人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件

人类细胞质RNA提取人类细胞质RNA提取1提取总RNA电泳合成cDNA第链PCR提取总RNA2真核细胞RNA的种类真核细胞总RNA主要由rRNA(80-85%)tRNA和核内小分子RNA(10-15%)、mRNA(15%)组成,其中rRNA、tRNA和mRNA位于细胞质中。大多数真核细胞mRNA在其3端均有一多聚A(PolyA)尾巴真核细胞RNA的种类3实验前的准备RNA实验失败的主要原因是RNA酶的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定,可耐受多种处理而不被灭活,如煮沸、高压灭菌等只要存在少量的RNA酶就会引起RNA的降:,而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果,所以建立一个无RNA酶的环境对于制备RNA很重要实验前的准备4常用的RNA酶抑制剂1、焦磷酸二乙酯(DEPC):与RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合,进而使RNA酶失活,有高致癌性。(实验准备阶段使用)2、异硫氰酸胍、氯仿:提取RNA同时也使:RNA酶失活。3、RNA酶的蛋白抑制剂(RNasin):从大鼠:肝或人胎盘中提取得来的酸性糖蛋白。(合成cDNA阶段使用常用的RNA酶抑制剂5人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件6人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件7人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件8人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件9人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件10人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件11人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件12人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件13人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件14人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件15人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件16人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件17人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件18人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件19人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件20人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件21人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件22人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件23人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件24人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件25人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件26人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件27人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件28人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件29人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件30人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件31人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件32人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件33人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件34人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件35人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件36人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件37人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件38人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件39人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件40人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件41人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件42人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件43人类细胞质RNA提取人类细胞质RNA提取44提取总RNA电泳合成cDNA第链PCR提取总RNA45真核细胞RNA的种类真核细胞总RNA主要由rRNA(80-85%)tRNA和核内小分子RNA(10-15%)、mRNA(15%)组成,其中rRNA、tRNA和mRNA位于细胞质中。大多数真核细胞mRNA在其3端均有一多聚A(PolyA)尾巴真核细胞RNA的种类46实验前的准备RNA实验失败的主要原因是RNA酶的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定,可耐受多种处理而不被灭活,如煮沸、高压灭菌等只要存在少量的RNA酶就会引起RNA的降:,而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果,所以建立一个无RNA酶的环境对于制备RNA很重要实验前的准备47常用的RNA酶抑制剂1、焦磷酸二乙酯(DEPC):与RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合,进而使RNA酶失活,有高致癌性。(实验准备阶段使用)2、异硫氰酸胍、氯仿:提取RNA同时也使:RNA酶失活。3、RNA酶的蛋白抑制剂(RNasin):从大鼠:肝或人胎盘中提取得来的酸性糖蛋白。(合成cDNA阶段使用常用的RNA酶抑制剂48人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件49人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件50人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件51人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件52人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件53人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件54人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件55人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件56人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件57人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件58人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件59人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件60人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件61人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件62人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件63人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件64人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件65人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件66人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件67人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件68人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件69人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件70人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件71人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件72人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件73人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件74人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件75人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件76人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件77人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件78人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件79人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课件80人类细胞质RNA提取RTPCR原理方法琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用课