饮饮水被磺胺胺类药物污污染后，也也可导致动动物性食品品中磺胺类类药物残留留量严重超超标；很多研究表表明猪肉及及其制品中中磺胺药物物超标现象象时有发生生，特别是是致癌性的的磺胺二甲甲基嘧啶残残留给人类类的健康带带来了威胁胁。食品中磺胺胺类药物的的最高残留留限量英、美等国国家对磺胺胺类药物在在肉类及乳乳品中的允允许残留量量限制为100µµg·kg-1；欧盟第675/92号令中规定定了，在肉肉类及牛奶奶中磺胺的的最大残留留总量不得得超过100µµg·kg-1；日本要求的的最高残留留限量更严严格，单个个磺胺残留留限量为20µg·kg-1，最大残留留总量不得得超过100µµg·kg-1；我国对磺胺胺类药物在在肉类及乳乳品中的允允许残留量量限制为100µµg·kg-1。提取和净化化方法磺胺类药物物不易溶于于非极性溶溶剂，而在在极性较大大的溶剂中中溶解性较较好，一般般常用乙睛睛、氯仿、、二氯甲烷烷、丙酮、、或乙酸乙乙酯提取。。净化方法主主要有柱色色谱，TLC，液液液萃取（LLE），，固相萃取取（SPE）和基质质固相分散散萃取（MSPD））等。磺胺类药物物的HPLC法色谱谱条件常采用反相相硅胶柱对对待测物进进行分离，，主要有C18，C8或者C4柱，有有时也采用用离子对色色谱柱。流动相主要要由乙睛-水，甲醇醇-水或者者乙睛-甲甲醇-水按按不同比例例组成，也也有文献报报道采用乙乙醇-水系系统。在以以上流动相相系统中加加入适量乙乙酸或者十十二烷基磺磺酸钠（SDS）常常用于提高高分离效率率。磺胺类药物物的HPLC法色谱谱条件磺胺类药物物在色谱柱柱上的保留留值不仅受受流动相的的极性影响响，还会受受磺胺类药药物的解离离形式的影影响，因此此，流动相相的pH值值对色谱分分离的效果果起重要作作用。检测方法主主要有UV，FLD，DAD，或者MS。其中中UV检测测器是最常常用的检测测方法，波波长一般在在270-280nm，有有时用255nm。荧光检检测（FLD）的激激发波长一一般为405-420nm，发射波波长一般为为485-495nm。二二极管阵列列检测（DAD）常常采用267、268或263nm。MS由由于其高特特异性，一一般用于确确证实验。。3．硝基呋呋喃类药物物主要用于抗抗菌消炎，，如呋喃唑唑酮、呋喃喃西林、呋呋喃妥因等等。通过食食品摄入超超量硝基呋呋喃类残留留后，对人人体造成的的危害主要要是胃肠反反应和超敏敏反应。剂剂量过大或或肾功能不不全者，可可引起严重重毒性反应应，主要表表现为周围围神经炎、、嗜酸性白白细胞增多多、溶血性性贫血等。。长期摄人人可引起不不可逆性末末端神经损损害，如感感觉异常、、疼痛及肌肌肉萎缩等等，我国尚尚未制定硝硝基呋喃类类药物残留留检测标准准。4．抗寄生生虫类药物物这类药物主主要用于驱驱虫或杀虫虫，如苯并并咪唑、左左旋咪唑、、克球酚、、吡喹酮等等。而常用用的苯并咪咪唑类抗寄寄生虫药物物有丙硫苯苯咪唑、丙丙氧咪唑、、噻苯咪唑唑、甲苯咪咪唑、丁苯苯咪唑等。。食用残留有有苯并咪唑唑类药物的的动物性食食品，对人人主要的潜潜在危害是是致畸作用用和致突变变作用。对对于妊娠期期的孕妇有有可能发生生胎儿畸形形，如短肢肢、兔唇等等；对所有有消费者来来说，可能能由于其致致突变作用用使消费者者发生癌变变和性染色色体畸变，，从而其后后代有发生生畸形的危危险。5．激素类类药物这类药物主主要用于提提高动物的的繁殖和加加快生长发发育速度，，使用于动动物的激素素有性激素素和皮质激激素，而以以性激素最最常用，如如孕酮、睾睾酮、雌二二醇等。正正常情况下下，动物性性食品中天天然存在的的性激素含含量是很低低的，因而而不会干扰扰消费者的的激素代谢谢和生理机机能。但摄人性激激素残留超超标的动物物性食品，，可能会影影响消费者者的正常生生理机能，，并具有一一定的致癌癌性，可能能导致儿童童早熟、儿儿童发育异异常、儿童童异性趋向向等。三.兽兽药药残残留留分分析析技技术术概概述述兽药药残残留留分分析析技技术术的的特特点点待测测物物质质浓浓度度低低样品品基基质质复复杂杂，，干干扰扰物物质质多多兽药药残残留留代代谢谢产产物物多多样样或或不不明明动物物种种类类多多样样，，对对药药物物代代谢谢存存在在差差异异对检检测测方方法法的的要要求求快速速高通通量量(highthroughput)定量量准确确度度和和精精确确度度(accuracy&precision)确证证(unequinocalidentification)法定定的的和和QC理想想的的仪仪器器装装备备样品品经经简简单单处处理理即即可可上上机机测测定定不需需萃萃取取和和净净化化快速速、、准准确确的的定定量量分分析析自动动的的资资料料处处理理分析析方方法法的的总总体体思思路路高水水平平(LevelⅠⅠ)方方法法————确确证证和和定定量量被被分分析析物物质质中等等水水平平(LevelⅡⅡ)方方法法————定定量量但但不不需需要要确确证证被被分分析析物物质质低水水平平(LevelⅢⅢ)方方法法————筛筛选选四.兽兽药药残残留留分分析析与与监监测测残留留分分析析的的样样品品样品品的的前前处处理理残留留检检测测方方法法采样与样品制备（样品预处理）提取净化浓缩衍生化分辨检测样品处理测定分离残留分析原理残留留分分析析的的样样品品可食食性性组组织织及及产产品品肝、、肾肾、、肌肌肉肉、、脂脂肪肪、、皮皮肤肤、、血血液液奶、、蛋蛋其他他加加工工食食品品其他他毛发发、、尿尿、、粪粪便便等等取样样方方法法代表表性性原原则则、、随随机机采采样样各种种标标准准规规定定活体体检检测测一般般采采集集毛毛发发、、血血液液、、尿尿液液和和粪粪便便屠宰宰场场取取样样药物物的的靶靶组组织织其他他高高浓浓度度的的样样本本：：肝肝、、肾肾、、胆胆汁汁、、注注射射部部位位排泄泄物物：：尿尿液液样本本的的收收集集样本本的的贮贮存存容器器材材料料一般般为为玻玻璃璃或或塑塑料料硅烷烷化化处处理理防防止止器器皿皿壁壁对对痕痕量量残残留留组组分分的的吸吸附附塑料料吸吸附附脂脂溶溶性性物物质质玻璃璃表表面面吸吸附附碱碱性性物物质质预处处理理匀化化、、缩缩分分、、过过筛筛、、离离心心、、过过滤滤、、防防腐腐、、抑抑制制降降解解等等贮存存温温度度要要求求食品品中中磺磺胺胺类类兽兽药药残残留留的的液液相相色色谱谱测测定定样品品的的处处理理1.称称取取5.0g匀匀浆浆样样品品和和10g经经煅煅烧烧的的无无水水硫硫酸酸钠钠，，于于50mL二二氯氯甲甲烷烷，，均均质质提提取取1min，，3000r/min离离心心2min,上上清清液液经经快快速速滤滤纸纸过过滤滤到到200mL浓浓缩缩瓶瓶中中，，用用25mL二二氯氯甲甲烷烷重重复复提提取取一一次次，，合合并并二二氯氯甲甲烷烷，，35℃℃水水浴浴氮氮气气吹吹干干。。上上述述残残渣渣用用1.0mL1%（（v/v））乙乙酸酸-甲甲醇醇（（65+35））溶溶解解，，漩漩涡涡混混匀匀，，转转移移至至5mL的的离离心心管管中中，，加加3mL正正己己烷烷，，漩漩涡涡混混匀匀，，静静置置分分层层，，弃弃上上层层正正己己烷烷层层，，再再加加入入3mL正正己己烷烷，，涡涡漩漩混混匀匀，，3000r/min离离心心2min,下下层层用用0.45μμm有有机机滤滤膜膜过过滤滤，，供供液液相相色色谱谱测测定定。。基基质质干干扰扰大大的的样样品品，，需需要要固固相相萃萃取取柱柱如如下下的的净净化化步步骤骤。。2.下